【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及肿瘤治疗制剂领域，具体涉及一种无需抗原的生物可降解纳米制剂，及其用于光疗/免疫治疗联合起效的抗癌应用。
技术介绍
1、肿瘤是严重危害人类健康的重大疾病，其发病率、死亡率逐年上升，目前尚缺乏有效的治疗手段。肿瘤光疗，是利用光激活可控诱导肿瘤细胞凋亡的一种微创治疗方式，安全性相对较高。光疗主要包含光动力疗法(pdt)和光热治疗(ptt)，目前有不少抗肿瘤光疗研究以近红外光响应分子吲哚菁绿(icg)为活性成分实施光疗。事实上，仅通过光疗难以有效控制肿瘤的发生发展，因为pdt疗法中的单线态氧寿命短(μs级)，且扩散距离不足(<200nm)，很难对体积较大的肿瘤，以及复发转移瘤发挥治疗作用。对于光热抗肿瘤治疗，光疗时温度过高则会影响正常组织功能，甚至会引起免疫耐受。
2、随着研究的发展，研究者发现光疗还具有一定免疫治疗的抗肿瘤潜力，对于大肿瘤和复发转移瘤将发挥良好的治疗效果。当前常见的肿瘤免疫治疗纳米制剂，多需包载肿瘤相关抗原或肿瘤特异性抗原，以激活免疫系统对肿瘤组织的识别。其抗肿瘤效果与抗原类型、剂量及纳米制剂中的抗原稳定性密切相关，因此无需包载抗原的新型纳米制剂对普适型抗癌和简化纳米制剂制备具有良好的创新性。
3、激活肿瘤免疫原性死亡(icd)，是无需抗原包载的实施抗肿瘤免疫治疗的一种有效策略。肿瘤组织被诱导icd后，可以释放肿瘤相关抗原，从而完成抗原提呈细胞(apc)的招募和激活，发挥抗肿瘤转移和复发的治疗效果。经过光疗的濒死肿瘤细胞和细胞碎片将发挥肿瘤相关抗原作用，刺激树突状(dc)细胞
技术实现思路
1、针对抗肿瘤免疫治疗的这一主要应用目标，基于目前光疗递送体系的生物安全性和应用潜力设计有限的不足，本技术应用临床获批使用的近红外光响应分子吲哚菁绿(icg)为光疗活性组分，以fda批准被广泛用于医药领域的聚合物plga(聚乳酸-羟基乙酸共聚物)为递送辅料设计一种无抗原的纳米体系。plga由不同比例合成的乳酸和乙醇酸的共聚物组成，相对无机纳米体系具有生物相容性、生物降解性较强、低毒等应用优势。另一方面，考虑到icg主要以成像分子用于临床诊断，其光疗响应相对有限，因此应用具有免疫刺激效应的天然多糖茯苓多糖(pps)为佐剂成分，多管齐下增效icd过程，以增强整体免疫刺激效应，最终提升光疗抗肿瘤的有效性，有望对大肿瘤和复发转移瘤也发挥良好的治疗效果。
2、为实现上述目的，本专利技术通过以下方案实现予以实现：
3、一方面，提供一种无需抗原的生物可降解纳米制剂的制备方法，包括以下步骤：
4、s1.将plga溶于二氯甲烷，制成油相；将茯苓多糖和吲哚菁绿溶于水后得到内水相；将内水相加入油相中，超声震荡1-3min，形成稳定的w/o型初乳；
5、s2.将w/o型初乳加入质量分数为0.1-1％f68水溶液中，超声震荡4-6min，形成w/o/w型复乳；
6、s3.将w/o/w型复乳搅拌4-7h，离心后收集上清液，即得。
7、进一步地，所述s1的油相中，plga浓度为10-50mg/ml；或10-40mg/ml；或10-30mg/ml；或20-30mg/ml。
8、进一步地，所述s1的内水相中，吲哚菁绿浓度为0.1-5mg/ml；或0.1-3mg/ml；或0.1-2mg/ml；或0.1-1mg/ml；或0.3-1mg/ml；或0.5-0.8mg/ml。
9、进一步地，所述s1的内水相中，茯苓多糖浓度为1-20mg/ml；或1-15mg/ml；或5-15mg/ml；或8-15mg/ml；或8-12mg/ml。
10、进一步地，所述油相和内水相的体积比为(2-10)：1；或(2-8)：1；或(2-6)：1；或(3-5)：1。
11、进一步地，所述s2中，f68水溶液的质量分数为0.1-0.8％；或0.1-0.6％；或0.2-0.6％；或0.3-0.5％。
12、第二方面，提供一种无需抗原的生物可降解纳米制剂，所述纳米制剂为核壳结构，核壳结构内核为茯苓多糖和吲哚菁绿的混合水溶液，外壳为plga膜；茯苓多糖的载荷量为31±5％，吲哚菁绿的载荷量为24±5％。
13、进一步地，所述纳米制剂粒径为80-150nm。
14、第三方面，提供一种基于上述方法所制得的纳米制剂、上述纳米制剂在制备肿瘤药物中的应用。
15、第四方面，提供一种药物组合物，包括活性组分和药学上可接受的辅料；所述活性组分为上述的纳米制剂、上述方法所制得的纳米制剂。
16、进一步地，所述辅料包括溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂、润滑剂、稀释剂以及药物载体中的一种或多种。
17、进一步地，所述药物以纳米制剂为活性成分，用药学上可以接受的辅料制成药学上可以接受的剂型。
18、本领域技术人员充分了解的是，辅料(例如药用辅料)可以选自以下一种或多种：溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、渗透促进剂、ph值调节剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂与反絮凝剂、助滤剂、以及释放阻滞剂。
19、进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、针剂、缓释制剂、控释制剂或靶向制剂中的任意一种。
20、与现有技术相比，本专利技术的无需抗原的生物可降解纳米制剂以具有ptt/pdt光疗作用的分子、以多糖为佐剂制得纳米递送系统。通过光刺激诱导肿瘤凋亡和坏死，产生肿瘤抗原并激活抗肿瘤免疫效应，促进淋巴细胞增殖和细胞因子的分泌，增加cd4+t淋巴细胞和cd8+t淋巴细胞的肿瘤浸润比例，降低肿瘤部位treg细胞比例，并促进肿瘤相关巨噬细胞分泌细胞因子(il-6、tnf-α)，有效诱导ptt/pdt双模式光疗，促进树突状细胞成熟，重塑肿瘤免疫抑制微环境，增强肿瘤细胞对光疗和免疫治疗的响应度，有望提升肿瘤的临床治疗效果。
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1.一种无需抗原的生物可降解纳米制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种无需抗原的生物可降解纳米制剂的制备方法，其特征在于，所述S1的油相中，PLGA浓度为10-50mg/ml；或10-40mg/ml；或10-30mg/ml；或20-30mg/ml。
3.根据权利要求1所述的一种无需抗原的生物可降解纳米制剂的制备方法，其特征在于，所述S1的内水相中，吲哚菁绿浓度为0.1-5mg/ml；或0.1-3mg/ml；或0.1-2mg/ml；或0.1-1mg/ml；或0.3-1mg/ml；或0.5-0.8mg/ml。
4.根据权利要求1所述的一种无需抗原的生物可降解纳米制剂的制备方法，其特征在于，所述S1的内水相中，茯苓多糖浓度为1-20mg/ml；或1-15mg/ml；或5-15mg/ml；或8-15mg/ml；或8-12mg/ml。
5.根据权利要求1所述的一种无需抗原的生物可降解纳米制剂的制备方法，其特征在于，所述油相和内水相的体积比为(2-10)：1；或(2-8)：1；或(2-6)：1；或(3-5)：1
6.根据权利要求1所述的一种无需抗原的生物可降解纳米制剂的制备方法，其特征在于，所述S2中，F68水溶液的质量分数为0.1-0.8％；或0.1-0.6％；或0.2-0.6％；或0.3-0.5％。
7.一种无需抗原的生物可降解纳米制剂，其特征在于，所述纳米制剂为核壳结构，核壳结构内核为茯苓多糖和吲哚菁绿的混合水溶液，外壳为PLGA膜；茯苓多糖的载荷量为31±5％，吲哚菁绿的载荷量为24±5％。
8.根据权利要求7所制得的纳米制剂，其特征在于，所述纳米制剂粒径为80-150nm。
9.根据权利要求1-6任一项所述方法所制得的纳米制剂、权利要求7或8所述的纳米制剂在制备肿瘤药物中的应用。
10.一种药物组合物，其特征在于，包括活性组分和药学上可接受的辅料；所述活性组分为权利要求7或8所述的纳米制剂、权利要求1-6任一项所述方法所制得的纳米制剂。
...【技术特征摘要】
1.一种无需抗原的生物可降解纳米制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种无需抗原的生物可降解纳米制剂的制备方法，其特征在于，所述s1的油相中，plga浓度为10-50mg/ml；或10-40mg/ml；或10-30mg/ml；或20-30mg/ml。
3.根据权利要求1所述的一种无需抗原的生物可降解纳米制剂的制备方法，其特征在于，所述s1的内水相中，吲哚菁绿浓度为0.1-5mg/ml；或0.1-3mg/ml；或0.1-2mg/ml；或0.1-1mg/ml；或0.3-1mg/ml；或0.5-0.8mg/ml。
4.根据权利要求1所述的一种无需抗原的生物可降解纳米制剂的制备方法，其特征在于，所述s1的内水相中，茯苓多糖浓度为1-20mg/ml；或1-15mg/ml；或5-15mg/ml；或8-15mg/ml；或8-12mg/ml。
5.根据权利要求1所述的一种无需抗原的生物可降解纳米制剂的制备方法，其特征在于，所述油...
【专利技术属性】
技术研发人员：俞捷，孟萌，史琳瑄，王朔，王乐囡，杨兴鑫，张国琼，宋成竹，张美，
申请(专利权)人：云南中医药大学，
类型：发明
国别省市：
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