【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，具体是一种用于预测食管鳞状细胞癌(escc)放疗敏感性的生物联合标志物及其应用，生物联合标志物涉及ezh2、enosf1、pgm5三个生物标志物。
技术介绍
1、食管癌(esophagus cancer)是全球第八大最常见的癌症，也是导致癌症相关死亡的第六大原因。其中，食管鳞状细胞癌(escc)是我国食管癌的主要组织学类型，是一种具有高侵袭性和较低生存率的肿瘤，5年总生存率小于30％。
2、放疗(rt)是食管鳞状细胞癌escc的主要治疗方案之一，但由于escc细胞固有的放射耐药性，放疗效果常常受到限制。因此，寻找预测escc放疗面感性的生物标志物，对促进临床中escc病人的放疗效果具有重大意义。
3、目前，公开发表的文献已揭示了ezh2和escc放化疗敏感性的相关性，但并未进行roc曲线分析来阐明ezh2预测放疗疗效的敏感性和特异性，也并未明确ezh2高低表达预测escc放疗敏感性的最佳截断值。由于ezh2调控放疗敏感性的分子网络较复杂，联合ezh2及其下游分子用于预测escc放疗敏感性是否优于单独使用ezh2仍有待明确。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种用于预测食管鳞状细胞癌放疗敏感性的生物联合标志物及其应用，以解决上述现有技术存在的不足，本专利技术所述的生物联合标志物可以预测人食管鳞状细胞癌组织的放疗敏感性，对于评估escc的放疗敏感性和指导临床个性化治疗具有重要的临床价值。
2、第一方面，本专利技术公开了
3、进一步的，所述的生物联合标志物中，ezh2在食管鳞状细胞癌患者肿瘤组织中的表达水平越高，表示患者对放射性治疗的敏感性越低，enosf1和pgm5在escc食管鳞状细胞癌患者肿瘤组织中的表达水平越高，表示患者对放射性治疗的敏感性越高。
4、第二方面，本专利技术公开了一种所述物联合标志物的应用，基于本专利技术所述物联合标志物构建了一种预测食管鳞状细胞癌放疗敏感性的预测模型。
5、进一步的，所述预测模型的计算公式为：
6、logit(p)＝9.992+2.898×ezh2-3.170×enosf1-2.613×pgm5
7、其中，p为事件发生的概率，即判断食管鳞状细胞癌患者对于放疗敏感性高低和放疗后是否复发的概率，eah2、enosf1和pgm5分别表示ezh2、enosf1和pgm5的表达评分，评分基于免疫组化实验结果，采取irs评分体系进行量化(评分范围为：0-12)。
8、进一步的，eah2、enosf1和pgm5的表达评分方式为，使用免疫组化染色方法检测eah2、enosf1和pgm5的表达，根据染色强度和阳性染色细胞的百分比，使用irs评分确定表达评分，具体评分计算方法如下：
9、1)、将染色强度分为四个等级：
10、0分：无阳性着色；1分：淡黄色；2分：棕黄色，3分：棕褐色。
11、2)、将阳性染色的细胞占比分为四个区间：
12、1分：＜5％的细胞呈阳性；2分：5％-25％的细胞呈阳性；3分：25％-75％的细胞呈阳性；4分：>75％的细胞呈阳性。
13、3)、评分公式：irs＝染色强度×阳性细胞占比，得分范围在0-12分。
14、4)、对于细胞核表达的ezh2，按照评分公式计算蛋白的表达评分；对于细胞质表达的enosf1和pgm5，若在免疫组化组染色中可以检测到，即只要有阳性染色的细胞，其阳性细胞占比均为100％，即4分，并按照以上评分公式计算enosf1和pgm5的表达评分。
15、进一步的，所述免疫组化染色方法，具体步骤如下：
16、步骤一、组织脱蜡及抗原修复：
17、将石蜡包埋的escc肿瘤组织样本以4μm厚切片，在60℃下烘烤40分钟。然后用二甲苯对切片进行脱石蜡处理，并用乙醇梯度脱水，在微波炉中将切片放入乙二胺四乙酸缓冲液中加热10分钟，冷却5分钟后再加热5分钟；
18、步骤二、采用链霉亲和素-过氧化物酶(sp)进行免疫组化染色：
19、1)、用3％过氧化氢阻断内源性过氧化物酶的活性，切片随后分别与抗ezh2、enosf1、pgm5的一抗在4℃孵育过夜(孵育时间不低于8小时)；
20、2)、接着，用辣根过氧化物酶结合的抗鼠或抗兔二抗在室温下孵育1小时；
21、3)、用3,3'-二氨基联苯胺四盐酸盐(dab染料)处理1-5分钟，视染色强度进行优化；
22、4)、染色结束后，用水冲洗切片；
23、5)、用苏木精反染切片约0.5-1分钟，清水冲洗约15分钟反蓝；
24、6)、随后，使用烘箱烘干切片后，用中性树胶装片；
25、7)、最后，使用白光显微镜观察染色结果，苏木精染色的细胞核呈蓝色，3,3'-二氨基联苯胺四盐酸盐染色阳性的细胞核呈黄色。
26、有益效果：专利技术首次将ezh2、enosf1、pgm5作为联合生物标志物预测食管鳞状细胞癌放疗敏感性。本专利技术通过检测待escc病人组织样本中的ezh2、enosf1、pgm5的表达，并绘制ezh2、enosf1、pgm5作为联合标志物的综合roc曲线。与单独使用ezh2作为标志物或单独使用enosf1作为标志物或单独使用pgm5作为生物标志物绘制的roc曲线相比，ezh2、enosf1、pgm5作为联合标志物的roc曲线的曲线下面积为0.989，其曲线下面积较单独使用ezh2作为标志物或单独使用enosf1作为标志物或单独使用pgm5作为生物标志的曲线下面积有显著提高。由此说明，与单独使用ezh2作为标志物或单独使用enosf1作为标志物或单独使用pgm5作为标志物预测escc放疗敏感性相比，将ezh2、enosf1、pgm5作为联合标志物预测escc放疗敏感性，具有更准确的预测性能，将ezh2、enosf1、pgm5作为联合标志物进行具有广阔前景和临床应用价值。
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1.一种用于预测食管鳞状细胞癌放疗敏感性的生物联合标志物，其特征在于，所述生物联合标志物包括EZH2、ENOSF1和PGM5。
2.根据权利要求1所述的生物联合标志物，其特征在于，EZH2在食管鳞状细胞癌患者肿瘤组织中的表达水平越高，表示患者对放射性治疗的敏感性越低，ENOSF1和PGM5在食管鳞状细胞癌患者肿瘤组织中的表达水平越高，表示患者对放射性治疗的敏感性越高。
3.一种预测食管鳞状细胞癌放疗敏感性的预测模型，其特征在于，所述预测模型基于权利要求1所述的生物联合标志物进行构建。
4.根据权利要求3所述的预测模型，其特征在于，所述预测模型的计算公式为：
5.根据权利要求4所述的预测模型，其特征在于，EAH2、ENOSF1和PGM5的表达评分方式为，使用免疫组化染色方法检测EAH2、ENOSF1和PGM5的表达，根据染色强度和阳性染色细胞的百分比，使用IRS评分确定表达评分，具体评分计算方法如下：
6.根据权利要求5所述的预测模型，其特征在于，所述免疫组化染色方法，具体步骤如下：
【技术特征摘要】
1.一种用于预测食管鳞状细胞癌放疗敏感性的生物联合标志物，其特征在于，所述生物联合标志物包括ezh2、enosf1和pgm5。
2.根据权利要求1所述的生物联合标志物，其特征在于，ezh2在食管鳞状细胞癌患者肿瘤组织中的表达水平越高，表示患者对放射性治疗的敏感性越低，enosf1和pgm5在食管鳞状细胞癌患者肿瘤组织中的表达水平越高，表示患者对放射性治疗的敏感性越高。
3.一种预测食管鳞状细胞癌放疗敏感性的预测模型，其特征在于，所述预测模型基于权利要...
【专利技术属性】
技术研发人员：童铸廷，周曙光，潘华光，陈香存，查天麒，吴黎明，陈象迅，朱宁，邢俊，管嘉昊，潘桂珍，
申请(专利权)人：安徽医科大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：
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