【技术实现步骤摘要】
(一)本专利技术属于微生物发酵应用领域，具体涉及一种利用米根霉xb4-16提高杏鲍菇总黄酮提取得率的方法。
技术介绍
0、(二)
技术介绍
1、杏鲍菇是担子菌门(basidiomycota)侧耳科(pleurotaceae)真菌pleurotuseryngii的子实体，又称刺芹侧耳或雪茸。因杏鲍菇的菌肉肥厚，质地脆嫩，具有杏仁香味和鲍鱼般的口感，因此而得名。杏鲍菇原产于日本，后逐渐分布于欧洲地中海区域、中东、北非以及亚洲部分地区，我国四川、青海、新疆也有野生杏鲍菇分布。自1958年首次人工栽培成功后，杏鲍菇在世界各国都有人工栽培，我国的台湾、福建省、江苏省、浙江省和上海等地都有大规模栽培。
2、杏鲍菇含有丰富的营养成分，包括多糖、蛋白质、多肽、脂肪、黄酮、维生素、甾醇等，所以它不仅营养丰富、美味可口，更具有多种药用和保健功效，如降脂降压、增强免疫力、美容养颜等，对糖尿病患者也有调节血糖的作用。近些年来，食用菌中的黄酮类物质备受人们关注，其具有较好的抗氧化、免疫增强、抗感染、抗菌、抗病毒、抗过敏等多种生物活性，作为一种天然物质，具有较高的安全性，可以广泛应用于食品、药物和保健品中。2023年，我国杏鲍菇年产量已达200多万吨，且每年以大于20％的速度在增长，已面临供过于求的局面。杏鲍菇中黄酮含量较高，从杏鲍菇中提取黄酮并将其应用于食品领域具有广阔的前景，也能推动杏鲍菇栽培产业发展。
3、目前，已有不少关于从杏鲍菇中提取总黄酮的研究报道，在报道的研究中，总黄酮提取的方法主要是乙醇水溶液提取法。常规乙
4、近年来，酶解技术在天然活性物质的提取中得到广泛应用，这种方法具有条件温和，对活性成分结构破坏小，能显著提高产物提取得率等优点。酶解辅助提取方法中，使用最多的是纤维素酶，其次是果胶酶和蛋白酶。植物或食用菌的细胞壁构成包括纤维素、半纤维素、木质素和果胶等物质，所以单一使用一种酶，对提高产物提取得率有限，许多研究同时使用多种酶(复合酶)，如果酶的使用量较大，无疑增加了提取成本。
5、目前，商品化的纤维素酶、半纤维素和蛋白酶等都是利用微生物发酵生产，所以，如果利用某种微生物直接发酵待提取的原料，微生物在生长中产生多种水解酶，就能水解原料的细胞壁中的纤维素、果胶和蛋白质等物质，从而有利于细胞内黄酮的释放，当然，微生物也可能产酶分解黄酮，但可以选择合适的发酵菌种，控制好发酵程度，达到酶解破坏细胞壁，但又尚未产酶降解黄酮，从而使得总黄酮提取得率显著提高，而且相比于酶解法提取，微生物发酵辅助提取法节省了酶的成本。
6、为了克服从杏鲍菇提取总黄酮得率低的问题，本专利技术对杏鲍菇做微生物发酵预处理，再采用乙醇水溶液超声提取，可使杏鲍菇总黄酮的提取得率大幅度提高。
技术实现思路
0、(三)
技术实现思路
1、本专利技术目的是提供一种利用米根霉xb4-16提高杏鲍菇总黄酮提取得率的方法，本专利技术筛选得到一株新微生物菌株—米根霉(rhizopus oryzae)xb4-16，杏鲍菇经该菌株发酵后，再经乙醇水溶液超声提取，总黄酮提取得率显著提高。
2、本专利技术采用的技术方案：
3、本专利技术为了提高杏鲍菇总黄酮提取得率，筛选得到一株新微生物菌株—米根霉(rhizopus oryzae)xb4-16，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号gdmcc no:65283，保藏日期2024年10月24日，地址：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼；邮编510070。
4、本专利技术所述米根霉xb4-16，是从杏鲍菇的微生物富集培养物中分离，经过筛选并诱变选育获得的优良菌株，其形态特征如下：在马铃薯葡萄糖琼脂(pda)平板培养基上，28℃条件下培养，菌落初期为灰白色，绒毛状，24h后逐渐变为灰色，菌丝层较厚、疏松，48h即可长满培养皿，表面有灰色孢子，菌落背面灰白色。匍匐菌丝和假根明显；孢子囊梗直立或稍弯曲，2～4株成束，与假根对生，多形成伞状聚合；孢子囊球形或近球形、浅黑色；孢囊孢子呈椭圆形或球状，大小不均，直径3～6μm。
5、所述米根霉xb4-16的核糖体dna内转录间隔区(ribosomal dnainternaltranscribed spacer，rdna-its)核苷酸序列为seq id no.1所示。
6、本专利技术提供一种利用所述米根霉xb4-16提高杏鲍菇总黄酮提取得率的方法，所述方法包括以下步骤：(1)向杏鲍菇粉中加入米根霉xb4-16的孢子液，搅拌均匀后于28～30℃发酵48～56h，获得杏鲍菇发酵物；(2)向杏鲍菇发酵物中加入去离子水，搅拌均匀后于35～40℃保温2～4h，再补充无水乙醇，经超声提取后过滤，获得杏鲍菇提取液；(3)杏鲍菇提取液经减压蒸干，无水乙醇溶解和干燥后，得杏鲍菇总黄酮提取物。
7、进一步，所述步骤(1)中的杏鲍菇是人工栽培的侧耳科真菌pleurotus eryngii的成熟子实体。所述的杏鲍菇粉是新鲜杏鲍菇切片后，经85℃烘干至恒重，粉碎后过60目筛的细粉。
8、进一步，所述步骤(1)中的米根霉xb4-16孢子液的制备方法为：低温保存的米根霉xb4-16孢子接种于马铃薯葡萄糖琼脂(pda)平板培养基上，于28℃培养36～48h后，加无菌蔗糖水溶液于培养物中，用接种环搅动使孢子悬浮，获得孢子液；优选将孢子液用无菌蔗糖水溶液调整孢子浓度为4×106～7×106个/ml。所述的pda平板培养基终浓度组成为：马铃薯150～200g/l(切成边长为1cm大小的方块，加水煮沸20min，去渣留汁)，蔗糖20g/l，mgso4·7h2o 1～2g/l，溶剂为自来水，ph 6.0～6.5，高压蒸汽121℃灭菌15min。所述的无菌蔗糖水溶液中蔗糖浓度为50g/l，高压蒸汽115℃灭菌20min。
9、进一步，所述步骤(1)中的米曲霉xb4-16的孢子液体积用量以杏鲍菇粉质量计为1.0～1.2ml/g。
10、进一步，所述步骤(2)中的杏鲍菇提取液的制备方法为：杏鲍菇发酵物中加入去离子水，搅拌均匀后于35～40℃保温2～4h，然后补充无水乙醇，转入水温50～60℃的超声波清洗机中，100～200w超声提取20～30min，超声提取结束后，布氏漏斗抽滤，收集滤液，获得杏鲍菇提取液。所述去离子水的体积加入量以原料杏鲍菇粉质量计为6～7ml/g；所述的无水乙醇体积加入量是去离子水体积的1.5～2.0倍。
11、进一步，所述的步骤(3)中的杏鲍菇总黄酮提取物的制备方法为：将杏鲍菇提取液于45℃、–0.1mpa条件下蒸馏至无液体流本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种利用米根霉XB4-16提高杏鲍菇总黄酮提取得率的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)向杏鲍菇粉中加入米根霉(Rhizopus oryzae)XB4-16的孢子液，搅拌均匀后于28～30℃发酵48～56h，获得杏鲍菇发酵物；所述米根霉XB4-16保藏编号GDMCC No:65283；(2)向杏鲍菇发酵物中加入去离子水，搅拌均匀后于35～40℃保温2～4h，再补充无水乙醇，经超声提取后过滤，获得杏鲍菇提取液；(3)杏鲍菇提取液经减压蒸干，无水乙醇溶解和干燥后，得杏鲍菇总黄酮提取物。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)所述的杏鲍菇粉是新鲜杏鲍菇切片后，经85℃烘干至恒重，粉碎后过60目筛的细粉。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的米根霉XB4-16孢子液的制备方法为：低温保存的米根霉XB4-16孢子接种于PDA平板培养基上，于28℃培养36～48h后，加无菌蔗糖水溶液于培养物中，用接种环搅动使孢子悬浮，获得孢子液。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，将孢子液用无菌蔗糖水溶液调整孢子浓
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的米曲霉XB4-16的孢子液体积用量以杏鲍菇粉质量计为1.0～1.2mL/g。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中的杏鲍菇提取液的制备方法为：杏鲍菇发酵物中加入去离子水，搅拌均匀后于35～40℃保温2～4h，然后补充无水乙醇，转入水温50～60℃的超声波清洗机中，100～200W超声提取20～30min，超声提取结束后，布氏漏斗抽滤，收集滤液，获得杏鲍菇提取液。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述去离子水的体积加入量以原料杏鲍菇粉质量计为6～7mL/g；所述的无水乙醇体积加入量是去离子水体积的1.5～2.0倍。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中的杏鲍菇总黄酮提取物的制备方法为：将杏鲍菇提取液于45℃、–0.1MPa条件下蒸馏至无液体流出，加入体积为原料杏鲍菇粉质量计0.4～1.0mL/g的无水乙醇，充分振荡后于5000～8000r/min离心5～10min，上清液于转入一洁净培养皿中，50℃、–0.1MPa条件下真空干燥至恒重，得总黄酮提取物。
9.一种用于权利要求1提高杏鲍菇总黄酮提取得率的米根霉(Rhizopus oryzae)XB4-16，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号GDMCC No:65283，保藏日期2024年10月24日，地址：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼；邮编510070。
...【技术特征摘要】
1.一种利用米根霉xb4-16提高杏鲍菇总黄酮提取得率的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)向杏鲍菇粉中加入米根霉(rhizopus oryzae)xb4-16的孢子液，搅拌均匀后于28～30℃发酵48～56h，获得杏鲍菇发酵物；所述米根霉xb4-16保藏编号gdmcc no:65283；(2)向杏鲍菇发酵物中加入去离子水，搅拌均匀后于35～40℃保温2～4h，再补充无水乙醇，经超声提取后过滤，获得杏鲍菇提取液；(3)杏鲍菇提取液经减压蒸干，无水乙醇溶解和干燥后，得杏鲍菇总黄酮提取物。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)所述的杏鲍菇粉是新鲜杏鲍菇切片后，经85℃烘干至恒重，粉碎后过60目筛的细粉。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的米根霉xb4-16孢子液的制备方法为：低温保存的米根霉xb4-16孢子接种于pda平板培养基上，于28℃培养36～48h后，加无菌蔗糖水溶液于培养物中，用接种环搅动使孢子悬浮，获得孢子液。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，将孢子液用无菌蔗糖水溶液调整孢子浓度为4×106～7×106个/ml，所述的无菌蔗糖水溶液中蔗糖浓度为50g/l。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的米曲霉xb4-16的孢子液体积用量以杏鲍菇...
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