【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种用于检测非洲猪瘟病毒i型和ii型的多重荧光定量pcr试剂盒及其应用。
技术介绍
1、非洲猪瘟(african swine fever，east african swine fever，asf)是一种急性、发热传染性很高的滤过性病毒所引起的猪病，其特征是发病过程短，但死亡率高达100％，病猪临床表现为发热，皮肤发绀，淋巴结、肾、胃肠粘膜明显出血。
2、目前尚无安全有效的疫苗用于预防asf，也无有效药物进行治疗，一旦确定是asf，扑杀是唯一的处理方法，以免造成更多猪群感染。因此，要实现对asf疫情的控制，只能从监测和早期诊断出发。由于asf的发病症状与其他多种猪病的症状相似，所以临床上鉴别诊断有很大困难，还需要依靠实验室诊断确诊，并且asfv潜伏期较长，抗体只有在病毒感染一定时期后才会出现，因此抗原检测目前是早期筛查的有效手段。目前，鉴定asfv抗原的方法主要有pcr、荧光定量pcr、玫瑰花环法(had)和直接免疫荧光技术(dif)。常规pcr方法灵敏度和特异性都较低；玫瑰花环法容易出现假阴性，有些不吸附红细胞的asfv毒株会被误判为阴性；直接免疫荧光技术(dif)有较高敏感性和特异性，但要求较高技术和荧光显微镜，且耗时长。而荧光定量pcr技术具有高灵敏性、高特异性，操作简便，安全无污染，重复性好等优点，因此，利用荧光定量技术对asfv进行早期诊断和快速筛查，对防控asf十分必要。
3、而目前商品化的非洲猪瘟荧光定量pcr检测试剂盒大多为单一基因的pcr扩增，无法快速而又准确的
技术实现思路
1、本专利技术旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提出一种用于检测非洲猪瘟病毒的多重荧光定量pcr检测试剂，能够快速、灵敏的检测非洲猪瘟病毒i型和ii型。
2、本专利技术还提出一种用于检测非洲猪瘟病毒的芯片
3、本专利技术还提出一种具有上述多重荧光定量pcr检测试剂或芯片的试剂盒。
4、本专利技术还提出上述荧光pcr检测试剂、芯片或试剂盒的应用。
5、本专利技术还提出一种非疾病诊断治疗目的的检测非洲猪瘟病毒的方法。
6、本专利技术还提供一种用于检测非洲猪瘟病毒的系统。
7、根据本专利技术的一个方面，提出了一种用于检测非洲猪瘟病毒的多重荧光定量pcr检测试剂，所述多重荧光定量pcr检测试剂包括用于检测b646l基因的第一引物探针组、用于检测mgf_110基因的第二引物探针组和用于检测ep402r基因的第三引物探针组；
8、所述第一引物探针组中，引物的序列如seq id no:1、seq id no:2所示；探针的序列如seq id no:3所示；
9、所述第二引物探针组中，引物的序列如seq id no:4、seq id no:5所示；探针的序列如seq id no:6所示；
10、所述第三引物探针组中，引物的序列如seq id no:7、seq id no:8所示；探针的序列如seq id no:9所示。
11、根据本专利技术的一些实施例，所述探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。
12、根据本专利技术的一些实施例，所述荧光报告基团包括但不限于fam、rox、cy5、hex、joe、cy3、ned、tamra、taxas red、vic和tet中的任一种。
13、根据本专利技术的一些实施例，所述荧光淬灭基团包括但不限于super quenther 1、bhq、tamra、mgb和dabcyl中的任一种。
14、根据本专利技术的一些实施例，所述多重荧光定量pcr检测试剂还包括pcr预混液。
15、根据本专利技术的一些实施例，所述pcr预混液包括dntp、mg2+、ung酶、taq dna聚合酶、反应缓冲液、pcr稳定剂中的至少一种。
16、根据本专利技术的一些实施例，所述pcr预混液为2×fastampli premix-ungⅳ。
17、在本专利技术的一些实施方式中，所述非洲猪瘟病毒包括非洲猪瘟病毒i型和ii型。
18、根据本专利技术的第二方面，提出了一种用于检测非洲猪瘟病毒的芯片，所述芯片含有上述多重荧光定量pcr检测试剂的冻干粉。
19、根据本专利技术的一些实施例，所述芯片为mems芯片。
20、根据本专利技术的第三方面，提出了一种试剂盒，所述试剂盒含有上述多重荧光定量pcr检测试剂或上述用于检测非洲猪瘟病毒的芯片。
21、根据本专利技术的一些实施例，所述试剂盒还包括阳性对照品和阴性对照品中的至少一种。
22、根据本专利技术的一些实施例，所述阳性对照品包括含有非洲猪瘟病毒基因b646l、mgf_110或ep402r的质粒。
23、根据本专利技术的一些实施例，所述阴性对照品包括水。
24、在本专利技术的第四方面，提出了上述多重荧光定量pcr检测试剂、芯片或试剂盒的应用，所述应用为在制备检测或辅助检测非洲猪瘟病毒的产品中的应用。
25、根据本专利技术的一些实施例，所述产品选自试剂盒或芯片。
26、在本专利技术的第五方面，提出了一种非疾病诊断治疗目的的检测非洲猪瘟病毒的方法，所述方法包括以下步骤：采用上述多重荧光定量pcr检测试剂、芯片或试剂盒对待测样本dna进行检测。
27、根据本专利技术的一些实施例，所述检测采用荧光定量pcr进行。
28、根据本专利技术的一些实施例，所述荧光定量pcr的反应体系为：
29、fastampli premix-ungⅳ1×；
30、第一引物探针组中的正向引物序列 80-120nm；
31、第一引物探针组中的反向引物序列 80-120nm；
32、第一引物探针组中的探针序列 40-60nm；
33、第二引物探针组中的正向引物序列 180-220nm；
34、第二引物探针组中的反向引物序列 180-220nm；
35、第二引物探针组中的探针序列 80-120nm；
36、第三引物探针组中的正向引物序列 180-220nm；
37、第三引物探针组中的反向引物序列 180-220nm；
38、第三引物探针组中的探针序列 80-120nm。
39、根据本专利技术的一些实施例，所述荧光定量pcr的反应体系为：
40、fastampli premix-ungⅳ1×；
41、第一引物探针组中的正向引物序列 100nm；
42、第一引物探针组中的反向引物序列 100nm；
43、第一引物探针组中的探针序列 50nm；
44、第二引物探针组中的正向引物序列 200nm；
45、第二引物探针组中的反向本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于检测非洲猪瘟病毒的多重荧光定量PCR检测试剂，其特征在于，所述多重荧光定量PCR检测试剂包括用于检测B646L基因的第一引物探针组、用于检测MGF_110基因的第二引物探针组和用于检测EP402R基因的第三引物探针组；
2.根据权利要求1的多重荧光定量PCR检测试剂，其特征在于，所述探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团；
3.根据权利要求1的多重荧光定量PCR检测试剂，其特征在于，所述多重荧光定量PCR检测试剂还包括PCR预混液。
4.一种用于检测非洲猪瘟病毒的芯片，其特征在于，所述芯片含有权利要求1-3任一项所述的多重荧光定量PCR检测试剂的冻干粉。
5.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-3任一项所述的多重荧光定量PCR检测试剂或权利要求4所述的芯片。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性对照品和阴性对照品中的至少一种。
7.权利要求1-3任一项所述的多重荧光定量PCR检测试剂、权利要求4所述的芯片或权利要求5-6任一项所述的试剂盒
8.一种非疾病诊断治疗目的的检测非洲猪瘟病毒的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：采用权利要求1-3任一项所述的多重荧光定量PCR检测试剂、权利要求4所述的芯片或权利要求5-6任一项所述的试剂盒对待测样本DNA进行检测；
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述荧光定量PCR的反应体系含有：
10.一种用于检测非洲猪瘟病毒的系统，其特征在于，所述系统包括：
...【技术特征摘要】
1.一种用于检测非洲猪瘟病毒的多重荧光定量pcr检测试剂，其特征在于，所述多重荧光定量pcr检测试剂包括用于检测b646l基因的第一引物探针组、用于检测mgf_110基因的第二引物探针组和用于检测ep402r基因的第三引物探针组；
2.根据权利要求1的多重荧光定量pcr检测试剂，其特征在于，所述探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团；
3.根据权利要求1的多重荧光定量pcr检测试剂，其特征在于，所述多重荧光定量pcr检测试剂还包括pcr预混液。
4.一种用于检测非洲猪瘟病毒的芯片，其特征在于，所述芯片含有权利要求1-3任一项所述的多重荧光定量pcr检测试剂的冻干粉。
5.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-3任一项所述的多重荧光定量pc...
【专利技术属性】
技术研发人员：任永强，钟斐，谢俊，
申请(专利权)人：华润科学技术研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。