【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于水产养殖动物细菌性疾病防控，具体涉及胡椒碱在制备防治水产动物弧菌病药物和饲料添加剂中的应用。
技术介绍
1、“弧菌病”，即弧菌属细菌引起的疾病，目前该病在全世界范围内的海水养殖场广泛流行。弧菌病大多具有发病快、感染力强、发病率和死亡率高的特点，给海水养殖业带来了巨大经济损失。其中哈维氏弧菌(vibrio harveyi)是弧菌病的主要病原，哈维氏弧菌可以感染凡纳对虾、大菱鲆、石斑鱼等养殖动物，感染鱼类主要症状有体色变黑、眼球突出、体表溃疡、肝脾组织充血和肠炎等症状。目前海水养殖动物弧菌病的防治仍以免疫和抗生素为主。但是血清学多样性和遗传变异限制了弧菌疫苗的开发和降低其应用效果，而抗生素和化学类药物的长期使用和滥用，使得弧菌对该类产生耐药性，耐药谱不断扩大，用药效果不断下降，导致养殖户不得不加大用药剂量，造成药物残留、环境污染、养殖环境微生态失衡和耐药因子传播至人畜病原等负面影响，严重威胁公共卫生安全和公众健康。天然化合物是生物体内的次生代谢物或内源性活性物质，具有绿色安全、低残留、低毒、多功能和低耐药等优势。
2、病原微生物致病主要依赖于其毒力因子，包括粘附、定植、侵染、传播、扩散、免疫逃避和耐药等相关毒力因子。生物膜是哈维氏弧菌的主要毒力因子之一。哈维氏弧菌在水体中主要以聚集粘结在一起分泌黏性物质形成生物膜的形式生存。其生物膜主要成分为多糖、核酸、脂类和蛋白等。哈维氏弧菌生物膜的功能主要包括：增强哈维氏弧菌对抗生素、外界环境压力及宿主免疫的抵抗力；降低哈维氏弧菌的营养消耗，延长其生存时间；增强哈维氏弧
技术实现思路
1、本专利技术解决的技术问题是提供一种防治石斑鱼哈维氏弧菌病的天然化合物，即胡椒碱。
2、胡椒碱，一种生物碱，灰白色至黄褐色结晶粉末，分子式：c17h19no3，它存在于多种胡椒属植物果实中，为辛辣味成分之一，结构式如式i所示：
3、
4、胡椒碱目前已发现具有抗氧化、免疫调节、抗肿瘤等作用。本专利技术发现胡椒碱可显著抑制哈维氏弧菌致病因子生物膜的形成，在鱼类弧菌病防治中具有很好的应用潜力。
5、本专利技术的技术方案如下：
6、本专利技术提供了胡椒碱在制备防治水产动物弧菌病药物中的应用。
7、胡椒碱为纯度为hplc 98％的胡椒碱。
8、在本专利技术的具体实施方式中，所述的水产动物弧菌病的致病菌为哈维氏弧菌；所述水产动物为珍珠龙胆石斑鱼。
9、在本专利技术的具体实施方式中，胡椒碱通过抑制弧菌生物膜来防治弧菌病。
10、本专利技术研究发现，胡椒碱可有效抑制哈维氏弧菌关键毒力因子生物膜的形成。
11、在本专利技术的具体实施方式中，胡椒碱抑制弧菌生物膜的有效浓度为20～200μg/ml。
12、胡椒碱对哈维氏弧菌生物膜的ec50为29.99±6.46μg/ml。
13、在本专利技术的具体实施方式中，所述药物的剂型为拌料药液、微乳剂、纳米乳剂、药浴药液、胶囊、口服胶囊涂剂、粉剂、散剂、滴丸、微丸或药学上可接受的载体和赋形剂一起制备的不同剂型药物。
14、所述的剂型优选是称取2g胡椒碱溶于无水乙醇溶液中制成拌料药液(2g/50ml)，并以50:1(ml:kg)的比例喷洒到饲料上制备含药饲料，也可以是与药学上可接受的载体和赋形剂一起制备的不同剂型药物。
15、本专利技术还提供了胡椒碱在制备防治水产动物弧菌病饲料添加剂中的应用。
16、在本专利技术的具体实施方式中，所述的水产动物弧菌病的致病菌为哈维氏弧菌；所述水产动物为珍珠龙胆石斑鱼。
17、本专利技术还提供了防治水产动物弧菌病的饲料，包括饲料和胡椒碱。
18、在本专利技术的具体实施方式中，胡椒碱与饲料的质量比为：2～4g:1kg。
19、在本专利技术的具体实施方式中，所述的水产动物弧菌病的致病菌为哈维氏弧菌；所述水产动物为珍珠龙胆石斑鱼。
20、与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
21、1.本专利技术首次将胡椒碱应用于防治海水养殖动物弧菌病，尤其防治于石斑鱼的哈维氏弧菌病，在有效剂量内可以提高感染哈维氏弧菌石斑鱼的存活率，相对保护率达到49.99％。
22、2.本专利技术中的胡椒碱来源广、残留低、无污染、绿色安全、可工业化生产、质量可控、疗效稳定等优点。
23、3.本专利技术所公开的防治海水养殖动物弧菌病天然化合物胡椒碱，体外实验表明胡椒碱对哈维氏弧菌的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration，mic)在1024μg/ml之上。胡椒碱对哈维氏弧菌生物膜的半数有效浓度(medianeffective concentration，ec50)是29.99±6.46μg/ml。意味着在合适的剂量下，胡椒碱在不杀死哈维氏弧菌的情况下，可有效抑制起生物膜的合成，从而大大降低其致病性，可在避免细菌因生存压力产生耐药突变。胡椒碱有望作为开发新病原菌毒力抑制剂的先导化合物，有效解决当前弧菌乃至细菌性疾病耐药的难题。
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1.胡椒碱在制备防治水产动物弧菌病药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的胡椒碱在制备防治水产动物弧菌病药物中的应用，特征在于：所述的水产动物弧菌病的致病菌为哈维氏弧菌；所述水产动物为珍珠龙胆石斑鱼。
3.根据权利要求1所述的胡椒碱在制备防治水产动物弧菌病药物中的应用，特征在于：胡椒碱通过抑制弧菌生物膜来防治弧菌病。
4.根据权利要求1所述的胡椒碱在制备防治水产动物弧菌病药物中的应用，特征在于：胡椒碱抑制弧菌生物膜的有效浓度为20～200μg/mL。
5.根据权利要求1所述的胡椒碱在制备防治水产动物弧菌病药物中的应用，其特征在于：所述药物的剂型为拌料药液、微乳剂、纳米乳剂、药浴药液、胶囊、口服胶囊涂剂、粉剂、散剂、滴丸、微丸或药学上可接受的载体和赋形剂一起制备的不同剂型药物。
6.胡椒碱在制备防治水产动物弧菌病饲料添加剂中的应用。
7.根据权利要求6所述的胡椒碱在制备防治水产动物弧菌病饲料添加剂中的应用，其特征在于：所述的水产动物弧菌病的致病菌为哈维氏弧菌；所述水产动物为珍珠龙胆石斑鱼。
8.防治
9.根据权利要求8所述的防治水产动物弧菌病的饲料，其特征在于：胡椒碱与饲料的质量比为：2～4g:1kg。
10.根据权利要求8所述的防治水产动物弧菌病的饲料，其特征在于：所述的水产动物弧菌病的致病菌为哈维氏弧菌；所述水产动物为珍珠龙胆石斑鱼。
...【技术特征摘要】
1.胡椒碱在制备防治水产动物弧菌病药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的胡椒碱在制备防治水产动物弧菌病药物中的应用，特征在于：所述的水产动物弧菌病的致病菌为哈维氏弧菌；所述水产动物为珍珠龙胆石斑鱼。
3.根据权利要求1所述的胡椒碱在制备防治水产动物弧菌病药物中的应用，特征在于：胡椒碱通过抑制弧菌生物膜来防治弧菌病。
4.根据权利要求1所述的胡椒碱在制备防治水产动物弧菌病药物中的应用，特征在于：胡椒碱抑制弧菌生物膜的有效浓度为20～200μg/ml。
5.根据权利要求1所述的胡椒碱在制备防治水产动物弧菌病药物中的应用，其特征在于：所述药物的剂型为拌料药液、微乳剂、纳米乳剂、药浴药液、胶囊、口服胶囊涂剂、...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭伟良，王琰，陈思铭，周永灿，唐威，陈恩鹏，李桂华，钟志鸿，张冬冬，王世锋，孙云，
申请(专利权)人：海南大学，
类型：发明
国别省市：
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