【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药领域，特别涉及小肌营养蛋白域含2(dysbindin domaincontaining 2,dbndd2)抑制剂在制备促进神经生长药物中的应用。
技术介绍
1、创伤性神经损伤会导致神经元轴突的损伤，造成神经传导的中断，引起严重的感觉和运动功能障碍，导致疼痛、灼烧感、感觉异常、纤维化和肌肉萎缩等并发症，严重损害患者的生活质量。肌萎缩性侧索硬化症、青光眼等神经退行性疾病的病理过程中，神经元轴突也发生明显的结构和形态的改变。解析神经轴突生长的分子机制，挖掘对轴突再生起到阻碍作用的分子，使用分子抑制剂可以起到促进受损轴突再生的作用，有助于促进创伤性神经损伤或轴突损伤相关的神经退行性疾病的康复。
2、背根神经节(dorsal root ganglion，drg)神经元是假单级神经元，具有投射至周围神经的周围突和投射至脊髓的中枢突。drg神经元周围突损伤后，受损轴突可以实现一定程度的功能恢复。然而，drg神经元中枢突损伤后难以再生，造成严重的感觉功能障碍。在drg神经元周围突损伤后，drg内呈现下调趋势的基因且drg神经元中枢突损伤后，drg内呈现相反的上调趋势的基因可能对于神经元的轴突再生起到阻碍作用。
3、小肌营养蛋白域含2(dysbindin domain containing 2,dbndd2)，又称酪蛋白激酶-1结合蛋白，参与蛋白激酶活性的负向调控。研究发现如小肌营养蛋白域含2可以通过结合酪蛋白激酶-1，降低α-突触核蛋白ser129磷酸化和寡聚化，并降低不溶性α-突触核蛋白的水平，是
技术实现思路
1、本专利技术通过分析drg神经元周围突和中枢突损伤后，drg内呈现表达变化的基因，发现drg中，编码小肌营养蛋白域含2的基因dbndd2在周围突损伤后下调，中枢突损伤后上调。通过敲降dbndd2，发现降低dbndd2的基因表达能促进神经元轴突的生长和受损神经的再生，表明dbndd2抑制剂可用于制备促进神经生长的药物。
2、本专利技术具体技术方案如下：
3、小肌营养蛋白域含2(dysbindin domain containing 2,dbndd2)抑制剂在制备促进神经生长药物中的应用。
4、本专利技术所述dbndd2mrnancbl reference sequence:nm 001047111.2(seq id no:1)。
5、本专利技术所述的应用，所述抑制剂为小肌营养蛋白域含2蛋白或其编码基因的负调控剂，包括靶向小肌营养蛋白域含2蛋白的蛋白类抑制剂、核酸适配体和/或小肌营养蛋白域含2编码基因的干扰rna、grna、microrna、小分子化合物抑制剂和以上组合的抑制剂。
6、本专利技术一个具体的示例，所述负调控剂是靶向小肌营养蛋白域含2基因的sirna和/或基于载体的shrna。
7、所述靶向小肌营养蛋白域含2基因的sirna的序列如下所示：
8、si-r-dbndd2 001正义链：5’gaaguucuucgaggacauu 3’，seq id no:6；
9、si-r-dbndd2 001反义链：3’cuucaagaagcuccuguaa 5’，seq id no:7；
10、si-r-dbndd2 002正义链：5’gguggaauuuauugaccuu 3’，seq id no:8；
11、si-r-dbndd2 002反义链：3’ccaccuuaaauaacuggaa 5’，seq id no:9；
12、si-r-dbndd2 003正义链：5’gcaguccaaauccaaguga 3’，seq id no:10；
13、si-r-dbndd2 003反义链：3’cgucagguuuagguucacu 5’，seq id no:11。
14、所述shrna包括正义链片段和反义链片段以及连接所述正义链片段和反义链片段的茎环结构，所述序列如seq id no：14所示。
15、本专利技术所述的应用，所述神经为周围神经，优选脊神经。
16、本专利技术一个具体的示例，所述神经为坐骨神经。
17、本专利技术所述药物可以促进轴突生长，可用于创伤性神经损伤或与轴突损伤相关的神经退行性疾病的治疗。
18、本专利技术另一目的在于提供一种小肌营养蛋白域含2抑制剂，为小肌营养蛋白域含2基因的小干扰rna或shrna aav病毒。
19、本专利技术通过转录组测序发现大鼠drg神经元周围突和中枢突损伤后，drg内差异表达的基因dbndd2，并通过组织免疫荧光染色实验进行验证，发现dbndd2在drg神经元周围突损伤后表达下调，中枢突损伤后表达上调(图1)，提示dbndd2在周围突和中枢突损伤后表达的不同变化可能是造成drg神经元周围突和中枢突损伤后轴突再生能力差异的原因之一。通过单细胞测序检测新生和成年大鼠drg内神经元中dbndd2的变化情况，发现dbndd2随发育过程表达降低(图2)，提示dbndd2可能在发育过程中具有促进神经生长的作用。培养原代新生大鼠drg神经元，转染针对dbndd2的sirna片段，发现dbndd2sirna转染可显著降低dbndd2的表达，表明dbndd2 sirna是dbndd2的有效抑制剂(图3a)。dbndd2的表达降低，显著增加了新生大鼠drg神经元的轴突长度(图3b和3c)。在原代成年大鼠drg神经元中转染针对dbndd2的sirna片段，也减低了dbndd2的表达，并显著增加了成年大鼠drg神经元的轴突长度(图4)。敲降dbndd2的成年大鼠drg神经元，在包被轴突生长抑制因子髓磷脂的细胞培养皿上，相较于转染对照sirna，仍然具有更长的轴突长度，表明在抑制性的微环境下，降低dbndd2的表达仍有利于轴突生长(图5)。使用微流控小室构建体外drg神经元轴突损伤模型，发现敲降dbndd2的表达，显著加速了成年大鼠drg神经元轴突损伤后的再生过程(图6)。在成年大鼠鞘内注射敲降dbndd2表达的aav病毒后进行坐骨神经损伤，发现大鼠体内敲降dbndd2的表达，有利于受损神经的生长(图7-图8)。
20、本专利技术所述dbndd2可以直接作为药物的靶点设计抑制其表达的药物(抑制剂)，通过与药物的相互作用，抑制神经元内dbndd2的表达，进而发挥调节神经生长的作用。
21、本专利技术的优点：本专利技术研究结果表明，可通过dbndd2抑制剂降低dbndd2的表达，进而提高神经元突起生长和轴突再生的能力。dbndd2抑制剂通过促进神经生长，可以用于创伤性神经损伤以及与轴突损伤相关的神经退行性疾病的治疗。
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1.小肌营养蛋白域含2抑制剂在制备促进神经生长药物中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述抑制剂为小肌营养蛋白域含2蛋白或其编码基因的负调控剂。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述负调控剂包括靶向小肌营养蛋白域含2蛋白的蛋白类抑制剂、核酸适配体和/或小肌营养蛋白域含2编码基因的干扰RNA、gRNA、microRNA、小分子化合物抑制剂和以上组合的抑制剂。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述负调控剂是靶向小肌营养蛋白域含2基因的siRNA和/或基于载体的shRNA。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述靶向小肌营养蛋白域含2基因的siRNA序列如下：
6.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述神经为周围神经。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于所述神经为脊神经。
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于所述神经为坐骨神经。
9.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述药物为治疗神经损伤或神经损伤相关的神经退行性疾病的药物。
10.一种小肌营
...【技术特征摘要】
1.小肌营养蛋白域含2抑制剂在制备促进神经生长药物中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述抑制剂为小肌营养蛋白域含2蛋白或其编码基因的负调控剂。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述负调控剂包括靶向小肌营养蛋白域含2蛋白的蛋白类抑制剂、核酸适配体和/或小肌营养蛋白域含2编码基因的干扰rna、grna、microrna、小分子化合物抑制剂和以上组合的抑制剂。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述负调控剂是靶向小肌营养蛋白域含2基因的sirna和/或基于载体的shrna。
<...【专利技术属性】
技术研发人员：易晟，赵莉莉，张岚，钱雨悦，龚蕾蕾，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：
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