含痘病毒制剂和制备稳定的含有痘病毒组合物的方法技术

本发明专利技术涉及一种制剂尤其是一种含水制剂，包括：（ｉ）从正痘病毒属，禽痘病毒属，副痘病毒属，羊痘病毒属和猪痘病毒属中挑选出接种病毒（ｉｉ）双糖（ｉｉｉ）药物可接受的聚合物和任选（ｉｖ）缓冲液。这种含水制剂尤其适合进行冷冻干燥过程，这样可以形成稳定的冷冻干燥的痘病毒。本申请还涉及制备冷冻干燥的含痘病毒组合物的方法和该方法获得的产品。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种制剂尤其是一种含水制剂，包括(i)从正痘病毒属，禽痘病毒属，副痘病毒属，羊痘病毒属和猪痘病毒属中挑选出痘病毒，(ii)双糖，(iii)药物可接受的聚合物，和任选(iv)缓冲液。这种含水制剂尤其适合进行冷冻干燥过程，这样可以形成稳定的冷冻干燥的痘病毒。本申请还涉及制备冷冻干燥的含痘病毒组合物的方法和该方法获得的产品。
技术介绍
痘病毒科包括复合DNA病毒的大科，这些病毒在脊椎动物和无脊椎动物细胞的胞浆里复制。对于人，天花是非常重要的痘病毒感染。形成天花的一个致病因素是正痘病毒属中的天花病毒。同样是痘病毒科正痘病毒属的牛痘苗病毒被用作活疫苗来对天花产生免疫。在全球范围内，通过成功的接种牛痘苗病毒，消灭了天花病毒(全球消灭了天花。全球消灭天花证实委员会的最后报告；公共卫生的历史，No.4，日内瓦世界卫生组织，1980)。同时，大多数传染性的原种天花病毒都受到破坏。然而，并不能排除痘病毒类诱发天花或者类似天花疾病，这些疾病可能再次变成主要的健康问题。因此，生产稳定的疫苗来预防痘病毒感染是很有必要的，尤其预防天花感染，例如以牛痘苗病毒为基础的疫苗。过去，人们曾经使用牛痘苗病毒作为重组基因表达和作为重组活疫苗潜在用途的工程病毒载体(Mackett，M.，Smith，G.L.and Moss，B.P.N.A.S.USA 79，7415-7419；Smith，G.L.，Mackett，M.and Moss，B.Biotechnology and Genetic Engineering Reviews 2，383-407)。特别需要DNA序列(基因)，这些序列编码那些借助DNA重组技术导入到牛痘苗病毒基因组里面的外来抗原。如果把基因整合到那些对病毒生存期非必需的病毒DNA位点上，那么，新产生的重组牛痘苗病毒可能具有感染性，即病毒可能感染外来细胞，从而牛痘苗病毒表达整合的DNA序列(EP 83286 and EP110385)。可以以这种方法来制备重组牛痘苗病毒，一方面，它可以作为预防传染病的活疫苗，另一方面，它可以在真核细胞中制备异种蛋白的活疫苗。重组牛痘苗病毒的其它例子是隐藏治疗基因例如自杀基因，核酶基因或者反义基因的病毒，已知改良Ankara牛痘苗病菌株(MVA)格外安全。在鸡胚胎纤维母细胞里，利用Ankara牛痘苗病菌株的长期连续传代(CVA)可以产生MVA。(综述见Mayr，A.，Hochstein-Mintzel，V.and Stickl，H.Infection 3，6-14；Swiss Patent No.568，392)。例如，按照《布达佩斯条约》要求保藏的MVA病菌株例子有保藏在位于英国索尔兹伯里的欧洲动物细胞培养物保藏中心(ECACC)的菌株MVA572，保藏号是ECACC V94012707，MVA575，保藏号是ECACCV00120707，MVA-BN，保藏号是ECACC V00083008。因为MVA特别大的作用而与众不同，也就是说，它能降低毒性或感染性的同时还能保持好的免疫原性。曾经分析MVA病毒来测定相对野生型CVA菌株中基因组的变异性。Meyer等已经确定了基因组DNA中有6个主要缺失(缺失I，II，III，IV，V，和VI)，总计31,000个碱基对(Meyer，H.，Sutter，G.and Mayr A.J.Gen.Virol.72，1031-1038)。所形成的MVA病毒变成仅仅局限于禽细胞的宿主细胞。而且，MVA具有特别大的减毒作用。当在各种各样的动物模型中实验时，发现MVA有毒性，甚至在受免疫抑制的动物中也有毒性。更重要的是，在广泛的临床实验中，证实了MVA菌株的优良性质(Mayr等，Zb1.Bakt.Hyg.I，Abt.Org.B 167，375-390，Stickl等，Dtsch.med.Wschr.99，2386-2392)。在关于包括高危病人在内的120,000人的这些研究中，使用MVA疫苗时没有发现任何副作用。已经有人构建了重组MVA作为疫苗(见，如WO97/02355)，并用于临床实验。WO 98/13500揭示了一种重组MVA，它含有能够表达那些编码登革热病毒抗原的DNA序列。外源DNA序列重组到MVA基因组中天然存在缺失位点的病毒DNA上。显示较强的减毒作用并增强安全性的MVA菌株是MVA-BN菌株，这个菌株保藏在英国索尔兹伯里的欧洲动物细胞培养物保藏中心(ECACC)，保藏号是V00083008。除了牛痘苗病毒外，还把其它痘病毒作为载体把遗传信息传递给哺乳细胞。本文可以参考禽痘病毒，如鸡痘病毒。美国专利US5,736,368号和6,051,410号已经揭示了基因组中含有HIV基因的鸡痘病毒类。本领域技术熟练者知道制备作为疫苗的含痘病毒组合物的方法(例如Joklik W.K.，Virology(1962)，18，9-18；Richter，K.H.，Abhandlungenaus dem Bundesgesundheitsamt(1970)，9，53-57)。已知的纯化方法可以得到含痘病毒的水溶液或含有痘病毒的沉淀物。痘病毒在这些溶液和沉淀物中是不稳定的，即病毒的感染性会迅速下降。无论如何，把疫苗贮藏并以稳定形式分散是很有必要的，特别是当需要在有限的分散条件下把疫苗转运到热带区域的时候。冷冻干燥产品可以在温度4℃-25℃保存。与那些需要在-20℃以下保存的液体制剂的标准保存条件相比，这是一个特别明显的优点(Cryopreservation and freeze-drying protocols″Day J，McLellan M；Methods in Molecular Biology，38，1995，Humana Press)。已知冷冻干燥痘病毒类尤其牛痘苗病毒的方法，和含有该病毒的组合物以及适于该日的溶液(Burke等，Critical Reviews in Therapeutic DrugCarrier Systems(1999)，16，1-83)。总之，疫苗的冷冻干燥包括将适合于冷冻干燥的含疫苗的含水制剂冷冻，接下来是在减压和低温的条件下通过升华除去水，最后，在减压和高温的条件下通过解吸除去水。含有已知痘病毒的冷冻干燥制剂有重要的缺点。冷冻干燥的许多含有已知牛痘苗病毒的组合物含有来自动物的蛋白胨或尿素交联明胶。然而，一些动物疾病如BSE疾病，可以通过动物产品如蛋白胨，明胶或者尿素交联明胶从动物传到人身上。而且，在冷冻干燥的含已知病毒的制剂中的痘病毒还没有纯化。因此，在现行技术水中已知的冷冻干燥的含痘病毒的组合物含有分别来自细胞或组织培养系统中细胞的大量蛋白和细胞培养过程中使用的牛血清中的大量蛋白。本领域技术熟练者也知道不含附加的动物来源化合物(如蛋白胨或者尿素交联明胶)的冷冻干燥组合物。这种情况下，该组合物含有单独的或者一定组合的下列化合物谷氨酸钠，山梨醇，乳糖，盐，氨基酸和甘油。但是，冷冻干燥后获得的产品常常相当不稳定，即在储存过程中病毒效价总损失太高以至于难以接受。而且，实验表明，在一些制剂中，痘病毒易于形成聚集体，并且在冷冻前或冷冻时其他化合物会发生沉淀。美国专利US 3,577,526号揭示了天花疫苗，这种疫苗是由分散在蔗本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制剂，包括：（１）从正痘病毒，副痘病毒，禽痘病毒，羊痘病毒和猪痘病毒属中挑选出纯化的或者部分纯化的痘病毒，（２）双糖，和（３）药物可接受的聚合物。

【技术特征摘要】
DK 2001-12-10 PA2001018311.一种制剂，包括(1)从正痘病毒，副痘病毒，禽痘病毒，羊痘病毒和猪痘病毒属中挑选出纯化的或者部分纯化的痘病毒，(2)双糖，和(3)药物可接受的聚合物。2.根据权利要求1所述的制剂，还含有缓冲液。3.根据权利要求1或2任一项所述的制剂，其特征在于痘病毒是牛痘苗病毒。4.根据权利要求1-3任一项所述的制剂，其中牛痘苗病毒选自Elstree菌株和改良Ankara牛痘苗病菌株(MVA)。5.根据权利要求1-4任一项所述的制剂，其特征在于痘病毒是重组痘病毒。6.根据权利要求1-5任一项所述的制剂，其特征在于双糖从蔗糖，乳糖和海藻糖中挑选。7.根据权利要求1-6任一项所述的制剂，其特征在于双糖的浓度为10g/l-100g/l。8.根据权利要求1-7任一项所述的制剂，其特征在于药物可接受的聚合物从右旋糖酐和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)中挑选。9.根据权利要求8所述的制剂，其特征在于右旋糖酐的分子量范围是30,000-70,000，浓度范围是1g/l-50g/l。10.根据权利要求2-9任一项所述的制剂，其特征在于不用磷酸缓冲液作为缓冲液。11.根据权利要求1-10任一项所述的制剂，其特征在于该制剂还包括谷氨酸。12.根据权利要求1-11任一项所述的制剂，其特征在于该制剂的崩溃温度范围是-37℃-30℃。13.根据权利要求1-12所述的制剂，其特征在于该痘病毒是MVA菌株或Elstr...

【专利技术属性】
技术研发人员：保罗豪利，卡尔赫勒，英格马拉思，
申请(专利权)人：巴法里安诺迪克有限公司，
类型：发明
国别省市：DK[丹麦]