【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子生物学领域，具体涉及环状rna circspred2在制备人卵巢癌铂耐药检测试剂和治疗制剂中的应用。
技术介绍
1、卵巢癌(ovarain cancer，oc)是最常见的妇科恶性肿瘤之一，由于卵巢癌早期症状不明显，缺乏有效筛查手段，患者就诊时大多为晚期。对于晚期卵巢癌患者，现阶段主要治疗方案仍然是手术联合以紫杉醇和铂类药物为基础的化疗，但高达70％的iii-iv期的患者在三年内复发，表现出对铂类药物的反应性降低。为改善铂耐药复发性卵巢癌患者的生存时间和提高生存质量，寻找新型的铂类耐药靶点是紧迫的临床需求。
2、环状rna(circular rna，circrna)是一类共价闭合的单链环状转录本，由前体rna(pre-rna)经反向剪接产生，无5’帽或3’poly(a)尾，具有高稳定性和保守性。随着高通量测序技术的广泛应用，circrna在肿瘤组织中的异常表达逐渐引起关注。据报道，circrna广泛参与卵巢癌细胞增殖、侵袭转移、化疗耐药的调控，具有作为新的耐药指标和治疗靶点的方面的潜能。
3、本专利技术研究表明，环状rna circspred2在卵巢癌铂类耐药组织和细胞中高表达，且高表达的环状rna circspred2促进卵巢癌细胞的铂类耐药，具有作为卵巢癌铂类耐药分子标志物及靶点的潜能。因此，我们设计并应用了一种用于rna干扰的短发夹rna表达载体沉默环状rna circspred2的表达，从而提高卵巢癌细胞对铂类化疗药物敏感性的抗肿瘤生物制剂。
技术实现思
1、本专利技术的第一个目的是提供检测环状rna circspred2试剂在制备人卵巢癌铂类耐药检测制剂中的应用，该环状rna circspred2的序列如下，见seq id no：1。
2、tgacagctatattgtgcgtgtcaaggctgtggttatgaccagagatgactccagcgggggatggttcccacaggaaggaggcgggatcagtcgcgtcggggtctgtaaggtcatgcaccccgaaggcaatggacgaagcggctttctcatccatggtgaacgacagaaagacaaactggtggtattggaatgctatgtaagaaaggacttggtctacaccaa agccaatccaacgtttcatcactggaaggtcgataataggaagtttggacttactttccaaagccctgctgatgcccgagcctttgacaggggagtaaggaaagcaatcgaagaccttatagaaggttcaacaacgtcatcttccaccatccataatgaagctgagcttggcgatgatgacgtttttaca。
3、所述的人卵巢癌铂类耐药检测制剂包括检测人卵巢癌组织或细胞中环状rnacircspred2表达量的试剂。
4、所述的人卵巢癌组织和细胞中环状rna circspred2表达量的试剂包括但不限于实时荧光定量pcr检测试剂；优选所述的实时荧光定量pcr检测试剂包括实时荧光定量pcr的特异性引物：
5、环状rna circspred2正向引物：5'-tttccaaagccctgctgatg-3'，见seq no：2；
6、环状rna circspred2反向引物：5'-atagctgtcatgtaaaaacgtcat-3'见seq no：3。
7、但不限于上述具体的引物
8、所述的实时荧光定量pcr检测试剂还包括：
9、内参gapdh的特异性引物：
10、正向引物：5'-aacggatttggtcgtattgg-3'；见seq no：4；
11、反向引物：5'-ttgattttggagggatctcg-3'；见seq no：5。
12、但不限于上述具体的内参对照
13、本专利技术的第二个目的是提供一种人卵巢癌铂类耐药检测试剂盒，包括实时荧光定量pcr检测人卵巢癌组织中环状rna circspred2表达量试剂，优选所述的实时荧光定量pcr检测人卵巢癌组织中环状rna circspred2表达量试剂包括实时荧光定量pcr的特异性引物：
14、环状rna circspred2正向引物：5'-tttccaaagccctgctgatg-3'，见seq no：2；
15、环状rna circspred2反向引物：5'-atagctgtcatgtaaaaacgtcat-3'，见seq no：3。
16、但不限于上述具体的引物
17、内参gapdh的特异性引物：
18、正向引物：5'-aacggatttggtcgtattgg-3'；见seq no：4；
19、反向引物：5'-ttgattttggagggatctcg-3'；见seq no：5。
20、但不限于上述具体的内参对照
21、该试剂盒还包括：(1)从卵巢癌组织抽提总rna 所用试剂，包括trizol试剂，三氯甲烷，异丙醇，75％乙醇，无酶水；(2)以总rna为模板将环状rna circspred2、内参gapdh逆转录为cdna所用试剂，包括逆转录缓冲液，dntp，rna酶抑制剂，mmlv逆转录酶以及随机引物；(3)将cdna实时定量pcr所用试剂，包括环状rna circspred2特异性引物、内参gapdh引物、实时荧光定量sybr染料、无酶水。
22、上述检测制剂的使用方法：(1)收集卵巢癌患者来源的肿瘤组织，抽提总rna；(2)以总rna为模板将环状rna circspred2、gaphd逆转录为cdna；(3)使用环状rna circspred2特异性引物和内参gapdh引物进行实时荧光定量pcr扩增获得相对表达量，当倍数越高时，说明卵巢癌患者铂类耐药程度越高。
23、本专利技术的第三个目的是提供一种环状rna circspred2在制备人卵巢癌铂类耐药治疗制剂中的应用方法，该环状rna circspred2的序列见seq no：1。
24、所述的人卵巢癌铂类耐药治疗制剂所包括增强人卵巢癌铂类药物化疗敏感性的制剂。
25、所述的人卵巢癌铂类耐药治疗制剂包括抑制环状rna circspred2表达的制剂；
26、优选的抑制环状rna circspred2表达的制剂是针对环状rna circspred2设计的用于rna干扰的短发夹rna表达载体。
27、进一步优选，所述的用于制备rna干扰的短发夹rna表达载体所需的干扰靶点序列如下：
28、5'-gacgtttttacatgacagc-3'。
29、最优选：针对干扰靶点序列设计能形成发夹结构的寡核苷酸单链及其反向互补序列，退火后即形成两端分别带限制性酶切位点粘性末端的dna双链，能形成发夹结构的寡核苷酸本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.抑制环状RNA CircSPRED2的试剂在制备人卵巢癌铂类耐药治疗制剂中的应用，该环状RNA CircSPRED2的序列见SEQ ID NO：1。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的人卵巢癌铂类耐药治疗制剂包括增强人卵巢癌铂类药物化疗敏感性的制剂。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的抑制环状RNA CircSPRED2表达的制剂是针对环状RNA CircSPRED2设计的用于RNA干扰的短发夹RNA表达载体。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，
5.一种人卵巢癌铂类耐药治疗制剂，包括抑制环状RNA CircSPRED2表达的制剂。
6.根据权利要求5所述的治疗制剂，其特征在于，所述的抑制环状RNA CircSPRED2表达的制剂是针对环状RNA CircSPRED2设计的用于RNA干扰的短发夹RNA表达载体；
7.检测环状RNA CircSPRED2试剂在制备人卵巢癌铂类耐药检测制剂中的应用，该环状RNA CircSPRED2的序列见SEQ ID NO：1。>
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的人卵巢癌铂类耐药检测制剂包括检测人卵巢癌组织或细胞中环状RNA CircSPRED2表达量的试剂。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的检测人卵巢癌组织或细胞中环状RNA CircSPRED2表达量的试剂包括：实时荧光定量PCR检测试剂；优选PCR的特异性引物：
10.一种人卵巢癌铂类耐药检测试剂盒，包含检测人卵巢癌组织或细胞中环状RNACircSPRED2表达量的试剂，具体包括：实时荧光定量PCR检测试剂；优选PCR的特异性引物：
...【技术特征摘要】
1.抑制环状rna circspred2的试剂在制备人卵巢癌铂类耐药治疗制剂中的应用，该环状rna circspred2的序列见seq id no：1。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的人卵巢癌铂类耐药治疗制剂包括增强人卵巢癌铂类药物化疗敏感性的制剂。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的抑制环状rna circspred2表达的制剂是针对环状rna circspred2设计的用于rna干扰的短发夹rna表达载体。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，
5.一种人卵巢癌铂类耐药治疗制剂，包括抑制环状rna circspred2表达的制剂。
6.根据权利要求5所述的治疗制剂，其特征在于，所述的抑制环状rna circspred2表达的制剂是针对环状rna c...
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