【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、铁是一种微量营养素，是每个活生物体在生物学上必不可少的成分。它是充分的红细胞生成功能、氧化代谢、细胞免疫应答和许多其他细胞过程所必需的。在游离形式时，铁参与氧化还原反应，导致自由基的形成、氧化应激，这可导致器官损伤。活生物体已经发展出蛋白质系统，以通过细胞膜和生物流体转运游离铁，并将其以无毒且易于动员的形式储存，以避免铁毒性。在人体中，铁主要以与蛋白质如血红素化合物、血红素酶或非血红素化合物结合的复合物形式存在。铁吸收由肠细胞通过二价金属转运蛋白1进行，并在十二指肠和空肠上部发生。然后，铁穿过十二指肠粘膜转移到血液中，在其中被转铁蛋白转运到细胞或骨髓进行红细胞生成。由于许多不同的细胞功能都需要铁，因此需要在铁摄取、转运、储存和利用之间保持恒定的平衡，以维持铁稳态。铁调素(hepcidin)是一种由hamp基因编码的循环肽激素，由肝脏分泌，在维持铁稳态中起关键作用。铁调素的表达直接受铁摄入量变化的调节，并且其抑制导致生物可利用的血清铁水平升高。铁调素通过直接与铁转运蛋白结合来阻止铁向血浆中的流入，铁转运蛋白是位于十二指肠肠细胞和巨噬细胞的细胞膜处的主要铁输出蛋白，十二指肠肠细胞从饮食中吸收铁，而巨噬细胞则从衰老红细胞中回收铁。铁调素与铁转运蛋白的结合触发其内化和随后的溶酶体降解，从而阻止铁输出到循环系统中。肝铁调素的表达由三条独立的途径调控，其中炎症(炎性细胞因子)和高血清铁水平导致铁调素上调，而红细胞生成增多使铁调素下调，从而促进红细胞产生对铁的高需求。换句话说，当铁调素水平高时，血清铁水平降低，这可导致贫血。当
2、在病理情况下，铁调素的长期抑制常常导致原发性铁过载，这是因为血浆铁传感信号通路的功能丧失导致其表达障碍(例如遗传性血色素沉着症)所致。在红细胞生成增多但功能失调的情况下(例如β地中海贫血)，铁调素被下调，从而导致继发性铁过载。原发性和继发性铁过载的病理生理后果很常见，导致游离血浆铁积聚，在器官中积累，在疾病进展时造成损害。
3、tmprss6(跨膜蛋白酶，丝氨酸6)编码一种ii型丝氨酸蛋白酶，并且主要在肝脏中表达。tmprss6参与由铁缺乏触发的跨膜信号通路，并抑制激活hamp——编码铁调素的基因——的多种途径。
4、研究表明，在中间型β-地中海贫血和遗传性血色素沉着症的小鼠模型中，铁调素的上调改善异常红细胞生成并预防或限制铁过载(gardenghi等人,j.clin.invest.,2010；guo等人,j.clin.invest.,2013；schmidt等人,blood 2013；casu等人,blood 2016；ramos等人,blood2012)。hfe相关的遗传性血色素沉着症是遗传性铁过载病症中最常见的类型，在北欧人群中p.c282y突变的发生率很高(alexander和kowdley,geneticsinmedicine,2009)。据认为，肝脏中的铁调素产生受损导致hfe相关血色素沉着症中的铁过载。在这种情况下，铁过载常常导致诸如肝硬化和糖尿病等并发症，以及其他受影响器官的衰竭。
5、与其在抑制铁调素表达中的作用一致，tmprss6的突变导致诸如铁难治性缺铁性贫血等病症。在tmprss6-/-小鼠中，铁调素表达显著升高，而在hfe-/-小鼠中，tmprss6的减少可改善铁过载表型(du等人,science 2008；folgueras等人,blood 2008；finberg ke等人,blood,2011)。
6、这类证据提示了靶向tmprss6在治疗与铁过载相关的疾病中的作用。当前针对此类疾病的治疗选择有限。因此，当前需要有效治疗与铁过载相关的病症的方法，而本专利技术满足了这一需求。
技术实现思路
1、本公开部分地基于在体外和体内降低tmprss6表达的寡核苷酸(例如，rnai寡核苷酸)的发现。已经表明，tmprss6的异常表达与铁调素表达和血清铁水平的改变相关。如本文所证明的，在施用tmprss6rnai寡核苷酸后，体内血清铁和血清铁饱和度降低。不受理论的束缚，对tmprss6的抑制增加了铁调素表达，随后降低血清铁水平，从而防止铁过载。因此，不希望受理论的束缚，靶向tmprss6的寡核苷酸可用于治疗与铁调素缺乏或抑制相关的疾病或病症。
2、因此，在一些方面，本公开提供了一种用于降低跨膜丝氨酸蛋白酶6(tmprss6)表达的rnai寡核苷酸，该寡核苷酸包含有义链和反义链，其中所述有义链和所述反义链形成双链体区域，其中所述反义链包含与seq id no:661-852中任一者的tmprss6 mrna靶序列互补的互补区域，并且其中所述互补区域的长度为至少15个连续核苷酸。
3、在一些实施方案中，所述有义链的长度为15至50个核苷酸。在一些实施方案中，所述有义链的长度为18至36个核苷酸。
4、在一些实施方案中，所述反义链的长度为15至30个核苷酸。
5、在一些实施方案中，所述反义链的长度为22个核苷酸，并且所述反义链和所述有义链形成长度为至少19个核苷酸、任选地长度为至少20个核苷酸的双链体区域。在一些实施方案中，所述互补区域的长度为至少19个连续核苷酸。在一些实施方案中，所述互补区域的长度为至少20个连续核苷酸。
6、在一些方面，本公开提供了一种用于降低tmprss6表达的双链rnai寡核苷酸，该寡核苷酸包含：
7、(i)长度为19-30个核苷酸的反义链，其中所述反义链包含含有与tmprss6 mrna靶序列互补的互补区域的核苷酸序列，其中所述互补区域选自seq id no:1-192，以及
8、(ii)长度为19-50个核苷酸的有义链，其包含与所述反义链互补的互补区域，其中所述反义链和有义链是单独的链，它们形成在所述反义链的3’末端具有由1-4个核苷酸组成的突出端的不对称双链体区域。
9、在一些方面，本公开提供了用于降低tmprss6表达的双链rnai寡核苷酸，该寡核苷酸包含：
10、(i)长度为19-30个核苷酸的反义链，其中所述反义链包含选自seq id no:1-192的核苷酸序列，并且其中所述反义链与tmprss6
11、mrna靶序列互补，以及
12、(ii)长度为19-50个核苷酸的有义链，其包含与所述反义链互补的互补区域，其中所述反义链和有义链是单独的链，它们形成在所述反义链的3’末端具有由1-4个核苷酸组成的突出端的不对称双链体区域。
13、在一些实施方案中，所述有义链的3’端包含表示为s1-lp-s2的茎-环，其中s1与s2互补，并且其中lp在s1与s2之间形成长度为3-5个核苷酸的环。在一些实施方案中，lp为三环或四环。在一些实施方案中，lp为四环。在一些实施方案中，所述四环包含序列5’-gaaa-3’。在一些实施方案中，s1和s2的长度为1-10个核苷酸并且具有相同本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于降低跨膜丝氨酸蛋白酶6(TMPRSS6)表达的RNAi寡核苷酸，所述寡核苷酸包含有义链和反义链，其中所述有义链和所述反义链形成双链体区域，其中所述反义链包含SEQ ID NO:600所示核苷酸序列的至少20个连续核苷酸，并且其中所述反义链包含与TMPRSS6mRNA靶序列互补的互补区域，所述互补区域为至少18个连续核苷酸。
2.根据权利要求1所述的RNAi寡核苷酸，其中所述互补区域为至少19个连续核苷酸。
3.根据权利要求1-2中任一项所述的RNAi寡核苷酸，其中所述有义链包含SEQ ID NO:844所示的核苷酸序列，任选地其中所述有义链包含SEQ ID NO:579所示的核苷酸序列。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的RNAi寡核苷酸，其中所述反义链包含SEQ ID NO:600所示核苷酸序列的至少21个连续核苷酸，任选地其中所述反义链包含SEQ ID NO:600所示的核苷酸序列。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的RNAi寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含至少一个经修饰的核苷酸，任选地其中所述寡核苷酸的所有核苷酸
6.根据权利要求1-5中任一项所述的RNAi寡核苷酸，其中
7.根据权利要求1-6中任一项所述的RNAi寡核苷酸，其中
8.根据权利要求1-7中任一项所述的RNAi寡核苷酸，其中所述反义链的5’-末端核苷酸包含根据化学式1a(MePhosphonate-4O-mU)的结构：
9.根据权利要求1-8中任一项所述的RNAi寡核苷酸，其中所述有义链在3’端的近侧包含表示为S1-Lp-S2的茎-环，其中S1与S2互补，并且其中Lp在S1与S2之间形成长度为3-5个核苷酸的环。
10.根据权利要求9所述的RNAi寡核苷酸，其中所述环Lp的长度为4个核苷酸，并且其中所述环Lp从5’至3’计数的第二、第三和第四个核苷酸各自与单价N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)部分缀合。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的RNAi寡核苷酸，其中所述反义链包含长度为一个或多个嘌呤核苷酸的3’突出端，并且任选地其中所述3’突出端是5’-GG-3’。
12.一种用于降低TMPRSS6表达的RNAi寡核苷酸，所述寡核苷酸包含有义链和反义链，其中
13.一种药物组合物，其包含根据权利要求1-12中任一项所述的RNAi寡核苷酸和药学上可接受的载体、递送剂或辅料。
14.根据权利要求1-12中任一项所述的RNAi寡核苷酸，或根据权利要求13所述的药物组合物，其用作药物。
15.根据权利要求1-12中任一项所述的RNAi寡核苷酸，或根据权利要求13所述的药物组合物，其用于治疗血色素沉着症如遗传性血色素沉着症或β-地中海贫血。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于降低跨膜丝氨酸蛋白酶6(tmprss6)表达的rnai寡核苷酸，所述寡核苷酸包含有义链和反义链，其中所述有义链和所述反义链形成双链体区域，其中所述反义链包含seq id no:600所示核苷酸序列的至少20个连续核苷酸，并且其中所述反义链包含与tmprss6mrna靶序列互补的互补区域，所述互补区域为至少18个连续核苷酸。
2.根据权利要求1所述的rnai寡核苷酸，其中所述互补区域为至少19个连续核苷酸。
3.根据权利要求1-2中任一项所述的rnai寡核苷酸，其中所述有义链包含seq id no:844所示的核苷酸序列，任选地其中所述有义链包含seq id no:579所示的核苷酸序列。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的rnai寡核苷酸，其中所述反义链包含seq id no:600所示核苷酸序列的至少21个连续核苷酸，任选地其中所述反义链包含seq id no:600所示的核苷酸序列。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的rnai寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含至少一个经修饰的核苷酸，任选地其中所述寡核苷酸的所有核苷酸都是经修饰的核苷酸。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的rnai寡核苷酸，其中
7.根据权利要求1-6中任一项所述的rnai寡核苷酸，其中
8.根据权利要求1-7中任一项所述的rnai寡核...
【专利技术属性】
技术研发人员：A·L·布卢瓦，C·M·普利斯特，朴智慧，H·杜德克，
申请(专利权)人：诺和诺德股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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