【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及功能性医药材料和纳米，特别是涉及一种同源肿瘤细胞和西洋参复合外泌体制备方法。
技术介绍
1、多形性胶质母细胞瘤(gbm)是中枢神经系统(cns)中最具侵袭性的原发性恶性肿瘤，预后不良，死亡率高，严重威胁人类健康。目前，手术切除是gbm治疗的主要临床实践。然而，由于gbm的高度浸润性生长，手术根除是不可能的。为了防止局部gbm复发，通常在切除后进行化疗。然而，由于血脑屏障(bbb)的存在和肿瘤靶向性不足，化疗效果受到阻碍，化疗药物的使用通常与严重的全身毒性有关。目前为止，合成药物递送载体已经部分克服了这些限制，但它们的应用受到不可避免的缺陷的限制，例如不可生物降解性和免疫原性。因此，迫切需要开发一种先进、安全的药物递送系统，该系统可以快速穿过bbb并准确靶向肿瘤部位。
2、外泌体(exos)是几乎所有细胞类型分泌的天然纳米级脂质囊泡，包含大量蛋白质、编码和非编码rna以及脂质，它们在细胞间通讯中起重要作用。最近，外泌体因其良好的载药特性、纳米级效应、生物相容性和循环稳定性而成为基于纳米聚合物的药物递送系统的有前途的代替品，受到越来越多的关注。越来越多的证据表明，肿瘤细胞来源的exos可以与具有相同粘附蛋白的同源肿瘤细胞特异性结合，从而赋予它们固有的靶向能力。鉴于这些结果，我们假设西洋参外泌体(ag-exos)和u87细胞衍生的exos(u87-exos)可能具有将治疗药物递送到同源gbm的能力，包括bbb渗透和肿瘤特异性靶向性，同时提升免疫细胞活性作用发挥西洋参协同作用。
3、替莫唑胺(tmz
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种同源肿瘤细胞和西洋参复合外泌体制备方法，制备出基于同源肿瘤细胞复合exos的药物递送系统，共同递送tmz和res，用于gbm的治疗，该药物递送系统基于中医联合疗法的概念，以克服传统化疗的局限性，为治疗gbm提供了一种有前途的策略。
2、本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案为：
3、提供了一种同源肿瘤细胞和西洋参复合外泌体制备方法，包括以下步骤：
4、s1：u87-exos的制备：使用连续超速离心法从u87细胞中分离u87细胞外泌体，制备出u87-exos备用；
5、s2：ag-exos的制备：使用连续超速离心法从西洋参根茎中分离西洋参外泌体，制备出ag-exos备用；
6、s3：u87/ag-exos的制备：将步骤s1得到的u87-exos和步骤s2得到的ag-exos挤压复合，制备u87/ag-exos；
7、s4：药物递送系统的制备：将替莫唑胺和白藜芦醇溶解在溶剂中，并与步骤s3得到的u87/ag-exos混合，然后对混合溶液进行超声处理。
8、进一步的，步骤s1中，u87-exos的离心方式为：(1)在4℃条件下离心后通过0.22μm孔径过滤；(2)将滤液在4℃下继续离心，弃去上清液，并洗涤沉淀。
9、进一步的，步骤(1)中，细胞的离心方式为：在4℃条件下，依次在300×g、2000×g和10000×g条件下离心10min、10min和30min；
10、步骤(2)中，滤液的离心方式为：在4℃条件、120000×g条件下离心70min。
11、进一步的，步骤s2中，ag-exos的离心方式为：在4℃条件下，依次在1000-2000×g、1000-2000×g、5000-10000×g、100000-200000×g、200000×g、100000×g条件下离心15-25min、30-40min、1-3h、2.5h、1h。
12、进一步的，步骤s3中，u87-exos与ag-exos的质量比为1：1。
13、进一步的，步骤s4中，所述替莫唑胺和白藜芦醇的比例为：1.7μg/ml：1μg/ml。
14、进一步的，步骤s4中，所述u87/ag-exos与替莫唑胺和白藜芦醇混合药物的质量比为：mu87/ag-exos：m药物＝5：1。
15、进一步的，步骤s4中，所述超声的条件为：振幅20％，开4s，关2s，循环6次；
16、在每个循环的间隙，将样品置于冰上冷却2min，全程低温操作。
17、与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
18、1、本专利技术示例的同源肿瘤细胞和西洋参复合外泌体制备方法，联合使用具有协同作用的替莫唑胺和白藜芦醇用于多形性胶质母细胞瘤的治疗，有效缓解了替莫唑胺耐药的问题，从而提高了多形性胶质母细胞瘤的治疗效果；
19、2、本专利技术示例的同源肿瘤细胞和西洋参复合外泌体制备方法，利用同源肿瘤细胞和西洋参的复合外泌体作为药物递送载体来递送tmz/res治疗gbm，实现了化疗药物的靶向递送，减少了药物相关毒副作用，协同发挥了西洋参外泌体的治疗作用；
20、3、本专利技术示例的同源肿瘤细胞和西洋参复合外泌体制备方法，在更接近患者肿瘤真实情况的类器官模型和原位cdx和pdx模型上验证了u87/ag-exos@tmz/res的疗效，使得治疗结果更临床价值。
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1.一种同源肿瘤细胞和西洋参复合外泌体制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种同源肿瘤细胞和西洋参复合外泌体制备方法，其特征在于，步骤S1中，U87-Exos的离心方式为：(1)在4℃条件下离心后通过0.22μm孔径过滤；(2)将滤液在4℃下继续离心，弃去上清液，并洗涤沉淀。
3.根据权利要求2所述的一种同源肿瘤细胞和西洋参复合外泌体制备方法，其特征在于，步骤(1)中，细胞的离心方式为：在4℃条件下，依次在300×g、2000×g和10000×g条件下离心10min、10min和30min；
4.根据权利要求1所述的一种同源肿瘤细胞和西洋参复合外泌体制备方法，其特征在于，步骤S2中，AG-Exos的离心方式为：在4℃条件下，依次在1000-2000×g、5000-10000×g、100000-200000×g、200000×g、100000×g条件下离心15-25min、30-40min、1-3h、2.5h、1h。
5.根据权利要求1所述的一种同源肿瘤细胞和西洋参复合外泌体制备方法，其特征在于，步骤S3中，
6.根据权利要求1所述的一种同源肿瘤细胞和西洋参复合外泌体制备方法，其特征在于，步骤S4中，所述替莫唑胺和白藜芦醇的比例为：1.7μg/mL：1μg/mL。
7.根据权利要求1所述的一种同源肿瘤细胞和西洋参复合外泌体制备方法，其特征在于，步骤S4中，所述U87/AG-Exos与替莫唑胺和白藜芦醇混合药物的质量比为：mU87/AG-Exos：m药物＝5：1。
8.根据权利要求1所述的一种同源肿瘤细胞和西洋参复合外泌体制备方法，其特征在于，步骤S4中，所述超声的条件为：振幅20％，开4s，关2s，循环6次；
...【技术特征摘要】
1.一种同源肿瘤细胞和西洋参复合外泌体制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种同源肿瘤细胞和西洋参复合外泌体制备方法，其特征在于，步骤s1中，u87-exos的离心方式为：(1)在4℃条件下离心后通过0.22μm孔径过滤；(2)将滤液在4℃下继续离心，弃去上清液，并洗涤沉淀。
3.根据权利要求2所述的一种同源肿瘤细胞和西洋参复合外泌体制备方法，其特征在于，步骤(1)中，细胞的离心方式为：在4℃条件下，依次在300×g、2000×g和10000×g条件下离心10min、10min和30min；
4.根据权利要求1所述的一种同源肿瘤细胞和西洋参复合外泌体制备方法，其特征在于，步骤s2中，ag-exos的离心方式为：在4℃条件下，依次在1000-2000×g、5000-10000×g、100000-200000×g、200000×...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴君，王珏，蓝林欣，荆雪宁，苗久旺，郭春静，陈大全，
申请(专利权)人：山东中医药高等专科学校，
类型：发明
国别省市：
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