【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及a01h，涉及通过组织培养技术的植物再生领域，具体涉及一种用于草莓脱毒苗检测的病毒阳性对照质粒及检测引物序列
技术介绍
1、草莓病毒危害面广，是草莓生产上的重要病害，草莓病毒的发生和危害已成为中国草莓生产上亟须解决的问题。选用脱毒种苗进行草莓种植是解决草莓病毒的重要手段。但是现有的草莓脱毒苗并不能实现真正意义上的脱除病毒，检测脱毒苗的周期长，检测时无阳性对照，导致脱毒效果无法进行有效验证，进一步加剧了草莓产业的病毒传播风险，因此开发一种用于草莓脱毒苗检测的病毒阳性对照质粒至关重要。
2、中国专利技术专利cn113684319a公开了一种用于快速检测草莓轻型黄边病毒的特异性核酸序列及其扩增引物、试剂盒及方法，通过筛选草莓轻型黄边病毒特异保守引物和探针，基于逆转录-重组酶聚合酶恒温扩增方法，结合试纸条将扩增产物结果可视化，实现草莓轻型黄边病毒简单、快速、高灵敏检测，但是无阳性对照，检测准确度低。中国专利技术专利cn114280292a公开了一种草莓轻型黄边病毒胶体金试纸条及其制备方法与应用，胶体金标记抗体为胶体金标记由草莓轻型黄边病毒制备的多抗，检测线t由草莓轻型黄边病毒制备的多抗形成；质控线c由鼠抗兔igg或鼠抗兔igg溶液形成，胶体金快速检测试纸条检测快速且特异性强，便于对草莓种苗、脱毒苗等进行快速检测，但是制备步骤复杂，并且无阳性对照，准确度不高。
技术实现思路
1、为了开发一种用于草莓脱毒苗检测的病毒阳性对照质粒，本专利技术的第一个方面提供了一种用于草
2、aggcncaygchcaccahtgtachgttagagayytggtgaagytnaataaagtagahgtnytvmggcccathtgggccytwgattagg。
3、作为一种优选的实施方式，所述病毒阳性对照质粒的制备方法包括以下步骤：
4、s1种植草莓苗，区分表现出病毒表型和未表现出病毒表型的草莓植株；
5、s2取表现出病毒表型和未表现出病毒表型的草莓植株的成熟组织，提取总rna；
6、s3将提取的rna纯化检测，测序，将rna序列与数据库对比，合并成序列链；
7、s4将序列链设计成包含亚型病毒的cdna序列模板，得到阳性对照质粒；
8、s5设计病毒检测rt-pcr引物，验证阳性对照质粒的准确性。
9、本专利技术的第二个方面提供了一种检测引物，其是采用上述用于草莓脱毒苗检测的病毒阳性对照质粒的制备方法得到的病毒检测rt-pcr引物。
10、作为一种优选的实施方式，所述检测引物的序列如下：
11、smyev-f-q：aggcncaygchcaccahtgt
12、smyev-r-q：cctaatcsarggcccadatggg。
13、作为一种优选的实施方式，所述步骤s2中将成熟组织采用液氮研磨法研磨样品，然后采用试剂盒提取总rna。
14、作为一种优选的实施方式，所述数据库包括mrna数据库、rfam数据库、repbase数据库的组合。
15、作为一种优选的实施方式，所述步骤s1中草莓植株表现出的病毒表型为草莓轻型黄边病毒。
16、作为一种优选的实施方式，所述步骤s3中提取的rna纯化检测包括rna完整性检测和rna纯度检测。
17、作为一种优选的实施方式，应用于草莓脱毒苗的检测中，所述草莓脱毒苗的检测方法包括以下步骤：
18、m1采集草莓脱毒苗的组织样本；
19、m2提取草莓脱毒苗组织样本的总rna；
20、m3将总rna逆转录为cdna；
21、m4利用rt-pcr引物进行pcr扩增，病毒阳性对照质粒作为阳性对照，无病毒样本作为阴性对照；
22、m5通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，比较pcr扩增产物与阳性对照，阴性对照的条带分布，判断是否含有病毒。
23、作为一种优选的实施方式，所述pcr扩增的条件如下：90-98℃，8-13min；90-98℃，10-20s；55-65℃，0.5-1.5min，循环40次。
24、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
25、(1)本专利技术所述用于草莓脱毒苗检测的病毒阳性对照质粒，采用表现出病毒表型的草莓植株进行提取rna，提取步骤简便，简化了阳性对照质粒的制备步骤。
26、(2)本专利技术所述用于草莓脱毒苗检测的病毒阳性对照质粒，应用于草莓脱毒苗的检测中，可以精准评估草莓种苗的脱毒效果，提高了脱毒效果的检测准确度。
27、(3)本专利技术所述用于草莓脱毒苗检测的病毒阳性对照质粒，应用于草莓脱毒苗的检测中，实现了快速，高效检测，缩短了检测时间。
28、(4)本专利技术所述用于草莓脱毒苗检测的病毒阳性对照质粒，针对草莓轻型黄边病毒可以实现优异检测，检测特异性好，可应用于多种草莓品种的检测。
29、(5)本专利技术所述用于草莓脱毒苗检测的病毒阳性对照质粒，作为阳性对照，可以适用于大规模草莓区域的种植，为草莓产业的健康发展提供了技术保障，应用前景广阔。
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1.一种用于草莓脱毒苗检测的病毒阳性对照质粒，其特征在于，所述病毒阳性对照质粒的序列如下：
2.根据权利要求1所述用于草莓脱毒苗检测的病毒阳性对照质粒，其特征在于，所述病毒阳性对照质粒的制备方法包括以下步骤：
3.一种检测引物，其特征在于，是采用权利要求2所述用于草莓脱毒苗检测的病毒阳性对照质粒的制备方法得到的病毒检测RT-PCR引物。
4.根据权利要求3所述检测引物，其特征在于，所述检测引物的序列如下：SMYEV-F-Q：AGGCNCAYGCHCACCAHTGT
5.根据权利要求2所述用于草莓脱毒苗检测的病毒阳性对照质粒，其特征在于，所述步骤S2中将成熟组织采用液氮研磨法研磨样品，然后采用试剂盒提取总RNA。
6.根据权利要求2所述用于草莓脱毒苗检测的病毒阳性对照质粒，其特征在于，所述数据库包括mRNA数据库、RFam数据库、Repbase数据库的组合。
7.根据权利要求2所述用于草莓脱毒苗检测的病毒阳性对照质粒，其特征在于，所述步骤S1中草莓植株表现出的病毒表型为草莓轻型黄边病毒。
8.根据权
9.根据权利要求2所述用于草莓脱毒苗检测的病毒阳性对照质粒，其特征在于，应用于草莓脱毒苗的检测中，所述草莓脱毒苗的检测方法包括以下步骤：
10.根据权利要求9所述用于草莓脱毒苗检测的病毒阳性对照质粒，其特征在于，所述PCR扩增的条件如下：90-98℃，8-13min；90-98℃，10-20s；55-65℃，0.5-1.5min，循环40次。
...【技术特征摘要】
1.一种用于草莓脱毒苗检测的病毒阳性对照质粒，其特征在于，所述病毒阳性对照质粒的序列如下：
2.根据权利要求1所述用于草莓脱毒苗检测的病毒阳性对照质粒，其特征在于，所述病毒阳性对照质粒的制备方法包括以下步骤：
3.一种检测引物，其特征在于，是采用权利要求2所述用于草莓脱毒苗检测的病毒阳性对照质粒的制备方法得到的病毒检测rt-pcr引物。
4.根据权利要求3所述检测引物，其特征在于，所述检测引物的序列如下：smyev-f-q：aggcncaygchcaccahtgt
5.根据权利要求2所述用于草莓脱毒苗检测的病毒阳性对照质粒，其特征在于，所述步骤s2中将成熟组织采用液氮研磨法研磨样品，然后采用试剂盒提取总rna。
6.根据权利要求2所述用于草莓脱毒苗检测的病毒阳性对照质粒，其特征在于...
【专利技术属性】
技术研发人员：鲍晟杰，俞皓，陈华恺，杨博瀚，施泉竹，
申请(专利权)人：广州新果种苗有限公司，
类型：发明
国别省市：
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