【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子生物学，具体涉及一种甘蓝型油菜波利马细胞质不育基因的snp分子标记、引物组、应用及方法。
技术介绍
1、细胞质雄性不育(cms)是一种不能产生有活力花粉的母性遗传现象，是由线粒体基因组的重排引起的。波利马细胞质雄性不育系(polima cms，简写为pol-cms)是国际上公认为第一个具有生产价值的甘蓝型油菜细胞质不育类型。快速高效的鉴定pol-cms细胞质不育基因，有利于育种材料类型的精确鉴定和选择，提高育种效率；还有利于鉴定亲本的纯度，保障油菜亲本材料的质量，确保杂种优势利用。
2、建立以分子标记为基础的种子纯度鉴定技术体系是提高种子纯度鉴定工作效率的重要途径。迄今，前人已经利用srap(sequence relatedamplified polymorphism，相关序列扩增多态性)、rapd(randomamplifiedpolymorphic dna，随机扩增多态性dna)、ssr(simple sequence repeat，简单序列重复)和issr(inter-simple sequence repeat，简单重复序列间扩增)等分子标记对甘蓝型油菜杂交种纯度进行鉴定研究，并取得良好的效果。然而，上述分子标记技术还无法满足高通量和低成本的需求。
3、近年来，竞争性等位基因特异性pcr(kompetitive allele specific pcr，kasp)因其简单、可重复、稳定、准确、快速、低成本等优点被广泛应用于多种作物中。研究证明不同pol-cms的线粒体上的不育基因(
4、综上所述，需要开发一种甘蓝型油菜波利马细胞质雄性不育基因的snp分子标记、引物组、应用及方法，为pol-cms不育基因分子标记辅助育种、不育系和保持系亲本的纯度鉴定提供新的思路。
技术实现思路
1、本专利技术目的在于提供一种甘蓝型油菜波利马细胞质雄性不育基因的snp分子标记、引物组、应用及方法，具体技术方案如下：
2、在第一方面，本专利技术提供了一种甘蓝型油菜波利马细胞质雄性不育基因的snp分子标记，所述snp分子标记为bn9000345，其核苷酸序列如seq id no.1和seq id no.2。
3、在第二方面，本专利技术提供了一种所述snp分子标记的引物组，包括bn9000345_k01_x、bn9000345_k01_y和bn9000345_k01_c；
4、所述bn9000345_k01_x对应的核苷酸序列如seq id no.3；所述bn9000345_k01_y对应的核苷酸序列如seq id no.4；所述bn9000345_k01_c对应的核苷酸序列如seq idno.5。
5、在第三方面，本专利技术提供了一种所述snp分子标记在检测甘蓝型油菜是否为波利马不育胞质类型中的应用。
6、在第四方面，本专利技术提供了一种检测甘蓝型油菜是否为波利马不育胞质类型的方法，包括：
7、步骤s1、从甘蓝型油菜中提取基因组dna；
8、步骤s2、以步骤s1中提取的基因组dna为模板，利用如权利要求2中所述的引物组对bn9000345分子标记进行检测；
9、步骤s3、根据检测到的基因型确定所述甘蓝型油菜是否为波利马不育胞质类型。
10、可选的，在步骤s2中，在所述bn9000345_k01_x和所述bn9000345_k01_y的5′端分别连接fam和hex荧光接头序列。
11、可选的，在步骤s3中，检测到的基因型包括纯合t等位基因型和含a等位基因型；其中，纯合t等位基因型为波利马不育胞质类型，检测结果显示为红色；含a等位基因型为波利马可育胞质类型，检测结果显示为蓝色。
12、应用本专利技术的技术方案，至少具有以下有益效果：
13、本专利技术提供的一种甘蓝型油菜波利马细胞质雄性不育基因的snp分子标记、引物组、应用及方法，通过对甘蓝型油菜波利马细胞质雄性不育基因的snp分子标记，应用引物组和kasp技术对甘蓝型油菜波利马细胞质雄性不育基因进行检测，可以快速准确的检测油菜中是否含有甘蓝型油菜波利马细胞质雄性不育基因，从而利用snp分子标记辅助选择育种，简单有效，可以降低育种成本和育种周期。另外，利用kasp技术对所开发的snp分子标记进行基因分型，在kasp技术流程中进行dna抽提、pcr体系构建和荧光信号检测等基本自动化，可实现96、384和1536孔板高通量检测，适用于大规模和高通量的甘蓝型油菜波利马细胞质雄性不育基因鉴定(如不育系和保持系亲本的纯度鉴定)和筛选。
14、除了上面所描述的目的、特征和优点之外，本专利技术还有其它的目的、特征和优点。下面将参照图，对本专利技术作进一步详细的说明。
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1.一种甘蓝型油菜波利马细胞质雄性不育基因的SNP分子标记，其特征在于，所述SNP分子标记为BN9000345，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2。
2.一种如权利要求1所述的SNP分子标记的引物组，其特征在于，包括BN9000345_K01_X、BN9000345_K01_Y和BN9000345_K01_C；
3.一种如权利要求1所述的SNP分子标记在检测甘蓝型油菜是否为波利马不育胞质类型中的应用。
4.一种检测甘蓝型油菜是否为波利马不育胞质类型的方法，其特征在于，包括：
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，在步骤S2中，在所述BN9000345_K01_X和所述BN9000345_K01_Y的5′端分别连接FAM和HEX荧光接头序列。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，在步骤S3中，检测到的基因型包括纯合T等位基因型和含A等位基因型；其中，纯合T等位基因型为波利马不育胞质类型，检测结果显示为红色；含A等位基因型为波利马可育胞质类型，检测结果显示为蓝色。
【技术特征摘要】
1.一种甘蓝型油菜波利马细胞质雄性不育基因的snp分子标记，其特征在于，所述snp分子标记为bn9000345，其核苷酸序列如seq id no.1和seq id no.2。
2.一种如权利要求1所述的snp分子标记的引物组，其特征在于，包括bn9000345_k01_x、bn9000345_k01_y和bn9000345_k01_c；
3.一种如权利要求1所述的snp分子标记在检测甘蓝型油菜是否为波利马不育胞质类型中的应用。
4.一种检测甘蓝...
【专利技术属性】
技术研发人员：李宝，李莓，郭一鸣，周兴，惠容奎，邓力超，范连益，
申请(专利权)人：湖南省作物研究所，
类型：发明
国别省市：
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