【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于化学领域，具体涉及一种阳离子脂质化合物的制备方法。
技术介绍
1、脂质纳米粒作为非常有前景的多种治疗剂载体，在制药行业已备受关注。脂质体是最早出现的一类lnps，可以运输疏水或亲水分子，包括小分子、蛋白质和核酸，是一种用途极为广泛的纳米载体平台。事实上，脂质体也是最早一类成功实现从概念到临床应用转化的纳米药物递送平台，许多脂质体药物制剂已获批上市并成功应用于医疗实践。新一代lnps，包括固体脂质纳米粒、纳米结构脂质载体和阳离子脂质-核酸复合物，表现出更复杂的内部结构和更优秀的物理稳定性。lnps能够控制体内药物递送的靶向位置和时间，可为多种疾病提供治疗方案。
2、核酸在医学中具有多种作用，包括基因治疗剂和rna治疗剂。然而，核酸带负电荷且呈亲水性，阻碍了它们跨质膜的被动扩散。因此，核酸需要递送载体来保护它们免于降解并将它们递送至靶细胞以内进行有效摄取。包含合成阳离子脂质和阴离子核酸的稳定复合物的阳离子lnps，是使用最广泛的核酸药物非病毒递送系统。
3、阳离子脂质体作为基因载体的优势在于其能够形成稳定的复合物，保护核酸免受核酸酶的降解，同时还能提高转染效率。这些复合物一旦与细胞膜融合，就会将包裹的核酸释放到细胞质中，然后通过细胞内吞机制进入细胞核，实现基因的表达。阳离子脂质体在临床试验中已经取得了显著的成果。例如，用于癌症治疗的肿瘤抑制剂、用于遗传性疾病的基因替代治疗以及用于疫苗开发的基因免疫疗法等。随着技术的不断发展，阳离子脂质体作为一种安全、有效的基因传递系统，有望在未来的基因治疗中发挥
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供了一种路线原料易得、反应选择性高、产品容易分离的阳离子脂质体制备工艺，利用上述工艺可生产出高质量的阳离子脂质体，有利于工业化生产。
2、本专利技术第一个方面公开了一种阳离子脂质体制备工艺，包括以下步骤：
3、s1. 以n,n-双(3-氨丙基)甲胺与1,2-环氧癸烷反应得到环氧开环产物a1-ep10-o18a-1；反应式为：
4、 ；
5、s2.在缚酸剂的存在下，以亚麻醇为起始原料，与丙烯酰氯反应得到丙烯酸亚麻酯lin-aa；反应式为：
6、 ；
7、s3.将环氧开环产物a1-ep10-o18a-1再与丙烯酸亚麻酯加成得到目标产物；反应式为：
8、。
9、优选的，所述步骤s1中，n,n-双(3-氨丙基)甲胺与1,2-环氧癸烷的投料比例应为5:1~10:1，产率最好，且副产物较少（多取代产物），考虑到成本及后处理，优选为5:1的当量比。
10、优选的，所述步骤s1中，反应温度应在60~90℃之间，优选为80℃；反应时间为5~24小时，优选为16h。
11、优选的，所述步骤s1中，反应在有机质子溶剂中进行，选为无水乙醇；底物与溶剂的质量体积比为1：1~100（mg/ml），优选为1：2（mg/ml）。
12、优选的，所述步骤s1中，反应进程优选地用气相色谱或液相色谱跟踪、控制，具体在多高的温度反应、反应多长时间,根据检测结果决定。
13、优选的，所述步骤s1中，后处理操作为：盐洗萃取，干燥过滤，浓缩，干燥，得到中间体a1-ep10-o18a-1。
14、优选的，所述步骤s2中，亚麻醇和丙烯酰氯的摩尔比应在1：1.05~1.5之间，优选为1：1.1的当量比。
15、优选的，所述步骤s2中，反应温度应在-5~10℃之间，优选为0~5℃；反应时间为1~5小时，优选为2h。
16、优选的，所述步骤s2中，反应在缚酸剂作用下发生反应，所述缚酸剂选自有机碱或无机碱，优选的所述有机碱选自但不限于三乙胺、二乙基异丙基胺、吡啶、dmap、dbu中的一种或多种，所述无机碱选自碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾中的一种或多种，优选为三乙胺。
17、优选的，所述步骤s2中，缚酸剂当量应在1.05~2之间，优选为1.1当量。
18、优选的，所述步骤s2中，反应在有机惰性非质子溶剂中进行，优选的所述溶剂选自干燥的二氯甲烷、四氢呋喃、dmf、dmso、丙酮、二氧六环中的一种或多种，优选为无水二氯甲烷；底物与溶剂的质量体积比为1：1~50（mg/ml），优选为1：1（mg/ml）。
19、优选的，所述步骤s2中，后处理操作为：酸洗萃取，过滤，干燥浓缩，柱层析纯化，干燥，得到中间体lin-aa。
20、优选的，所述步骤s3中，a1-ep10-o18a-1和lin-aa的摩尔比应在1：3.3~3.9之间，优选为1：3.5。
21、优选的，所述步骤s3中，反应无溶剂反应或在有机溶剂中进行，所述有机溶剂选自干燥的乙腈、乙醇、异丙醇、四氢呋喃、甲苯、二氧六环中的一种或多种，优选为无水乙醇；a1-ep10-o18a-1与溶剂的质量体积比为1：0~20（mg/ml），优选为1：1（mg/ml）。
22、优选的，所述步骤s3中，反应温度应在60~90℃之间，优选为80℃；时间为16~48h之间，优选为16h。
23、优选的，所述步骤s3中，应加入0.05当量bht作为反应稳定剂（所述反应稳定剂可以防止反应过程中聚合反应发生）。
24、优选的，所述步骤s3中，可加入适量催化剂催化反应，催化剂当量应在0~0.05之间，优选为0当量；所述催化剂优选为醋酸或硼酸。
25、优选的，所述步骤s3中，还包括采用柱层析分离精制技术对粗产品进行精制的步骤。所述柱层析分离精制过程中，采用的洗脱液优选为二氯甲烷-甲醇的混合液,体积比优选为100:1~20:1。通过tlc监测收集产物（以dcm-meoh ( 10:1 ) 为展开剂，以磷钼酸为显色剂），合并收集的产品洗脱液。
26、优选的，所述步骤s3中，后处理操作为：浓缩，柱层析纯化，浓缩过膜，干燥，得到目标产物。
27、本专利技术第二个方面公开了利用上述工艺生产的阳离子脂质体。
28、相对于现有技术，本专利技术取得如下有益效果：本专利技术开发了一种新阳离子脂质体的制备工艺，所制备得到的阳离子脂质体适合作为药用脂质体辅料。同时为lnp递送系统的发展提供了更好的选择，对推动疫苗的产业化发展有着重要的意义。
29、本专利技术同时提供的上述阳离子脂质体的合成工艺，其路线原料易得、反应选择性高、产品容易分离，有利于工业化生产。
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1.一种阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤S1中，N,N-双(3-氨丙基)甲胺与1,2-环氧癸烷的比例为5:1~10:1。
3.根据权利要求2所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤S1中，N,N-双(3-氨丙基)甲胺与1,2-环氧癸烷的比例为5:1。
4.根据权利要求1所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤S1中，反应温度在60~90℃之间，反应时间为5~24h。
5.根据权利要求4所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤S1中，反应温度为80℃，反应时间为16h。
6.根据权利要求1所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤S1中，反应在有机质子溶剂中进行，所述有机质子溶剂包括无水乙醇。
7.根据权利要求1所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤S1中，底物与溶剂的质量体积比为1：1~100。
8.根据权利要求7所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于
9.根据权利要求1所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤S1中，反应进程用气相色谱或液相色谱跟踪、控制。
10.根据权利要求1所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤S1中，反应完成后对产物进行盐洗萃取、干燥过滤、浓缩和干燥，得到环氧开环产物A1-EP10-O18A-1。
11.根据权利要求1所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤S2中，亚麻醇和丙烯酰氯的摩尔比为1：1.05~1.5。
12.根据权利要求11所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤S2中，亚麻醇和丙烯酰氯的摩尔比为1：1.1。
13.根据权利要求1所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤S2中，反应温度为-5~10℃，反应时间为1~5h。
14.根据权利要求13所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤S2中，反应温度为0~5℃，反应时间为2h。
15.根据权利要求1所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤S2中，所述缚酸剂选自有机碱或无机碱。
16.根据权利要求15所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤S2中，所述有机碱包括三乙胺、二乙基异丙基胺、吡啶、DMAP、DBU中的一种或多种，所述无机碱包括碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾中的一种或多种。
17.根据权利要求15所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤S2中，所述缚酸剂优选为三乙胺。
18.根据权利要求15-17任一项所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤S2中，所述缚酸剂当量在1.05~2之间。
19.根据权利要求18所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，所述缚酸剂为1.1当量。
20.根据权利要求1所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤S2中，反应在有机惰性非质子溶剂中进行；
21.根据权利要求20所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，所述有机惰性非质子溶剂选为无水二氯甲烷。
22.根据权利要求20所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，底物与有机惰性非质子溶剂溶剂的质量体积比为1：1~50。
23.根据权利要求22所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，底物与有机惰性非质子溶剂溶剂的质量体积比为1：1。
24.根据权利要求1所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤S2中，反应完成，对产物酸洗萃取、过滤、干燥浓缩、柱层析纯化和干燥后，得到丙烯酸亚麻酯Lin-AA。
25.根据权利要求1所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤S3中，A1-EP10-O18A-1和Lin-AA的摩尔比在1：3.3~3.9之间。
26.根据权利要求25所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤S3中，A1-EP10-O18A-1和Lin-AA的摩尔比为1：3.5。
27.根据权利要求1所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤S3中，反应为无溶剂反应或在有机溶剂中进行。
28.根据权利要求27所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，所述有机溶剂选自干燥的乙腈、乙醇、异丙醇、四氢呋喃、甲苯、二氧六环中的一种或多种。
29.根据权利要求27所述的阳离子脂质化合物...
【技术特征摘要】
1.一种阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤s1中，n,n-双(3-氨丙基)甲胺与1,2-环氧癸烷的比例为5:1~10:1。
3.根据权利要求2所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤s1中，n,n-双(3-氨丙基)甲胺与1,2-环氧癸烷的比例为5:1。
4.根据权利要求1所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤s1中，反应温度在60~90℃之间，反应时间为5~24h。
5.根据权利要求4所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤s1中，反应温度为80℃，反应时间为16h。
6.根据权利要求1所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤s1中，反应在有机质子溶剂中进行，所述有机质子溶剂包括无水乙醇。
7.根据权利要求1所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤s1中，底物与溶剂的质量体积比为1：1~100。
8.根据权利要求7所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤s1中，底物与溶剂的质量体积比为1：2。
9.根据权利要求1所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤s1中，反应进程用气相色谱或液相色谱跟踪、控制。
10.根据权利要求1所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤s1中，反应完成后对产物进行盐洗萃取、干燥过滤、浓缩和干燥，得到环氧开环产物a1-ep10-o18a-1。
11.根据权利要求1所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤s2中，亚麻醇和丙烯酰氯的摩尔比为1：1.05~1.5。
12.根据权利要求11所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤s2中，亚麻醇和丙烯酰氯的摩尔比为1：1.1。
13.根据权利要求1所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤s2中，反应温度为-5~10℃，反应时间为1~5h。
14.根据权利要求13所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤s2中，反应温度为0~5℃，反应时间为2h。
15.根据权利要求1所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤s2中，所述缚酸剂选自有机碱或无机碱。
16.根据权利要求15所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤s2中，所述有机碱包括三乙胺、二乙基异丙基胺、吡啶、dmap、dbu中的一种或多种，所述无机碱包括碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾中的一种或多种。
17.根据权利要求15所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤s2中，所述缚酸剂优选为三乙胺。
18.根据权利要求15-17任一项所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤s2中，所述缚酸剂当量在1.05~2之间。
19.根据权利要求18所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，所述缚酸剂为1.1当量。
20.根据权利要求1所述的阳离子脂质化合物的制备工艺，其特征在于，步骤s2中，反应在有机惰性非质子溶剂中进行；
21.根据权...
【专利技术属性】
技术研发人员：喻学亮，董兴华，胡荣宽，
申请(专利权)人：星锐医药苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：
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