【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医学与纳米材料领域，特别涉及一种用于快速检测降钙素原的纳米探针、其制备方法及降钙素原的检测方法。
技术介绍
1、抗菌药物合理应用是细菌感染性疾病治疗的核心。抗菌药物疗程过长是导致耐药的主要原因之一，合理的停药时机仍是临床面临巨大难题。实验诊断技术的快速发展，为抗菌药物合理应用提供了更多的参考依据。
2、降钙素原(pct)已被广泛应用于细菌感染性疾病诊断和治疗的重要参考指标，pct在下呼吸道感染和重症监护病房(icu)重症感染患者抗菌药物治疗疗程中的指导价值逐渐被认可。pct近年来被认为是一种机体对细菌感染的全身炎症反应的特异性指标，含有116个氨基酸。败血症是医院面临的日常挑战，死亡率高达50％。目前已知各种治疗策略可改善败血症患者的生存率。败血症的识别和治疗越早，预后越好。急性呼吸道感染是败血症的主要原因，约占全球发病率和死亡率的10％。正常生理状态下，pct只由甲状腺c细胞合成，在血浆内含量很少，在全身炎症反应和败血症的情况下，pct可由甲状腺以外组织大量产生，血浆内pct含量迅速升高。pct在血中的半衰期为25～30h，体内稳定性好，血清和血浆中的检测值无明显差异，对于细菌感染或脓毒症的早期诊断、提高诊断准确率、判断感染疾病严重程度和感染疾病预后评估等有较高的临床价值。近年来，传统的定量和半定量检测方法包括胶体金标志检验、放射免疫分析法、免疫荧光法、双抗体夹心免疫化学发光法、酶免法再pct检测中发挥重要作用，但它们存在一定的局限性，包括消耗时间长、检验灵敏度不够等。因此需要更加快速、准确的检测技术
3、时间分辨荧光共振能量转移(fret)法结合荧光纳米材料和修饰抗体形成双荧光探针，供体发射光谱与受体激发光谱有效重叠实现荧光能量转移延长反应时间便于观察，尤其是在高灵敏性的检测项目具有潜在的应用前景。它通过两种荧光纳米材料表面的官能团有效与识别抗体端偶联，根据“双抗体夹心法”形成“抗体-抗原-抗体”形成完整的免疫反应体系，快速实现供受体能量转移，实现对分子的高灵敏度检测。因此，采用抗体修饰的荧光纳米材料制备探针实现共振能量转移的fret法，为临床高灵敏度项目的快速检测提供了一种全新的方法和思路。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题在于针对上述现有技术中的不足，提供一种用于快速检测降钙素原的纳米探针、其制备方法及降钙素原的检测方法。
2、为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：本专利技术的第一方面，提供一种用于快速检测降钙素原的纳米探针的制备方法，该纳米探针包括供体探针b-cds-ab1和受体探针g-cds-ab2，该方法包括以下步骤：
3、s1、合成供体荧光纳米粒子b-cds：
4、s1-1、将柠檬酸粉末在磁力搅拌下溶解于纯化水中，直到溶液达到透明；随后，加入乙二胺形成均匀的混合溶液1；
5、s1-2、将混合溶液1加入到高压反应釜中，加热下反应，反应结束后冷却至室温，将所得产物溶液过滤，所得滤液与硅胶混合均匀后使用旋转蒸发仪进行蒸发，得到粗产品粉末1；
6、s1-3、采用色谱柱分离方法对粗产品粉末1进行提纯，采用甲醇和二氯甲烷的混合液作为洗脱剂进行梯度洗脱，将收集到的洗脱溶液与硅胶混合进行第二次自旋蒸发，最终得到供体荧光纳米粒子：b-cds，保存备用；
7、s2、合成受体荧光纳米粒子g-cds：
8、将西番莲提取物粉末和间苯二胺粉末在磁力搅拌下溶解于纯化水中，得到混合溶液2；
9、将混合溶液2加入到高压反应釜，加热下反应，反应结束后冷却至室温，所得产物溶液离心，将离心所得上清液与硅胶混合均匀后使用旋转蒸发仪进行蒸发，得到粗产品粉末2；
10、采用色谱柱分离方法对粗产品粉末2进行提纯，采用甲醇和二氯甲烷的混合液作为洗脱剂进行梯度洗脱，将收集到的洗脱溶液与硅胶混合进行第二次自旋蒸发，最终得到受体荧光纳米粒子：g-cds，保存备用；
11、s3、合成供体探针b-cds-ab1：
12、s3-1、取供体荧光纳米粒子b-cds溶解于pbs溶液中，过滤弃滤渣，得到b-cds溶液；
13、s3-2、将edc和nhs加入到b-cds溶液中，孵育，然后加入抗体1溶液，孵育；
14、其中，抗体1溶液为采用pbs配制的ab1溶液；
15、s3-3、取步骤s3-2得到的产物离心，弃上清液，得到b-cds-ab1浓缩液，加入pbs缓冲溶液重新离心洗涤去除未参与反应的edc、nhs和抗体1，得到供体探针：b-cds-ab1，保存备用；
16、s4、合成受体探针g-cds-ab2：
17、s4-1、取受体荧光纳米粒子g-cds溶解于pbs溶液中，过滤，弃滤渣，得到g-cds溶液；
18、s4-2、将edc和nhs加入到g-cds溶液中，孵育，然后加入抗体2溶液，孵育；
19、其中，抗体2溶液为采用pbs配制的ab2溶液；
20、s4-3、取步骤s4-2得到的产物离心，保留上清液，得到b-cds-ab1浓缩液，加入pbs缓冲溶液重新离心洗涤去除未参与反应的edc、nhs和抗体2，得到受体探针：g-cds-ab2，保存备用。
21、优选的是，步骤s1具体为：
22、s1-1、将0.5-2g柠檬酸粉末在磁力搅拌下溶解于5-30ml纯化水中，直到溶液达到透明；随后，加入150-600μl乙二胺形成均匀的混合溶液1；
23、s1-2、将混合溶液1加入到高压反应釜中，在160-200℃下反应3-12h，反应结束后冷却至室温，将所得产物溶液使用0.2-0.3μm的微孔膜过滤，所得滤液与1-4g硅胶混合均匀后使用旋转蒸发仪进行蒸发，得到粗产品粉末1；
24、s1-3、采用色谱柱分离方法对粗产品粉1末进行提纯，采用甲醇和二氯甲烷以体积比1：10组成的混合液作为洗脱剂进行梯度洗脱，将收集到的洗脱溶液与1-4g硅胶混合进行第二次自旋蒸发，最终得到供体荧光纳米粒子：b-cds，0-5℃下保存备用。
25、优选的是，步骤s2具体为：
26、s2、合成受体荧光纳米粒子g-cds：
27、将0.25-1g西番莲提取物粉末和0.4-1.6g间苯二胺粉末在磁力搅拌下溶解于15-60ml纯化水中，得到混合溶液2；
28、将混合溶液2加入到高压反应釜，140-180℃下反应4-16h，反应结束后冷却至室温，所得产物溶液在5000-20000rpm下离心15-60min，将离心所得上清液与1-4g硅胶混合均匀后使用旋转蒸发仪进行蒸发，得到粗产品粉末2；
29、采用色谱柱分离方法对粗产品粉1末进行提纯，采用甲醇和二氯甲烷以体积比1：10组成的混合液作为洗脱剂进行梯度洗脱，将收集到的洗脱溶液与1-4g硅胶混合进行第二次自旋蒸发，最终得到受体荧光纳米粒子本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于快速检测降钙素原的纳米探针的制备方法，其特征在于，该纳米探针包括供体探针B-CDs-Ab1和受体探针G-CDs-Ab2，该方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的用于快速检测降钙素原的纳米探针的制备方法，其特征在于，步骤S1具体为：
3.根据权利要求2所述的用于快速检测降钙素原的纳米探针的制备方法，其特征在于，步骤S2具体为：
4.根据权利要求3所述的用于快速检测降钙素原的纳米探针的制备方法，其特征在于，步骤S3具体为：
5.根据权利要求4所述的用于快速检测降钙素原的纳米探针的制备方法，其特征在于，步骤S4具体为：
6.根据权利要求1所述的用于快速检测降钙素原的纳米探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
7.一种用于快速检测降钙素原的纳米探针，其特征在于，其通过如权利要求1-6中任意一项所述的方法制备得到。
8.一种快速检测降钙素原的方法，该方法采用如权利要求7所述的纳米探针进行检测，该方法为：
9.根据权利要求8所述的快速检测降钙素原的方法，其特征在于，该方法为：
10.根据权利要求8所述的快速检测降钙素原的方法，其特征在于，其中，标准曲线的构建方法包括以下步骤：
11.根据权利要求10所述的快速检测降钙素原的方法，其特征在于，其中，标准曲线的构建方法包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种用于快速检测降钙素原的纳米探针的制备方法，其特征在于，该纳米探针包括供体探针b-cds-ab1和受体探针g-cds-ab2，该方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的用于快速检测降钙素原的纳米探针的制备方法，其特征在于，步骤s1具体为：
3.根据权利要求2所述的用于快速检测降钙素原的纳米探针的制备方法，其特征在于，步骤s2具体为：
4.根据权利要求3所述的用于快速检测降钙素原的纳米探针的制备方法，其特征在于，步骤s3具体为：
5.根据权利要求4所述的用于快速检测降钙素原的纳米探针的制备方法，其特征在于，步骤s4具体为：
6.根据权利要...
【专利技术属性】
技术研发人员：田雨鑫，李力，董文飞，
申请(专利权)人：中国科学院苏州生物医学工程技术研究所，
类型：发明
国别省市：
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