【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及抗体领域，尤其涉及重组抗体及其制备方法与核酸片段、表达载体、重组细胞和应用。
技术介绍
1、三碘甲状腺原氨酸(t3)是甲状腺分泌的一种激素，大约65％由甲状腺直接产生，35％由四碘甲状腺原氨酸(t4)在外周组织中脱碘形成，分子量约为650，是一种半抗原小分子物质。三碘甲状腺原氨酸几乎参与身体的每一个生理过程，包括生长发育、新陈代谢、调节体温和心率等。研究表明，总t3水平随甲状腺激素结合蛋白(tbg)的浓度变化而改变，t3是评价甲状腺功能的重要临床指标，对甲状腺功能亢进、甲状腺功能减退等甲状腺疾病的诊断和疗效检测有重要临床意义。
2、因此，开发稳定性好、活性高的能够特异性结合t3的抗体进而用于制备诊断甲状腺疾病检测试剂将具有重要意义。
技术实现思路
1、基于上述现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供重组抗体及其制备方法与核酸片段、表达载体、重组细胞和应用，旨在提供稳定性好、活性高且能够特异性结合t3抗原的重组抗体。
2、本专利技术的技术方案如下：
3、本专利技术的第一方面，提供一种重组抗体，其中，所述重组抗体为六聚体，所述重组抗体包括重链和轻链，所述重链包括重链可变区和重链恒定区，所述轻链包括轻链可变区和轻链恒定区；所述重链可变区氨基酸序列为绵羊源igg重链可变区氨基酸序列，所述重链恒定区氨基酸序列为人源igm重链恒定区氨基酸序列；所述轻链可变区氨基酸序列为绵羊源igg轻链可变区氨基酸序列，所述轻链恒定区氨基酸序列为人源igm轻链恒
4、可选地，所述重链可变区氨基酸序列如seq id no：1所示，所述重链恒定区ch1结构域的氨基酸序列如seq id no：2所示；所述重链恒定区ch2结构域、ch3结构域和ch4结构域的氨基酸序列如seq id no：3所示；
5、所述轻链可变区氨基酸序列如seq id no：4所示，所述轻链恒定区氨基酸序列如seq id no：5所示。
6、本专利技术的第二方面，提供一种核酸片段，其中，所述核酸片段含有编码本专利技术如上所述的重组抗体的核苷酸序列。
7、本专利技术的第三方面，提供一种表达载体，其中，所述表达载体含有本专利技术如上所述的核酸片段。
8、本专利技术的第四方面，提供一种重组细胞，其中，所述重组细胞含有本专利技术如上所述的表达载体。
9、本专利技术的第五方面，提供一种本专利技术如上所述的重组抗体的制备方法，其中，包括如下步骤：
10、将编码重链的核苷酸序列插入到第一质粒中，得到重组重链质粒；
11、将编码轻链的核苷酸序列插入到第二质粒中，得到重组轻链质粒；
12、将所述重组重链质粒和所述重组轻链质粒进行混合，然后转染至细胞中进行真核表达，依次进行盐析纯化和分子筛纯化后，得到所述重组抗体。
13、可选地，所述将编码重链的核苷酸序列插入到第一质粒中，得到重组重链质粒的步骤具体包括：
14、将编码绵羊源igg重链可变区核苷酸序列与编码人源igm重链恒定区核苷酸序列进行连接，得到编码重链的核苷酸序列；
15、将所述编码重链的核苷酸序列插入到第一质粒中，得到重组重链质粒；
16、其中，所述编码绵羊源igg重链可变区的核苷酸序列如seq id no：6所示，所述编码人源igm重链恒定区ch1结构域的核苷酸序列如seq id no：7所示，所述编码人源igm重链恒定区ch2结构域、ch3结构域和ch4结构域的核苷酸序列如seq id no：8所示。
17、可选地，所述将编码轻链的核苷酸序列插入到第二质粒中，得到重组轻链质粒的步骤具体包括：
18、将编码绵羊源igg轻链可变区的核苷酸序列与编码人源igm轻链恒定区的核苷酸序列进行连接，得到编码轻链的核苷酸序列；
19、将所述编码轻链的核苷酸序列插入到第二质粒中，得到重组轻链质粒；
20、所述编码绵羊源igg轻链可变区的核苷酸序列如seq id no：9所示；所述编码人源igm轻链恒定区的核苷酸序列如seq id no：10所示。
21、可选地，所述进行盐析纯化和分子筛纯化的步骤具体包括：
22、向表达后产物中加入硫酸铵，离心后，取上清；
23、采用凝胶过滤层析柱对所述上清进行分子筛纯化。
24、本专利技术的第六方面，提供一种本专利技术如上所述的重组抗体、本专利技术如上所述的核酸片段、本专利技术如上所述的表达载体、本专利技术如上所述的重组细胞或采用本专利技术如上所述的制备方法制备得到的重组抗体在制备诊断甲状腺疾病检测试剂中的应用。
25、有益效果：本专利技术提供的重组抗体是由不同种属的免疫球蛋白重组而成的六聚体，将绵羊源抗体人源化，具体将绵羊源igg的抗原结合部分fab段的可变区与人源igm恒定区重组融合，得到所述重组抗体也即人-绵羊嵌合抗体，所述重组抗体的人源化程度达到70％，完整地保留了绵羊源抗体的可变区，所述重组抗体的性能稳定、在高温和低温下均具有良好的稳定性，能够高效识别并结合t3抗原，且相比于绵羊源igg，所述重组抗体对t3抗原具有更高的亲和活性。
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1.一种重组抗体，其特征在于，所述重组抗体为六聚体，所述重组抗体包括重链和轻链，所述重链包括重链可变区和重链恒定区，所述轻链包括轻链可变区和轻链恒定区；所述重链可变区氨基酸序列为绵羊源IgG重链可变区氨基酸序列，所述重链恒定区氨基酸序列为人源IgM重链恒定区氨基酸序列；所述轻链可变区氨基酸序列为绵羊源IgG轻链可变区氨基酸序列，所述轻链恒定区氨基酸序列为人源IgM轻链恒定区氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的重组抗体，其特征在于，所述重链可变区氨基酸序列如SEQ IDNO：1所示，所述重链恒定区CH1结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；所述重链恒定区CH2结构域、CH3结构域和CH4结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示；
3.一种核酸片段，其特征在于，所述核酸片段含有编码权利要求1-2任一项所述的重组抗体的核苷酸序列。
4.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有权利要求3所述的核酸片段。
5.一种重组细胞，其特征在于，所述重组细胞含有权利要求4所述的表达载体。
6.一种权利要求1所述的重组抗体
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述将编码重链的核苷酸序列插入到第一质粒中，得到重组重链质粒的步骤具体包括：
8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述将编码轻链的核苷酸序列插入到第二质粒中，得到重组轻链质粒的步骤具体包括：
9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述进行盐析纯化和分子筛纯化的步骤具体包括：
10.一种权利要求1-2任一项所述的重组抗体、权利要求3所述的核酸片段、权利要求4所述的表达载体、权利要求5所述的重组细胞或采用权利要求6-9任一项所述的制备方法制备得到的重组抗体在制备诊断甲状腺疾病检测试剂中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种重组抗体，其特征在于，所述重组抗体为六聚体，所述重组抗体包括重链和轻链，所述重链包括重链可变区和重链恒定区，所述轻链包括轻链可变区和轻链恒定区；所述重链可变区氨基酸序列为绵羊源igg重链可变区氨基酸序列，所述重链恒定区氨基酸序列为人源igm重链恒定区氨基酸序列；所述轻链可变区氨基酸序列为绵羊源igg轻链可变区氨基酸序列，所述轻链恒定区氨基酸序列为人源igm轻链恒定区氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的重组抗体，其特征在于，所述重链可变区氨基酸序列如seq idno：1所示，所述重链恒定区ch1结构域的氨基酸序列如seq id no：2所示；所述重链恒定区ch2结构域、ch3结构域和ch4结构域的氨基酸序列如seq id no：3所示；
3.一种核酸片段，其特征在于，所述核酸片段含有编码权利要求1-2任一项所述的重组抗体的核苷酸序列。
4.一种表达载体，其特征在于，...
【专利技术属性】
技术研发人员：于函冬，孙成艳，
申请(专利权)人：迪瑞医疗科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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