【技术实现步骤摘要】
本申请涉及蛋白质或多肽领域，具体地涉及胶原蛋白、其制备方法和用途。
技术介绍
1、胶原蛋白是广泛分布于人体结缔组织的一类蛋白质，也是人体含量最多的蛋白质，可以占到蛋白质总量的25％～35％。它的主要功能体现在维护细胞外环境，维持组织器官的正常生理功能，修复肌体损伤等方面。胶原蛋白是天然的生物资源，具有其它高分子材料所望尘莫及的生物组织相容性，对细胞的支撑弹性和可降解性。因此，胶原蛋白可以广泛的应用在医药和化妆品等行业中。
2、近年来随着基因工程技术的广泛应用，研发人员创造出各种类型的重组胶原蛋白，例如可以通过选择来自天然人胶原蛋白的短氨基酸序列来构建重组胶原蛋白，这样构建的重组胶原蛋白具有例如免疫原性低、生物活性高、稳定性好等优点。理论上，这种重组胶原蛋白的氨基酸序列越短，透皮吸收性能越好，但是氨基酸序列不是越短越好。如何设计短氨基酸序列，才能使得构建的重组胶原蛋白具有更好的透皮吸收性能，现有技术中没有任何的理论可以作为指导。
3、vi型胶原蛋白是几乎所有结缔组织(包括软骨、骨骼、肌腱、肌肉和角膜)的细胞外基质的组成部分，在那里它形成丰富且结构独特的微纤维，组织成不同的结构组件。vi型胶原的缺失会影响纤连蛋白在细胞外基质中的排列。iv型胶原α1链的非三螺旋形式抑制血管内皮-钙粘蛋白介导的细胞间连接。
4、本领域中需要新的vi型胶原蛋白以及其制备方法。
技术实现思路
1、针对目前的需要，专利技术人提供了新的vi型胶原蛋白。本文的vi型胶原蛋白能够使
2、在第一方面，提供了胶原蛋白，其包含多个重复单元，重复单元包含以seq id no:1所示的氨基酸序列或以seq id no:1所示的氨基酸序列中进行了一个或多个氨基酸残基的突变的氨基酸序列或与seq id no:1所示的氨基酸序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的氨基酸序列；重复单元的数目是10-20、12-18或13-16。
3、在一个实施方案中，重复单元的数目是10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
4、在一个实施方案中，各重复单元直接连接或通过一个氨基酸或多个氨基酸残基的接头连接。在一个实施方案中，接头包含2、3、4、5、6、7或8个氨基酸残基。
5、在一个实施方案中，突变是取代、插入、缺失或添加。在一个实施方案中，取代为保守氨基酸取代。
6、在一个实施方案中，胶原蛋白来源于人。在一个实施方案中，胶原蛋白具有三螺旋结构。在一个实施方案中，胶原蛋白具有细胞黏附功效。在一个实施方案中，胶原蛋白是重组胶原蛋白、重组人源化胶原蛋白或重组人源化vi型胶原蛋白。
7、在一个实施方案中，胶原蛋白包含以下氨基酸序列：
8、(1)以seq id no:2和4-7中任一项所示的氨基酸序列；
9、(2)与以seq id no:2和4-7中任一项所示的氨基酸序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的氨基酸序列；或
10、(3)以seq id no:2和4-7中任一项所示的氨基酸序列中进行了一个或多个氨基酸残基的突变的氨基酸序列。
11、在一个实施方案中，突变是取代、插入、缺失或添加。在一个实施方案中，取代为保守氨基酸取代。
12、在第二方面，提供了核酸，其编码本文所述的胶原蛋白。
13、在一个实施方案中，核酸具有以seq id no:3所示的核苷酸序列。
14、在第三方面，提供了载体，其包含根据本文所述的核酸。在一个实施方案中，载体包含编码纯化标签的核苷酸、编码前导物的核苷酸和/或调节元件。
15、在一个实施方案中，纯化标签选自his标签、gst标签、mbp标签、sumo标签或nusa标签。
16、在一个实施方案中，调节元件选自启动子、终止子和/或增强子。
17、在第四方面，提供了宿主细胞，其包含本文所述的核酸或本文所述的载体。
18、在一个实施方案中，宿主细胞是真核细胞或原核细胞。在一个实施方案中，真核细胞是酵母细胞、动物细胞和/或昆虫细胞，和/或原核细胞是大肠杆菌细胞，例如大肠杆菌bl21。
19、在第五方面，提供了生产胶原蛋白的方法，其包括：
20、(1)在合适的培养条件下培养本文所述的宿主细胞；
21、(2)收获包含胶原蛋白的宿主细胞和/或培养基；和
22、(3)纯化胶原蛋白，例如包括(1)在ni亲和层析柱上粗纯胶原蛋白；(2)添加胶原工具酶切；和/或(3)离子交换柱精纯胶原蛋白。
23、在第六方面，提供了组合物，其包含本文所述的胶原蛋白、核酸、载体和/或宿主细胞。
24、在一个实施方案中，组合物是药物组合物或化妆品组合物。
25、在一个实施方案中，组合物是生物敷料、人体仿生材料、整形美容材料、类器官培养材料、心血管支架材料、涂层材料、组织注射填充材料、眼科材料、妇产科生物材料、神经修复再生材料、肝脏组织材料及血管修复再生材料、3d打印人造器官生物材料、化妆品原料、药用辅料和食品添加剂中的一种或多种。
26、在一个实施方案中，组合物包含药学和/或化妆品可接受的载体。
27、在一个实施方案中，组合物为固体、液体或凝胶组合物。
28、在一个实施方案中，组合物为口服和/或局部施用的组合物，优选涂抹组合物。
29、在一个实施方案中，组合物为试剂盒。
30、在一个实施方案中，组合物为液体配制剂，其包含本文所述的胶原蛋白和药学和/或化妆品可接受的载体。
31、在一个实施方案中，载体是缓冲剂，例如d-pbs缓冲剂或pbs缓冲剂。
32、在第七方面，提供了促进细胞黏附或贴壁的方法，所述方法包括使细胞与本文的胶原蛋白和/或组合物接触。
33、在第八方面，提供了本文所述的胶原蛋白、核酸、载体、宿主细胞和/或组合物在生物敷料、人体仿生材料、整形美容材料、类器官培养材料、心血管支架材料、涂层材料、组织注射填充材料、眼科材料、妇产科生物材料、神经修复再生材料、肝脏组织材料及血管修复再生材料或3d打印人造器官生物材料中的用途。
34、在第九方面，提供了本文所述的胶原蛋白和/或组合物在制备用于促进细胞黏附或贴壁的药物或试剂盒的用途。
35、本专利技术的优点包括：本文所述的胶原蛋白是新的人源化vi型胶原蛋白，其具有促进细胞黏附的功效并且具有三螺旋结构；本文的重组人源化胶原蛋白c6a1具有比牛ⅰ型胶原蛋白具有更高(2倍以上)的细胞黏附活性，取得了出乎意料的技术效果。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.胶原蛋白，其包含多个重复单元，重复单元包含以SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或以SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列中进行了一个或多个氨基酸残基的突变的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的氨基酸序列；重复单元的数目是10-20、12-18或13-16；各重复单元直接连接或通过一个氨基酸或多个氨基酸的接头连接；
2.根据权利要求1的胶原蛋白，其包含以下氨基酸序列：
3.核酸，其编码根据权利要求1或2所述的胶原蛋白；优选地，其中所述核酸具有以SEQID NO:3所示的核苷酸序列。
4.载体，其包含根据权利要求3所述的核酸，任选地，所述载体包含编码纯化标签的核苷酸、编码前导物的核苷酸和/或调节元件；
5.宿主细胞，其包含根据权利要求3所述的核酸或根据权利要求4所述的载体；其中优选地，宿主细胞是真核细胞或原核细胞；其中优选地，真核细胞是酵母细胞、动物细胞和/或昆虫细胞，和/或原核细
6.生产胶原蛋白的方法，其包括：
7.组合物，其包含根据权利要求1或2所述的胶原蛋白、根据权利要求3所述的核酸、根据权利要求4所述的载体和/或根据权利要求5所述的宿主细胞；
8.促进细胞黏附或贴壁的方法，所述方法包括使细胞与根据权利要求1或2所述的胶原蛋白和/或根据权利要求7的组合物接触。
9.根据权利要求1或2所述的胶原蛋白、根据权利要求3所述的核酸、根据权利要求4所述的载体、根据权利要求5所述的宿主细胞和/或根据权利要求7的组合物在生物敷料、人体仿生材料、涂层材料、类器官培养材料或3D打印人造器官生物材料中的用途，或者在整形美容材料、类器官培养材料、心血管支架材料、组织注射填充材料、眼科材料、妇产科生物材料、神经修复再生材料、肝脏组织材料或血管修复再生材料中的用途。
10.根据权利要求1或2所述的胶原蛋白和/或根据权利要求7的组合物在制备用于促进细胞黏附或贴壁的药物或试剂盒的用途。
...【技术特征摘要】
1.胶原蛋白，其包含多个重复单元，重复单元包含以seq id no:1所示的氨基酸序列或以seq id no:1所示的氨基酸序列中进行了一个或多个氨基酸残基的突变的氨基酸序列或与seq id no:1所示的氨基酸序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的氨基酸序列；重复单元的数目是10-20、12-18或13-16；各重复单元直接连接或通过一个氨基酸或多个氨基酸的接头连接；
2.根据权利要求1的胶原蛋白，其包含以下氨基酸序列：
3.核酸，其编码根据权利要求1或2所述的胶原蛋白；优选地，其中所述核酸具有以seqid no:3所示的核苷酸序列。
4.载体，其包含根据权利要求3所述的核酸，任选地，所述载体包含编码纯化标签的核苷酸、编码前导物的核苷酸和/或调节元件；
5.宿主细胞，其包含根据权利要求3所述的核酸或根据权利要求4所述的载体；其中优选地，宿主细胞是真核细胞或原核细胞；其中优选地，真核细胞...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨霞，花晨，兰小宾，于玉凤，王建，何振瑞，
申请(专利权)人：山西锦波生物医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。