【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种用于脑胶质瘤术后切除原位给药的外泌体-温敏凝胶递释体系及其制备方法和应用。
技术介绍
1、脑胶质母细胞瘤（glioblastoma，gbm）恶性程度高，中位生存期短，5年生存率极低。目前gbm临床治疗的标准方案是手术切除并辅以术后的放化疗。然而，由于gbm呈浸润性生长，术中难以实现对癌细胞100%的切除，同时由于血脑屏障（blood brain barrier，bbb）阻碍了药物向脑内的扩散，导致gbm通常会在短期内迅速复发，复发肿瘤往往恶性程度更高且对放化疗抵抗。胶质瘤起始细胞（glioma initiating cells，gic）是胶质瘤中一类具有自我更新能力和多向分化能力等干性特征的特殊细胞，在恶性胶质瘤复发和放化疗抵抗中起关键作用，被认为是胶质瘤复发的关键“种子”。由免疫细胞及其分泌的各类因子、星形胶质细胞、细胞外基质及血管等组成的gbm复杂的肿瘤微环境则是“种子”赖以生长的“土壤”。虽然手术治疗切除了胶质瘤的主要瘤体，已在很大程度上去除了肿瘤复发的“土壤”，但切除部位的免疫抑制性微环境并未因手术而得到明显改善。gbm的复发就是上述多种因素综合作用的结果，如果想在术后原位治疗时达到最佳抑制复发的效果，就必须有针对性的设计联合调控各关键因素的综合性治疗策略。
2、目前研究发现，术后原位给药治疗可与手术无缝衔接，使药物绕过bbb直接作用于肿瘤切除部位，从而高效低毒地清除残余的胶质瘤起始细胞和胶质瘤细胞。但无论是已获批的格立得植入剂还是现有临床前研究中的术后原位给药系统，在
3、水凝胶具有生物相容性好、安全性好，可作为切除原发肿瘤后局部治疗gbm的有效药物载体。特别的，温敏凝胶在低温下为溶液，十分便于向术后切除腔内的注射操作，在切除腔内可粘附并贴合于切缘组织，随后在生理温度下迅速胶凝并形成凝胶结构，改善缓释效果，实现术后切除腔内的药物长效缓释。
4、目前，利用多种手段来抑制gbm复发，包括手术切除、化疗、基因治疗等。尤其是针对胶质瘤起始细胞构建的共递送体系，瘤内给药可以杀伤胶质瘤起始细胞和胶质瘤细胞，从而抑制gbm的生长。 然而，gbm复发的诱因有很多，包括胶质瘤起始细胞、免疫抑制微环境、耐药等，仅仅针对一种诱因不足以完全抑制gbm的复发，所以，构建同步靶向追踪与杀伤残余胶质瘤细胞及胶质瘤起始细胞且重塑肿瘤免疫微环境的递释体系对于克服上述不足具有重要的意义。
技术实现思路
1、针对现有技术存在的问题，针对造成gbm术后复发与耐药的多种复杂诱因，本专利技术构建了一种用于脑胶质瘤术后切除原位给药的外泌体-温敏凝胶递释体系及其制备方法和应用，可同步靶向追踪与杀伤残余胶质瘤起始细胞及胶质瘤细胞且重塑肿瘤免疫微环境，进而抑制脑胶质瘤复发，延长生存期。
2、本专利技术是这样实现的，一种用于脑胶质瘤术后切除原位给药的外泌体-温敏凝胶递释体系，将载药外泌体与免疫调节剂共载于温敏水凝胶中，所述载药外泌体包载米托蒽醌（mit）和sirna，所述递释体系中，mit的终浓度为3~5mg/kg，sirna的终浓度为0.3~1.5mg/kg，免疫调节剂的终浓度为25~100μg/kg；所述温敏水凝胶是由壳聚糖、β-甘油磷酸钠和明胶共同构成，按质量百分比，壳聚糖1%~5%，β-甘油磷酸钠5%~15%，明胶0.01%~2%，其余为水。
3、所述载药外泌体采用cn202310738539.6的方法制备。
4、所述外泌体为巨噬细胞的外泌体、hek293t细胞的外泌体、骨髓间充质干细胞的外泌、脐带间充质干细胞的外泌体、脂肪间充质干细胞的外泌体中至少一种。
5、所述免疫调节剂为il-12、tnf-α、ifn-γ中的一种。
6、上述用于脑胶质瘤术后切除原位给药的外泌体-温敏凝胶递释体系的制备方法，包括以下步骤：
7、（1）载药外泌体的制备：采用cn202310738539.6的方法制备；
8、（2）温敏水凝胶的制备：
9、称取一定量的壳聚糖，配制浓度为0.05~0.25m的壳聚糖溶液，ph为2~5；
10、称取一定量的β-甘油磷酸钠，配制浓度为1.5~5m的β-甘油磷酸钠溶液，ph为8~10；
11、称取一定量的明胶，配制浓度为0.01~0.5mm的明胶溶液，ph为1~4；
12、将壳聚糖溶液和明胶溶液混合均匀后，在搅拌状态下缓慢加入β-甘油磷酸钠溶液，调节ph为7.2-7.4，得到温敏水凝胶；
13、（3）外泌体-温敏凝胶递释体系的制备：在4-15℃，将免疫调节剂与载药外泌体加入温敏水凝胶中混合，获得液态的外泌体-温敏凝胶递释体系。
14、上述制备方法得到的用于脑胶质瘤术后切除原位给药的外泌体-温敏凝胶递释体系在制备抗脑胶质瘤药物中的应用。
15、对gbm进行手术切除，手术结束时直接在切除腔内注射。
16、本专利技术具有的优点和技术效果： 本专利技术可同步靶向追踪与杀伤残余胶质瘤起始细胞及胶质瘤细胞且重塑肿瘤免疫微环境，可通过术后原位给予绕过bbb并与手术治疗无缝衔接，有机整合化疗、基因治疗及免疫治疗手段以同时消除gbm复发的“种子”和“土壤”，通过多机制的协同增效作用有效遏制gbm的术后复发，降低毒副作用。
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1.一种用于脑胶质瘤术后切除原位给药的外泌体-温敏凝胶递释体系，其特征在于，将载药外泌体与免疫调节剂共载于温敏水凝胶中，所述载药外泌体包载米托蒽醌和siRNA，所述递释体系中，米托蒽醌的终浓度为3~5mg/kg，siRNA的终浓度为0.3~1.5mg/kg，免疫调节剂的终浓度为25~100μg/kg；所述温敏水凝胶是由壳聚糖、β-甘油磷酸钠和明胶共同构成，按质量百分比，壳聚糖1%~5%，β-甘油磷酸钠5%~15%，明胶0.01%~2%，其余为水。
2.根据权利要求1所述用于脑胶质瘤术后切除原位给药的外泌体-温敏凝胶递释体系，其特征在于，所述外泌体为巨噬细胞的外泌体、HEK293T细胞的外泌体、骨髓间充质干细胞的外泌、脐带间充质干细胞的外泌体、脂肪间充质干细胞的外泌体中至少一种。
3.根据权利要求1所述用于脑胶质瘤术后切除原位给药的外泌体-温敏凝胶递释体系，其特征在于，所述免疫调节剂为IL-12、TNF-α、IFN-γ中的一种。
4.如权利要求1-3任一项所述用于脑胶质瘤术后切除原位给药的外泌体-温敏凝胶递释体系的制备方法，其特征在于，包括以下步
5.如权利要求4所述制备方法得到的用于脑胶质瘤术后切除原位给药的外泌体-温敏凝胶递释体系在制备抗脑胶质瘤药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种用于脑胶质瘤术后切除原位给药的外泌体-温敏凝胶递释体系，其特征在于，将载药外泌体与免疫调节剂共载于温敏水凝胶中，所述载药外泌体包载米托蒽醌和sirna，所述递释体系中，米托蒽醌的终浓度为3~5mg/kg，sirna的终浓度为0.3~1.5mg/kg，免疫调节剂的终浓度为25~100μg/kg；所述温敏水凝胶是由壳聚糖、β-甘油磷酸钠和明胶共同构成，按质量百分比，壳聚糖1%~5%，β-甘油磷酸钠5%~15%，明胶0.01%~2%，其余为水。
2.根据权利要求1所述用于脑胶质瘤术后切除原位给药的外泌体-温敏凝胶递释体系，其特征在于，所述外泌体为...
【专利技术属性】
技术研发人员：贺慧宁，朱梦玺，杨孟亭，陈佳璇，于飞，
申请(专利权)人：天津医科大学，
类型：发明
国别省市：
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