【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，具体涉及利用马克斯克鲁维酵母制备猪流行性腹泻病毒表位纳米颗粒的方法及应用。
技术介绍
1、猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea，ped)是一种由猪流行性腹泻病毒(porcin e epidemic diarrhea virus，pedv)引起的感染性肠道疾病。pedv对仔猪的影响要大于成年猪，一般表现出呕吐、水样腹泻、脱水、厌食、体重下降等症状。pedv对新生仔猪有极高致死率，对全球养猪业构成了巨大的威胁。马克斯克鲁维酵母(kluyveromycesmarxia nus，km)是一种非常规酵母，与酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)同属于saccharom ycetaceae科，是美国食品药品监督管理局(food and drug administration，fda)的gra s认证(generally recognized as safe，食品添加剂安全评价)和欧盟食品安全局(europea n food safety authority，简称efsa)的qps认证(qualified presumptionof safety，安全资格认证)的安全酵母，也被中国卫计委批准为新食品原料。申请人于2013年在湖北黄陂自然养殖土猪场成功分离出一株km-c2株(cn103952324a)，并于2014年3月3日送往中国湖北省武汉市武汉大学中国典型培养物保藏中心进行保藏(cctcc no：m2014059)。该菌株对黄曲霉毒素b1、玉米赤霉烯酮、赭曲毒素a的生
2、目前该菌株尚无可用于食用安全级别酵母表达系统的营养缺陷筛选标记及可以对该菌株进行遗传改造的敲除载体。也没有适用于该菌株的表达载体。鉴于此，本专利技术为该菌株建立适合的遗传操作体系，实现在酵母基因组上的遗传操作。为该菌株匹配不同的启动子-终止子组合及复制子组合，提供新型候选表达元件。另外，将本专利技术应用至pedv纳米颗粒基因工程疫苗，为进一步开发pedv疫苗奠定基础，也为其他动物病原基因工程疫苗的制备提供借鉴。
3、针对上述问题，申请人提供了适用于马克斯克鲁维酵母的双复制子表达载体并进行了专利申请，申请号为2024104862538(本申请提交前未公开)，在该申请中，申请人全新构建了适用于马克斯克鲁维酵母的双复制子表达载体，该表达载体具有稳定性好，外源蛋白表达量大，转化率高的优点。在本专利技术中，申请人进一步利用该复制子，制备了猪流行性腹泻病毒纳米颗粒，为猪流行性腹泻亚单位疫苗做准备。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供了一种利用马克斯克鲁维酵母制备猪流行性腹泻病毒表位纳米颗粒的方法，方法简单，易行，适用于商业化生产。
2、本专利技术的另一个目的在于提供了上述方法制备的纳米颗粒在制备猪流行性腹泻亚单位疫苗中的应用。
3、为了达到上述目的，本专利技术采取以下技术措施：
4、一种利用马克斯克鲁维酵母制备猪流行性腹泻病毒表位纳米颗粒的方法，包括下述步骤：
5、将seq id no.3所示多核苷酸与ecorⅰ、hindⅲ线性化后的pgkd32载体同源重组后，转化至营养缺陷型马克斯克鲁维酵母中；
6、所述的pgkd32载体的多核苷酸序列为seq id no.2所示。
7、以上所述的方法，优选的，所述的营养缺陷型马克斯克鲁维酵母，是将靶向ura3敲除载体km-ko-ura3(seq id no.1所示)导入马克斯克鲁维酵母中获得；
8、以上所述的方法，优选的，所述的马克斯克鲁维酵母的保藏编号为cctcc no：m2014059。
9、本专利技术的保护范围还包括：
10、上述方法制备的纳米颗粒在制备猪流行性腹泻亚单位口服疫苗中的应用。
11、与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：
12、申请人全新构建了适用于马克斯克鲁维酵母的双复制子表达载体，该表达载体具有稳定性好，外源蛋白表达量大，转化率高的优点。在本专利技术中，申请人进一步利用该复制子，制备了猪流行性腹泻病毒纳米颗粒，为猪流行性腹泻亚单位疫苗做准备。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种利用马克斯克鲁维酵母制备猪流行性腹泻病毒表位纳米颗粒的方法，包括下述步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，所述的营养缺陷型马克斯克鲁维酵母，是将靶向URA3的敲除载体KM-KO-URA3导入马克斯克鲁维酵母中获得；
3. 根据权利要求2所述的方法，所述的马克斯克鲁维酵母的保藏编号为CCTCC NO：M2014059。
4.权利要求1所述方法制备的纳米颗粒在制备猪流行性腹泻亚单位口服疫苗中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种利用马克斯克鲁维酵母制备猪流行性腹泻病毒表位纳米颗粒的方法，包括下述步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，所述的营养缺陷型马克斯克鲁维酵母，是将靶向ura3的敲除载体km-ko-ura3导入马克斯克鲁维...
【专利技术属性】
技术研发人员：金梅林，高朔，康超，陈曦，林晓幸，康心然，左文峰，孙洁，杨靖宇，佘紫微，杭尧，孙小美，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：
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