【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及小分子as2863619在改善牙周膜干细胞功能中的应用。
技术介绍
1、牙周组织，特别是骨组织的退化，最终会损害牙齿的支持。牙周炎是导致牙周破坏的首要因素。基于干细胞的组织工程技术的出现为治疗牙周骨缺损提供了一种新颖而有前途的方法。
2、为了实现更高效和精确的组织再生，种子细胞的类型、功能和活性起着至关重要的作用。牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,pdlscs)是位于牙周韧带的一类间充质干细胞(mesenchymal stem cells,mscs)，具有包括成骨和成脂谱系分化等多谱系分化能力和极强的免疫调节能力。另外，牙周膜干细胞的来源丰富，伦理争议较小，可特异性地分化出牙周相关组织，因此，可作为牙周组织再生中最理想的种子细胞。然而，越来越多的证据表明，牙周膜干细胞在体外扩增培养中或炎症环境刺激下逐渐失去其功能，从而限制了其在组织工程中的应用。
3、因此，提高牙周膜干细胞在体外扩增过程中的功能特性或改善牙周膜干细胞在炎症环境下的功能损伤，进一步推进其在牙周组织降解中的应用成为当务之急。
技术实现思路
1、为了解决上述技术问题，本专利技术提供了小分子as2863619在改善牙周膜干细胞功能中的应用。本专利技术通过在体外扩增牙周膜干细胞的培养基中添加小分子as2863619，发现该培养基可以明显改善牙周膜干细胞的综合功能。
2、为了实现上述之专利技术目的，本专利技术提供
3、第一方面，本专利技术提供了小分子as2863619在改善牙周膜干细胞功能中的应用，其特征在于，所述改善牙周膜干细胞功能具体为，
4、a)提高牙周膜干细胞的干性和/或免疫调节能力；和/或
5、b)促进牙周膜干细胞的成骨分化；和/或
6、c)抑制牙周膜干细胞的成脂分化。
7、在本专利技术中，小分子as2863619是一种有效的、口服的细胞周期蛋白依赖性激酶8(cdk8)和cdk19抑制剂，结构式如图1所示，名称：4-(1-(2-甲基-1h-苯并[d]咪唑-6-基)-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-基)-1,2,5-恶二唑-3-胺二盐酸盐，cas编号：2241300-51-4，分子式：c16h14cl2n8o。as2863619可以将抗原特异性效应子/记忆t细胞转换为foxp3+调节性t(treg)细胞，以研究各种免疫疾病。as2863619是一种有效的口服的细胞周期蛋白依赖性激酶8(cdk8)和cdk19抑制剂，ic50分别为0.61nm和4.28nm。as2863619抑制cdk8/19可增强stat5的激活，从而激活foxp3基因。
8、第二方面，本专利技术还提供了一种用于提高牙周膜干细胞的干性和/或免疫调节能力、和/或促进牙周膜干细胞成骨分化、和/或抑制牙周膜干细胞成脂分化的培养基，所述培养基包含as2863619。
9、在一些实施方案中，所述as2863619的用量为(250-500)nm；在具体实施方案中，所述as2863619的用量为250nm或500nm。
10、进一步地，所述培养基中包含amem基础培养基、8％-10％胎牛血清和0.5％-1.5％双抗；优选地，所述胎牛血清为10％，所述双抗为青霉素-链霉素混合液(penicillin-streptomycin solution,p/s)，用量为1％。
11、采用上述技术方案，在基础培养基中添加as2863619、胎牛血清、双抗，对牙周膜干细胞进行增殖诱导，获得的牙周膜干细胞具有很好的干性和免疫调节能力。
12、进一步地，所述培养中还包含β-甘油磷酸酯、地塞米松和l-抗坏血酸。
13、进一步地，所述β-甘油磷酸酯的用量为(8-10)mm，所述地塞米松的用量为(80-120)nm，所述l-抗坏血酸的用量为(40-60)μg/ml。优选地，所述地塞米松的用量为100nm，所述l-抗坏血酸的用量为50μg/ml。
14、采用上述技术方案，在基础培养基中添加as2863619、胎牛血清、双抗、β-甘油磷酸酯、地塞米松和l-抗坏血酸，对牙周膜干细胞进行成骨分化诱导，相比对照而言，as2863619能够明显促进pdlsc成骨分化。
15、进一步地，所述培养中还包含地塞米松、吲哚美辛、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤和l-抗坏血酸。
16、进一步地，所述地塞米松的用量为(0.5-1.5)μm，所述吲哚美辛的用量为(80-120)μm，所述3-异丁基-1-甲基黄嘌呤的用量为(400-600)μm，所述l-抗坏血酸的用量为(40-60)μg/ml。优选地，所述地塞米松的用量为1μm，所述吲哚美辛的用量为100μm，所述3-异丁基-1-甲基黄嘌呤的用量为500μm，所述l-抗坏血酸的用量为50μg/ml。
17、采用上述技术方案，在基础培养基中添加as2863619、胎牛血清、双抗、地塞米松、吲哚美辛、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤和l-抗坏血酸，对牙周膜干细胞进行成脂分化诱导，相比对照而言，处理21天后脂滴的形成被显著抑制，as2863619能够明显抑制牙周膜干细胞的脂肪生成。
18、第三方面，本专利技术还提供了一种提高牙周膜干细胞的干性和/或免疫调节能力、和/或促进牙周膜干细胞成骨分化、和/或抑制牙周膜干细胞成脂分化的方法，所述方法包括采用本专利技术第二方面所述的培养体系对牙周膜干细胞进行培养。
19、第四方面，本专利技术还提供了采用本专利技术第三方面的方法培养获得的牙周膜干细胞。
20、第五方面，本专利技术还提供了基于本专利技术第二方面所述的培养基、本专利技术第三方面所述的方法和第四方面得到的牙周膜干细胞在预防、治疗和/或改善牙周膜干细胞相关疾病或障碍中的应用。
21、进一步地，所述牙周膜干细胞相关疾病或障碍是指需要进行牙周膜干细胞输注的相关疾病或障碍，包括但不限于：牙周病、牙齿缺失、牙槽骨缺损、颌面部骨缺损和自身免疫性疾病等。
22、在一些实施方案中，通过一种或多种选自全身、局部、静脉内、皮下、关节内、肌内、鞘内和腹膜内的途径向所述受试者施用所述红细胞。在一些实施方案中，所述受试者包括一种或多种动物，包括例如牛、马、绵羊、灵长类动物、禽类和啮齿类动物物种。所述受试者可以是其血液中包含红细胞的动物(例如，哺乳动物、鸟、鱼、爬行动物或两栖动物)。在一些实施方案中，所述受试者可以是哺乳动物，例如人或非人哺乳动物。在另一些实施方案中，所述受试者可以是小鼠、大鼠、仓鼠、白鼬、沙鼠、兔、猴子、黑猩猩、马、矮种马、驴、绵羊、猪、鸡、山羊、猫或狗。在优选的实施方案中，所述受试者为人。
23、本专利技术相对于现有技术而言，首次发现小分子as2863619能够提高牙周膜干细胞的干性和/或免疫调节能力，促进牙周膜干细胞成骨分化，以及抑制牙周膜干细胞的成脂分化。将小分子as2863619添加至培养基中，可以提高本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.小分子AS2863619在改善牙周膜干细胞功能中的应用，其特征在于，所述改善牙周膜干细胞功能具体为，
2.一种用于提高牙周膜干细胞的干性和/或免疫调节能力、和/或促进牙周膜干细胞成骨分化、和/或抑制牙周膜干细胞成脂分化的培养基，其特征在于，所述培养基包含AS2863619。
3.根据权利要求2所述的培养基，其特征在于，所述AS2863619的用量为(250-500)nM。
4.根据权利要求2所述的培养基，其特征在于，所述培养基中包含aMEM基础培养基、8％-10％胎牛血清和0.5％-1.5％双抗。
5.根据权利要求4所述的培养基，其特征在于，所述培养中还包含β-甘油磷酸酯、地塞米松和L-抗坏血酸。
6.根据权利要求5所述的培养基，其特征在于，所述β-甘油磷酸酯的用量为(8-10)mM，所述地塞米松的用量为(80-120)nM，所述L-抗坏血酸的用量为(40-60)μg/mL。
7.根据权利要求4所述的培养基，其特征在于，所述培养中还包含地塞米松、吲哚美辛、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤和L-抗坏血酸。
...【技术特征摘要】
1.小分子as2863619在改善牙周膜干细胞功能中的应用，其特征在于，所述改善牙周膜干细胞功能具体为，
2.一种用于提高牙周膜干细胞的干性和/或免疫调节能力、和/或促进牙周膜干细胞成骨分化、和/或抑制牙周膜干细胞成脂分化的培养基，其特征在于，所述培养基包含as2863619。
3.根据权利要求2所述的培养基，其特征在于，所述as2863619的用量为(250-500)nm。
4.根据权利要求2所述的培养基，其特征在于，所述培养基中包含amem基础培养基、8％-10％胎牛血清和0.5％-1.5％双抗。
5.根据权利要求4所述的培养基，其特征在于，所述培养中还包含β-甘油磷酸酯、地塞米松和l-抗坏血酸。
6.根据权利要求5所述的培养基，其特征在于，所述β-甘油磷酸...
【专利技术属性】
技术研发人员：胡田勇，贺海鹏，刘志强，程保辉，黄佳敏，
申请(专利权)人：深圳市龙岗区耳鼻咽喉医院深圳市耳鼻咽喉研究所，深圳市龙岗区口腔医学研究所，
类型：发明
国别省市：
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