【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医学检验，具体来说，涉及一种采用超高效液相色谱串联质谱检测人血中维奈克拉浓度的方法。
技术介绍
1、维奈克拉是一种口服b淋巴细胞瘤-2选择性抑制剂，可用于治疗慢性淋巴细胞白血病，亦可联合其他抗癌药治疗初诊或不适合强化治疗的急性髓系白血病患者。
2、在治疗初期，需使用爬坡剂量，避免发生肿瘤溶解综合征，但维奈克拉水溶性差，相比空腹，低脂餐和高脂餐条件下服药，维奈克拉的体内暴露量分别增加约3.4倍和5.3倍，同时，血液疾病患者常患多种并发症，需要联用许多其他药物，会影响维奈克拉体内暴露量，从而影响使用爬坡剂量治疗的效果以及增加用药风险，因此，需要快速精准定量检测人血中维奈克拉浓度。然而，现阶段人体中维奈克拉血药浓度检测方法具有以下劣势：线性范围较窄，检测时间较长，未克服维奈克拉难溶解的劣势，无法满足临床上维奈克拉的治疗药物监测需求。
技术实现思路
1、本专利技术的技术任务是针对以上不足，提供一种采用超高效液相色谱串联质谱检测人血中维奈克拉浓度的方法，通过该方法，扩展线性浓度范围，提高检测速度，采用混合溶剂溶解维奈克拉，从而解决上述问题。
2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
3、一种采用超高效液相色谱串联质谱检测人血中维奈克拉浓度的方法，包括：
4、s100、工作液准备：分别将维奈克拉-d8对照品和维奈克拉对照品溶解于混合溶剂中，得到内标储备液和标准储备液；使用所述混合溶剂对内标储备液进行稀释，得到内标工作液；使用
5、s200、样本准备：制备标准曲线血样和临床血样，并通过有机溶剂沉淀蛋白法对标准曲线血样和临床血样进行预处理，得到标准曲线样本和临床实际样本；
6、s300、超高效液相色谱串联质谱检测：使用超高效液相色谱与质谱联用的方法，分别对所述得到标准曲线样本和临床实际样本进行检测；
7、s400、标准曲线制备及维奈克拉浓度计算：使用s300中得到的所述标准曲线样本的检测结果制作标准曲线，建立回归方程；将s300中得到的所述临床实际样本的检测结果代入回归方程，计算得到人血中维奈克拉浓度。
8、进一步地，所述方法的检测范围为20ng/ml-20000ng/ml。
9、进一步地，s100中，所述混合溶剂为碳酸氢铵缓冲液、乙腈、二甲基亚砜的混合溶液。
10、进一步地，所述内标工作液浓度为5000ng/ml；所述标准储备液浓度为1000000ng/ml。
11、进一步地，所述系列浓度的标准工作液分别为：50000ng/ml、20000ng/ml、10000ng/ml、5000ng/ml、2000ng/ml、1000ng/ml、500ng/ml。
12、进一步地，s200中，所述预处理的方法是将标准曲线血样和临床血样与内标工作液、乙腈混合，剧烈振荡涡旋、离心，将离心后上清液，加入超纯水中，剧烈震荡涡旋、离心，取上清液。
13、进一步地，s300中，所述超高效液相色谱检测的色谱柱为beh-c18，柱温为40℃，进样器温度为15℃，进样量为2μl，流动相a为含0.1％甲酸的乙腈溶液，流动相b为0.1％甲酸的水溶液，流速为0.4ml/min；梯度洗脱条件为：0.0min，流动相b：80％；1.0min，流动相b：60％；3.0min，流动相b：0％；3.3min，流动相b：0％；3.31min，流动相b：80％；3.5min，流动相b：80％。
14、进一步地，s300中，所述质谱采用正离子电喷雾离子源，毛细管电压为1.0kv，脱溶剂气温度450℃，脱溶剂气流量为800l/hr，锥孔气流速为60l/hr，采用多反应监测模式，锥孔电压为65v，碰撞能量为45v，定量分析离子对为维奈克拉m/z 868.52→321.18，维奈克拉-d8 m/z 876.32→329.2。
15、进一步地，所述方法还包括质控工作液的制备，并且使用所述质控工作液进行方法学验证，其中，所述质控工作液浓度分别为400000ng/ml、4000ng/ml、400ng/ml。
16、进一步地，所述方法学验证包括专属性、线性验证与定量下限、准确度与精密度、残留效应、稀释效应、提取回收率和基质效应、稳定性。
17、与现有技术相比，本专利技术的优点和积极效果在于：
18、1、本专利技术采用的混合溶剂溶解维奈克拉的方法，克服了其本身难溶解的劣势，其在-80℃冰箱保存呈固态，恢复至室温呈现透明液态，且无沉淀析出；
19、2、本专利技术设计了7个浓度水平的校准和3个浓度水平的质控，结合稀释效应结果，检测范围为20ng/ml-20000ng/ml，合理覆盖了临床样本中维奈克拉的实际浓度范围；
20、3、本专利技术样本处理操作简便，仅需要一步简单蛋白沉淀及一步稀释即可进行分析，上样后分析时间仅为3.5min，因此本专利技术适合大批量临床样品分析；
21、4、本专利技术检测维奈克拉血药浓度的定量下限为20ng/ml，能够检测出更低维奈克拉血药浓度。
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1.一种采用超高效液相色谱串联质谱检测人血中维奈克拉浓度的方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的一种采用超高效液相色谱串联质谱检测人血中维奈克拉浓度的方法，其特征在于，所述方法的检测范围为20ng/mL-20000ng/mL。
3.根据权利要求1所述的一种采用超高效液相色谱串联质谱检测人血中维奈克拉浓度的方法，其特征在于，S100中，所述混合溶剂为碳酸氢铵缓冲液、乙腈、二甲基亚砜的混合溶液。
4.根据权利要求1所述的一种采用超高效液相色谱串联质谱检测人血中维奈克拉浓度的方法，其特征在于，所述内标工作液浓度为5000ng/mL；所述标准储备液浓度为1000000ng/mL。
5.根据权利要求1所述的一种采用超高效液相色谱串联质谱检测人血中维奈克拉浓度的方法，其特征在于，所述系列浓度的标准工作液分别为：50000ng/mL、20000ng/mL、10000ng/mL、5000ng/mL、2000ng/mL、1000ng/mL、500ng/mL。
6.根据权利要求1所述的一种采用超高效液相色谱串联质谱检测人血中维奈
7.根据权利要求1所述的一种采用超高效液相色谱串联质谱检测人血中维奈克拉浓度的方法，其特征在于，S300中，所述超高效液相色谱检测的色谱柱为BEH-C18，柱温为40℃，进样器温度为15℃，进样量为2μL，流动相A为含0.1％甲酸的乙腈溶液，流动相B为0.1％甲酸的水溶液，流速为0.4mL/min；梯度洗脱条件为：0.0min，流动相B：80％；1.0min，流动相B：60％；3.0min，流动相B：0％；3.3min，流动相B：0％；3.31min，流动相B：80％；3.5min，流动相B：80％。
8.根据权利要求1所述的一种采用超高效液相色谱串联质谱检测人血中维奈克拉浓度的方法，其特征在于，S300中，所述质谱采用正离子电喷雾离子源，毛细管电压为1.0kV，脱溶剂气温度450℃，脱溶剂气流量为800L/Hr，锥孔气流速为60L/Hr，采用多反应监测模式，锥孔电压为65V，碰撞能量为45V，定量分析离子对为维奈克拉m/z 868.52→321.18，维奈克拉-D8 m/z 876.32→329.2。
9.根据权利要求1-8任一项所述的一种采用超高效液相色谱串联质谱检测人血中维奈克拉浓度的方法，其特征在于，所述方法还包括质控工作液的制备，并且使用所述质控工作液进行方法学验证，其中，所述质控工作液浓度分别为400000ng/mL、4000ng/mL、400ng/mL。
10.根据权利要求9所述的一种采用超高效液相色谱串联质谱检测人血中维奈克拉浓度的方法，其特征在于，所述方法学验证包括专属性、线性验证与定量下限、准确度与精密度、残留效应、稀释效应、提取回收率和基质效应、稳定性。
...【技术特征摘要】
1.一种采用超高效液相色谱串联质谱检测人血中维奈克拉浓度的方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的一种采用超高效液相色谱串联质谱检测人血中维奈克拉浓度的方法，其特征在于，所述方法的检测范围为20ng/ml-20000ng/ml。
3.根据权利要求1所述的一种采用超高效液相色谱串联质谱检测人血中维奈克拉浓度的方法，其特征在于，s100中，所述混合溶剂为碳酸氢铵缓冲液、乙腈、二甲基亚砜的混合溶液。
4.根据权利要求1所述的一种采用超高效液相色谱串联质谱检测人血中维奈克拉浓度的方法，其特征在于，所述内标工作液浓度为5000ng/ml；所述标准储备液浓度为1000000ng/ml。
5.根据权利要求1所述的一种采用超高效液相色谱串联质谱检测人血中维奈克拉浓度的方法，其特征在于，所述系列浓度的标准工作液分别为：50000ng/ml、20000ng/ml、10000ng/ml、5000ng/ml、2000ng/ml、1000ng/ml、500ng/ml。
6.根据权利要求1所述的一种采用超高效液相色谱串联质谱检测人血中维奈克拉浓度的方法，其特征在于，s200中，所述预处理的方法是将标准曲线血样和临床血样与内标工作液、乙腈混合，剧烈震荡涡旋、离心，将离心后上清液，加入超纯水中，剧烈震荡涡旋、离心，取上清液。
7.根据权利要求1所述的一种采用超高效液相色谱串联质谱检测人血中维奈克拉浓度的方法，其特征在于，s300中，所述超高效液...
【专利技术属性】
技术研发人员：袁恒杰，毕重文，顾芃，杨妙，李正翔，何庆，
申请(专利权)人：天津医科大学总医院，
类型：发明
国别省市：
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