System.ArgumentOutOfRangeException: 索引和长度必须引用该字符串内的位置。 参数名: length 在 System.String.Substring(Int32 startIndex, Int32 length) 在 zhuanliShow.Bind() tracrRNA单元及基因组编辑方法技术_技高网

tracrRNA单元及基因组编辑方法技术

技术编号:44207100 阅读:0 留言:0更新日期:2025-02-06 18:40
本发明专利技术的课题在于,提供新的tracrRNA单元及使用其的基因组编辑方法。通过下述tracrRNA单元来解决课题,所述tracrRNA单元为用于CRISPR‑Cas9基因组编辑系统的、由第1单链RNA和第2单链RNA构成的tracrRNA单元,第1单链RNA和第2单链RNA不连续,第1单链RNA至少具有第1部分和第2部分,第1部分和第2部分不重叠,第1部分具有与crRNA的一部分互补的序列,第2部分具有与第2单链RNA互补的序列。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

本说明书中公开了tracrrna单元及基因组编辑方法。


技术介绍

1、规律成簇的间隔短回文重复/crispr相关蛋白9(clustered regularlyinterspaced short palindromic repeats/crispr associated protein 9,crispr/cas9)系统是在细菌和古细菌中发现的针对病毒和质粒的免疫系统(非专利文献1)。该系统目前被用作在体外对各种生物的基因组dna的目标区域进行核苷酸序列的删除、置换或插入的方法(专利文献1和2)。

2、在细菌和古细菌中,具有与基因组dna的目标区域的核苷酸序列互补的核苷酸序列的crispr rna(crrna)和具有与crrna互补的核苷酸序列的tracrrna是不同的rna链,它们通过互补的核苷酸序列杂交,形成crrna:tracrrna双链并引导cas9。另一方面,通常体外的情况下,如非专利文献1、专利文献1和专利文献2所述,使用crrna和tracrrna夹着接头环序列以单条rna链形式结合而成的单向导rna(sgrna)代替crrna:tracrrna双链。

3、现有技术文献

4、专利文献

5、专利文献1:国际公开第2013/176772号公报

6、专利文献2:国际公开第2014/093661号公报

7、非专利文献

8、非专利文献1:m jinek,et al.:science,28jun 2012,vol 337,issue 6096,pp.816-821

9、非专利文献2:h nishimasu,et al.:cell,27feb 2014,vol 156,pp.935-949


技术实现思路

1、专利技术要解决的问题

2、如图1的(a)所示,tracrrna在其rna链内形成3个发夹环。3个发夹环从靠近与crrna进行杂交的核苷酸序列处起称为第1茎环、第2茎环、第3茎环。关于tracrrna,如此前非专利文献2所记载那样,已知即使第1茎环和第2茎环之间的接头部分缺损也能够作为tracrrna起作用,但是对此外的部分加以改良时是否能够维持作为tracrrna的功能这一点是完全不明的。

3、本专利技术的课题在于,提供新的tracrrna单元及使用其的基因组编辑方法。

4、用于解决问题的方案

5、项1.

6、一种tracrrna单元,其为用于crispr-cas9基因组编辑系统的、由第1单链rna和第2单链rna构成的tracrrna单元,

7、第1单链rna和第2单链rna不连续,

8、第1单链rna至少具有第1部分和第2部分,

9、第1部分和第2部分不重叠,第1部分具有与crrna的一部分互补的序列,第2部分具有与第2单链rna互补的序列。

10、项2.

11、一种tracrrna单元,其为用于crispr-cas9基因组编辑系统的、由第1单链rna和第2单链rna和第3单链rna构成的tracrrna单元,

12、第1单链rna和第2单链rna和第3单链rna不连续,

13、第1单链rna至少具有第1部分和第2部分,

14、第1部分和第2部分不重叠,第1部分具有与crrna的一部分互补的序列,第2部分具有与第2单链rna互补的序列,

15、第2单链rna至少具有第1部分,

16、第2单链rna的第1部分具有与第3单链rna互补的序列。

17、项3.

18、根据项1或2所述的tracrrna单元,其中,crrna和第1单链rna按照该顺序而连接。

19、项4.

20、根据项2所述的tracrrna单元,其中,crrna和第1单链rna和第2单链rna按照该顺序而连接。

21、项5.

22、根据项1所述的tracrrna单元,其中,第1单链rna和第2单链rna中的至少一者具有39个核苷酸以下的长度。

23、项6.

24、根据项2所述的tracrrna单元,其中,第1单链rna、第2单链rna及第3单链rna中的至少1者具有39个核苷酸以下的长度。

25、项7.

26、根据项2所述的tracrrna单元,其中,第1单链rna和第2单链rna不连续,第2单链rna和第3单链rna连续。

27、项8.

28、一种基因组编辑方法,其使用:

29、项1~7中任一项所述的tracrrna单元、

30、crrna、和

31、cas9。

32、专利技术的效果

33、可以提供新的tracrrna单元及使用其的基因组编辑方法。新的tracrrna单元由于1条rna链短,因此能够削减化学合成rna链的成本。另外,通过将tracrrna分割,rna链的5’及3’末端数增加,能够增加赋予于tracrrna的功能性基序的数量、种类,由此能够增加在供体共享(tethering)中的应用、常规的核酸修饰设计。

本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种tracrRNA单元,其为用于CRISPR-Cas9基因组编辑系统的、由第1单链RNA和第2单链RNA构成的tracrRNA单元,

2.一种tracrRNA单元,其为用于CRISPR-Cas9基因组编辑系统的、由第1单链RNA和第2单链RNA和第3单链RNA构成的tracrRNA单元,

3.根据权利要求1或2所述的tracrRNA单元,其中,crRNA与第1单链RNA按照该顺序而连接。

4.根据权利要求2所述的tracrRNA单元,其中,crRNA和第1单链RNA和第2单链RNA按照该顺序而连接。

5.根据权利要求1所述的tracrRNA单元,其中,第1单链RNA和第2单链RNA中的至少一者具有39个核苷酸以下的长度。

6.根据权利要求2所述的tracrRNA单元,其中,第1单链RNA、第2单链RNA及第3单链RNA中的至少1者具有39个核苷酸以下的长度。

7.一种基因组编辑方法,其使用:

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

1.一种tracrrna单元,其为用于crispr-cas9基因组编辑系统的、由第1单链rna和第2单链rna构成的tracrrna单元,

2.一种tracrrna单元,其为用于crispr-cas9基因组编辑系统的、由第1单链rna和第2单链rna和第3单链rna构成的tracrrna单元,

3.根据权利要求1或2所述的tracrrna单元,其中,crrna与第1单链rna按照该顺序而连接。

4.根...

【专利技术属性】
技术研发人员:岸本谦太国井厚志
申请(专利权)人:瑞吉诺水产研究所有限公司
类型:发明
国别省市:

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