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【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本说明书中公开了tracrrna单元及基因组编辑方法。
技术介绍
1、规律成簇的间隔短回文重复/crispr相关蛋白9(clustered regularlyinterspaced short palindromic repeats/crispr associated protein 9,crispr/cas9)系统是在细菌和古细菌中发现的针对病毒和质粒的免疫系统(非专利文献1)。该系统目前被用作在体外对各种生物的基因组dna的目标区域进行核苷酸序列的删除、置换或插入的方法(专利文献1和2)。
2、在细菌和古细菌中,具有与基因组dna的目标区域的核苷酸序列互补的核苷酸序列的crispr rna(crrna)和具有与crrna互补的核苷酸序列的tracrrna是不同的rna链,它们通过互补的核苷酸序列杂交,形成crrna:tracrrna双链并引导cas9。另一方面,通常体外的情况下,如非专利文献1、专利文献1和专利文献2所述,使用crrna和tracrrna夹着接头环序列以单条rna链形式结合而成的单向导rna(sgrna)代替crrna:tracrrna双链。
3、现有技术文献
4、专利文献
5、专利文献1:国际公开第2013/176772号公报
6、专利文献2:国际公开第2014/093661号公报
7、非专利文献
8、非专利文献1:m jinek,et al.:science,28jun 2012,vol 337,issue 6096,pp
9、非专利文献2:h nishimasu,et al.:cell,27feb 2014,vol 156,pp.935-949
技术实现思路
1、专利技术要解决的问题
2、如图1的(a)所示,tracrrna在其rna链内形成3个发夹环。3个发夹环从靠近与crrna进行杂交的核苷酸序列处起称为第1茎环、第2茎环、第3茎环。关于tracrrna,如此前非专利文献2所记载那样,已知即使第1茎环和第2茎环之间的接头部分缺损也能够作为tracrrna起作用,但是对此外的部分加以改良时是否能够维持作为tracrrna的功能这一点是完全不明的。
3、本专利技术的课题在于,提供新的tracrrna单元及使用其的基因组编辑方法。
4、用于解决问题的方案
5、项1.
6、一种tracrrna单元,其为用于crispr-cas9基因组编辑系统的、由第1单链rna和第2单链rna构成的tracrrna单元,
7、第1单链rna和第2单链rna不连续,
8、第1单链rna至少具有第1部分和第2部分,
9、第1部分和第2部分不重叠,第1部分具有与crrna的一部分互补的序列,第2部分具有与第2单链rna互补的序列。
10、项2.
11、一种tracrrna单元,其为用于crispr-cas9基因组编辑系统的、由第1单链rna和第2单链rna和第3单链rna构成的tracrrna单元,
12、第1单链rna和第2单链rna和第3单链rna不连续,
13、第1单链rna至少具有第1部分和第2部分,
14、第1部分和第2部分不重叠,第1部分具有与crrna的一部分互补的序列,第2部分具有与第2单链rna互补的序列,
15、第2单链rna至少具有第1部分,
16、第2单链rna的第1部分具有与第3单链rna互补的序列。
17、项3.
18、根据项1或2所述的tracrrna单元,其中,crrna和第1单链rna按照该顺序而连接。
19、项4.
20、根据项2所述的tracrrna单元,其中,crrna和第1单链rna和第2单链rna按照该顺序而连接。
21、项5.
22、根据项1所述的tracrrna单元,其中,第1单链rna和第2单链rna中的至少一者具有39个核苷酸以下的长度。
23、项6.
24、根据项2所述的tracrrna单元,其中,第1单链rna、第2单链rna及第3单链rna中的至少1者具有39个核苷酸以下的长度。
25、项7.
26、根据项2所述的tracrrna单元,其中,第1单链rna和第2单链rna不连续,第2单链rna和第3单链rna连续。
27、项8.
28、一种基因组编辑方法,其使用:
29、项1~7中任一项所述的tracrrna单元、
30、crrna、和
31、cas9。
32、专利技术的效果
33、可以提供新的tracrrna单元及使用其的基因组编辑方法。新的tracrrna单元由于1条rna链短,因此能够削减化学合成rna链的成本。另外,通过将tracrrna分割,rna链的5’及3’末端数增加,能够增加赋予于tracrrna的功能性基序的数量、种类,由此能够增加在供体共享(tethering)中的应用、常规的核酸修饰设计。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种tracrRNA单元,其为用于CRISPR-Cas9基因组编辑系统的、由第1单链RNA和第2单链RNA构成的tracrRNA单元,
2.一种tracrRNA单元,其为用于CRISPR-Cas9基因组编辑系统的、由第1单链RNA和第2单链RNA和第3单链RNA构成的tracrRNA单元,
3.根据权利要求1或2所述的tracrRNA单元,其中,crRNA与第1单链RNA按照该顺序而连接。
4.根据权利要求2所述的tracrRNA单元,其中,crRNA和第1单链RNA和第2单链RNA按照该顺序而连接。
5.根据权利要求1所述的tracrRNA单元,其中,第1单链RNA和第2单链RNA中的至少一者具有39个核苷酸以下的长度。
6.根据权利要求2所述的tracrRNA单元,其中,第1单链RNA、第2单链RNA及第3单链RNA中的至少1者具有39个核苷酸以下的长度。
7.一种基因组编辑方法,其使用:
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种tracrrna单元,其为用于crispr-cas9基因组编辑系统的、由第1单链rna和第2单链rna构成的tracrrna单元,
2.一种tracrrna单元,其为用于crispr-cas9基因组编辑系统的、由第1单链rna和第2单链rna和第3单链rna构成的tracrrna单元,
3.根据权利要求1或2所述的tracrrna单元,其中,crrna与第1单链rna按照该顺序而连接。
4.根...
【专利技术属性】
技术研发人员:岸本谦太,国井厚志,
申请(专利权)人:瑞吉诺水产研究所有限公司,
类型:发明
国别省市:
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