本发明专利技术属于生物领域，具体涉及一种可防治骨质疏松的牦牛骨胶原蛋白水解物制备方法、组合物及应用，本发明专利技术还提供了口服液体组合物，包括以下质量百分比的原料：6％牦牛骨胶原蛋白水解物，2％氨基葡萄糖硫酸盐，0.4％硫酸软骨素，0.0066％透明质酸，0.02％黑果枸杞粉，0.02％雪菊提取物，余量为水，通过所述的方法制备得到的牦牛骨胶原蛋白水解物和口服液体组合物，可以改善骨质疏松症小鼠骨组织的病理学改变，促进骨质疏松症组织中胶原蛋白的再生，提高皮质骨的BMD、BV/TV、Tb.N和Tb.Th，以及降低皮质骨的Tb.Sp和Po，具有防治骨质疏松的优异功能。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物领域，具体涉及一种可防治骨质疏松的牦牛骨胶原蛋白水解物制备方法、组合物及应用。
技术介绍
1、骨质疏松症(osteoporosis，op)是一种全身性骨病代谢疾病，其主要病理特征包括骨量减少、骨组织微观结构的破坏、骨脆性的增加以及高发性骨折。骨质疏松症被视为是骨骼衰老的直接表现，其严重影响着骨骼的结构和功能，进而影响机体整体的健康。不良的生活习惯、糖皮质激素类药物的长期使用以及饮食中缺乏钙和维生素d等因素都会加速骨骼衰老的进程，对骨骼健康产生不利影响。
2、胶原蛋白作为骨基质的主要组成物，占骨骼干重的大约三分之一，其中以i型胶原蛋白为主，占骨骼有机成分的80％至90％。骨胶原蛋白水解物是经过进一步水解的胶原蛋白，其具有优异的生物相容性和抗氧化性能。骨胶原蛋白水解物的来源多样且种类繁多，但其质量与功效存在显著差异，如何制备有效防治骨质疏松的胶原蛋白水解物仍是一个极大的挑战。其中，小分子量的骨胶原蛋白水解物因其易于吸收，而被视为具有较高的应用潜力。
3、牦牛，作为中国青藏高原特有的珍贵生物资源，因其生长在高寒缺氧和无污染的环境中，其来源的胶原蛋白具有独特性质。专利技术专利cn113151391b公开了一种牦牛骨胶原蛋白肽的制备方法，该方法所制备的牦牛骨胶原蛋白肽能显著改善肠道微生物的丰度，调节肠道菌群结构，优化肠道环境，该方法制备的牦牛胶原蛋白肽具有广泛的分子量范围。鉴于牦牛骨组织成分复杂，精确控制所制备的牦牛骨胶原蛋白水解物的分子量，并确保其具有高活性，仍是一个巨大的技术挑战。
>4、针对上述技术问题，本专利技术提供了一种新型牦牛骨胶原蛋白水解物的制备方法。该方法能够准确控制牦牛骨胶原蛋白水解物的分子量分布，所述的不同分子量分布的牦牛骨胶原蛋白水解物对骨质疏松症的治疗效果存在显著差异，其中，中分子量的牦牛骨胶原蛋白水解物在治疗骨质疏松症方面显示出最佳效果。该方法制备的口服产品能促进骨质疏松症小鼠骨组织中胶原蛋白的再生，并显著提升皮质骨的骨密度(bmd)、骨体积分数(bv/tv)、小梁数量(tb.n)、小梁厚度(tb.th)，同时有效降低小梁间隔(tb.sp)和骨组织多孔性(po)，具有显著的防治骨质疏松效果，在保健食品领域具有广阔的市场前景。
技术实现思路
1、为了解决现有技术中存在的上述技术问题，本专利技术的目的在于提供一种可防治骨质疏松的牦牛骨胶原蛋白水解物制备方法，包括如下步骤：
2、(1)牦牛骨预处理
3、牦牛骨碎骨机破碎，脱脂、脱钙、除杂，用水冲洗至ph＝7，得到预处理牦牛骨；
4、(2)牦牛骨胶原蛋白滤液的制备
5、取步骤(1)预处理牦牛骨，加入到浓度为0.5m的柠檬酸溶液中，料液比为1:10，在低温条件下，加入胃蛋白酶反应，过滤，ph值调节至中性，得到牦牛骨胶原蛋白滤液；
6、(3)牦牛骨胶原蛋白水解物的制备
7、向步骤(2)得到的牦牛骨胶原蛋白滤液中加入8～120u/ml的木瓜蛋白酶，在50℃的温度下，水解2～6小时，得到牦牛骨胶原蛋白水解物；
8、(4)灭酶
9、步骤(3)得到的牦牛骨胶原蛋白水解物置于沸水中；
10、(5)牦牛骨胶原蛋白水解物的纯化
11、取100ml步骤(4)得到的牦牛骨胶原蛋白水解物在层析柱中洗脱，洗脱液测定在220nm处吸光度，绘制洗脱曲线，尺寸排阻色谱法测定洗脱液的分子量分布，根据测定结果收集目标产物进行冷冻干燥，并存放在-20℃下备用。
12、优选的，步骤(3)所述的木瓜蛋白酶的浓度为16～120u/ml。
13、优选的，步骤(3)所述的木瓜蛋白酶的浓度为80～120u/ml。
14、优选的，步骤(3)所述的水解时间为3～6小时。
15、优选的，步骤(3)所述的水解时间为5～6小时。
16、本专利技术的第二目的是提供通过所述的制备方法制备得到的牦牛骨胶原蛋白水解物。
17、本专利技术的第三目的是提供所述的牦牛骨胶原蛋白水解物在制备治疗骨质疏松药物中的应用。
18、本专利技术的第四目的是提供一种能够防治骨质疏松的口服液体组合物，所述的口服液体组合物包括以下质量百分比的原料：6％牦牛骨胶原蛋白水解物，2％氨基葡萄糖硫酸盐，0.4％硫酸软骨素，0.0066％透明质酸，0.02％黑果枸杞粉，0.02％雪菊提取物，余量为水。
19、优选的，所述的牦牛骨胶原蛋白水解物为中分子量的牦牛骨胶原蛋白水解物。
20、本专利技术的第五目的是提供所述的口服液体组合物在制备防治骨质疏松的药物或保健品中的应用。
21、本专利技术的有益效果是：(1)本专利技术提供了一种具有防治骨质疏松功效的牦牛骨胶原蛋白水解物制备方法，所述的方法为分子量定向酶解-色谱联用，工艺简单，易于操作，成本较低，制备得到的牦牛骨胶原蛋白水解物改善骨质疏松症小鼠骨组织的病理学改变，促进成骨细胞的增殖、调控碱性磷酸酶含量、减少破骨细胞的骨吸收，促进骨质疏松症组织中胶原蛋白的再生，影响骨形态力学指标，改善骨质疏松。
22、(2)本专利技术还提供了用于改善骨质疏松的牦牛骨胶原蛋白水解物口服液体组合物，包括以下质量百分比的原料：6％牦牛骨胶原蛋白水解物，2％氨基葡萄糖硫酸盐，0.4％硫酸软骨素，0.0066％透明质酸，0.02％黑果枸杞粉，0.02％雪菊提取物，余量为水；通过所述的方法制备得到的口服液体组合物，可以改善骨质疏松症小鼠骨组织的病理学改变，加速骨质疏松组织中胶原纤维的表达，促进小鼠胫骨组织的骨小梁数量增加，间隙减小，骨小梁网状结构恢复，提高皮质骨的bmd、bv/tv、tb.n和tb.th，以及降低皮质骨的tb.sp和po，具有修复骨质疏松的效果。
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【技术保护点】
1.一种可防治骨质疏松的牦牛骨胶原蛋白水解物制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述的木瓜蛋白酶的浓度为16～120U/mL。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述的木瓜蛋白酶的浓度为80～120U/mL。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述的水解时间为3～6小时。
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述的水解时间为5～6小时。
6.通过权利要求1-5任一项所述的制备方法制备得到的牦牛骨胶原蛋白水解物。
7.如权利要求6所述的牦牛骨胶原蛋白水解物在制备治疗骨质疏松药物中的应用。
8.一种能够防治骨质疏松的口服液体组合物，其特征在于，所述的口服液体组合物包括以下质量百分比的原料：6％牦牛骨胶原蛋白水解物，2％氨基葡萄糖硫酸盐，0.4％硫酸软骨素，0.0066％透明质酸，0.02％黑果枸杞粉，0.02％雪菊提取物，余量为水。
9.如权利要求8所述的口服液体组合物，其特征在于，所述的牦牛骨胶原蛋白水解物为中分子量的牦牛骨胶原蛋白水解物。
10.如权利要求8或9所述的口服液体组合物在制备防治骨质疏松的药物或保健品中的应用。
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【技术特征摘要】
1.一种可防治骨质疏松的牦牛骨胶原蛋白水解物制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述的木瓜蛋白酶的浓度为16～120u/ml。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述的木瓜蛋白酶的浓度为80～120u/ml。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述的水解时间为3～6小时。
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述的水解时间为5～6小时。
6.通过权利要求1-5任一项所述的制备方法制备得到的牦牛骨胶原蛋白...
【专利技术属性】
技术研发人员：肖建喜，李娜，么林妍，李文华，
申请(专利权)人：胶原蛋白武汉生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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