【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种将人成纤维细胞转化为神经干细胞的方法，更详细地，涉及分别利用仙台病毒(sendai virus)或mrna或mirna与小分子化合物的组合通过直接转分化将人成纤维细胞转化为神经干细胞的方法及其用途。
技术介绍
1、自从在2007年进行将人成纤维细胞诱导为诱导性多能干细胞(inducedpluripotent stem cell)的研究，开始对细胞的重编程(reprogramming)进行研究。以往干细胞研究中使用的人胚胎干细胞来源神经干细胞存在可能因使用人类的胚胎而引起的伦理问题、免疫排斥反应以及移植未分化的胚胎干细胞时形成肿瘤等问题，成体干细胞存在难以获得细胞且其分化能力受限的问题。然而，虽然诱导性多能干细胞避免了伦理问题，也没有免疫排斥反应问题，但当移植未分化的干细胞时可能存在形成畸胎瘤的问题。并且，近期发表的直接转分化的神经干细胞与诱导性多能干细胞及胚胎干细胞来源神经干细胞具有相似的性质，但作为主要用于形成神经干细胞的方法的病毒系统由于基因的随机插入而可能形成突变，当移植到人体内时使用质粒、蛋白质、rna等来解决由病毒引起的问题，但当使用它们时，由于分化为神经干细胞的分化效率低并利用癌症基因，因此可能产生未确认的新问题。
2、作为解决这种诱导性多能干细胞的问题的方案，已报道利用直接转分化方法将人成纤维细胞直接转化(direct conversion)为所需细胞的研究。其中，以治疗顽固性脑部疾病为目的，积极进行利用成纤维细胞直接分化为神经细胞的研究，并且通过将各种组合的神经细胞相关转录因子引入人
3、由于如上所述的问题，最近正在研究利用成纤维细胞直接分化为神经干细胞的方法。例如，包括通过利用病毒系统引入各种转录因子来由成纤维细胞诱导神经干细胞的方法等。在本专利技术人先前的专利技术“利用小分子化合物将人成纤维细胞直接转化为神经干细胞的方法(pct/kr2016/003819)”中提出利用8种小分子化合物诱导成纤维细胞直接分化为神经干细胞的过程(直接转分化)的方法，对于如上所述的直接转分化，进一步需要研究可以通过进一步缩短分化周期并提高效率性来增殖足够量的神经干细胞以用作治疗剂的方法。
技术实现思路
1、技术问题
2、因此，本专利技术人在研究制备缩短直接转分化周期且高效率、高质量的神经干细胞的方法的过程中，通过利用未插入外源基因的仙台病毒、mrna或mirna中的一种以上；以及小分子化合物来诱导可以增殖移植所需的足够量的细胞，并具有遗传稳定性(基因组dna稳定性(genomic dna stability))而不形成肿瘤的神经干细胞，从而完成了本专利技术。
3、因此，本专利技术的目的在于，提供一种用于诱导成纤维细胞直接转化为神经干细胞的直接转分化诱导组合物，其包含选自由thiazovivin、丙戊酸(valproic acid)、嘌吗啡胺(purmorphamine)、a8301、sb43154、chir99021、5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine)及dznep组成的组中的一种以上小分子化合物以及仙台病毒、mrna或mirna中的一种以上。
4、本专利技术的再一目的在于，提供一种神经干细胞的制备方法，上述方法包括在包含选自由thiazovivin、丙戊酸(valproic acid)、嘌吗啡胺(purmorphamine)、a8301、sb43154、chir99021、5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine)及dznep组成的组中的一种以上小分子化合物以及仙台病毒、mrna或mirna中的一种以上的培养液中培养体细胞的步骤。
5、本专利技术的另一目的在于，提供一种用于治疗脑部疾病的细胞治疗剂，其包含通过上述制备方法制备的神经干细胞。
6、技术方案
7、为了实现如上所述的目的，本专利技术提供一种用于诱导成纤维细胞直接转化为神经干细胞的直接转分化诱导组合物，其包含选自由thiazovivin、丙戊酸(valproic acid)、嘌吗啡胺(purmorphamine)、a8301、sb43154、chir99021、5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine)及dznep组成的组中的一种以上小分子化合物以及仙台病毒、mrna或mirna中的一种以上。
8、为了实现本专利技术的再一目的，本专利技术提供一种神经干细胞的制备方法，上述方法包括在包含选自由thiazovivin、丙戊酸(valproic acid)、嘌吗啡胺(purmorphamine)、a8301、sb43154、chir99021、5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine)及dznep组成的组中的一种以上小分子化合物以及仙台病毒、mrna或mirna中的一种以上的培养液中培养人成纤维细胞的步骤。
9、为了实现本专利技术的另一目的，本专利技术提供一种用于治疗脑部疾病的细胞治疗剂，其包含通过上述制备方法制备的神经干细胞。
10、以下，将详细说明本专利技术。
11、本专利技术为利用仙台病毒、mrna或mirna及最佳的小分子化合物组合从成纤维细胞制备神经干细胞的方法，以由人成纤维细胞诱导神经干细胞。
12、为了在没有额外的基因引入过程的情况下将成纤维细胞分化为神经干细胞，本专利技术选择直接转分化方法，为此，使用组合用于分化的小分子化合物的培养液，并且可以通过进一步使用仙台病毒、mrna或mirna来缩短分化周期并提高效率性，以提高转分化效率。如本专利技术所述，可以通过利用小分子物质及仙台病毒、mrna或mirna的转分化来克服使用胚胎干细胞时出现的各种问题，并且可以通过减少使用诱导性多能干细胞的细胞治疗剂的副作用(肿瘤形成等)来用作安全性得到提高的细胞治疗剂。
13、在本专利技术中，“神经干细胞”为具有自我复制能力并具有分化为如星形胶质细胞(astrocyte)、少突胶质细胞(oligodendrocyte)和/或施万细胞(schwann cell)等神经元(neuron)和/或神经胶质(glia)的多能性的未分化细胞。神经干细胞通过产生特定神经系统细胞的神经祖细胞或神经胶质祖细胞的阶段分化为神经细胞(neural cell)，例如神经元或神经胶质等。上述神经干细胞的特征可以为分化为选自由星形胶质细胞(astrocyte)、少突胶质细胞(oligodendrocyte)、神经元(neuron)、多巴胺能神经元、γ-氨基丁酸能神经元、运动神经元及胆碱能神经元组成的组中的一种以上，但不限于此。
14、“直接转分化”为细胞重编程技术之一，是指直接对已经成熟的分化细胞直接重编程，使其恢复为干细胞的技术。本专利技术涉及一种可以通过直接转分化对作为人类体细胞的成本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于诱导成纤维细胞直接转化为神经干细胞的直接转分化诱导组合物，其特征在于，包含选自由Thiazovivin、丙戊酸、嘌吗啡胺、A8301、SB43154、CHIR99021、5-氮杂-2’-脱氧胞苷及DZNep组成的组中的一种以上小分子化合物以及仙台病毒。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，上述组合物还包含用于细胞培养的培养基。
3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，上述仙台病毒包含山中因子。
4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，上述成纤维细胞来源于人类。
5.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，上述神经干细胞分化为选自由星形胶质细胞、少突胶质细胞、神经元、多巴胺能神经元、γ-氨基丁酸能神经元、运动神经元及胆碱能神经元组成的组中的一种以上。
6.一种神经干细胞的制备方法，其特征在于，包括在包含选自由Thiazovivin、丙戊酸、嘌吗啡胺、A8301、SB43154、CHIR99021、5-氮杂-2’-脱氧胞苷及DZNep组成的组中的一种以上小分子化合物以及仙台病毒的培养基中培养人成纤
7.根据权利要求6所述的神经干细胞的制备方法，其特征在于，上述仙台病毒包含山中因子。
8.根据权利要求6所述的神经干细胞的制备方法，其特征在于，上述培养基为包含N2、B27、碱性成纤维细胞生长因子及表皮生长因子的DMEM/F12。
9.根据权利要求6所述的神经干细胞的制备方法，其特征在于，上述培养进行10天至20天。
10.根据权利要求6所述的神经干细胞的制备方法，其特征在于，上述神经干细胞分化为选自由星形胶质细胞、少突胶质细胞、神经元、多巴胺能神经元、γ-氨基丁酸能神经元、运动神经元及胆碱能神经元组成的组中的一种以上。
11.一种细胞治疗剂，其特征在于，包含根据权利要求1至5中任一项所述的培养液组合物；或通过根据权利要求6至10中任一项所述的制备方法制备的神经干细胞。
12.一种用于治疗脑部疾病的药物组合物，其特征在于，包含根据权利要求11所述的细胞治疗剂。
13.根据权利要求12所述的药物组合物，其特征在于，上述脑部疾病选自由脑卒中、中风、脑出血、脑梗塞、阿尔茨海默病、痴呆、亨廷顿病、帕金森病、多发性硬化、多系统神经萎缩、癫痫、皮克氏病及克雅病组成的组中。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于诱导成纤维细胞直接转化为神经干细胞的直接转分化诱导组合物，其特征在于，包含选自由thiazovivin、丙戊酸、嘌吗啡胺、a8301、sb43154、chir99021、5-氮杂-2’-脱氧胞苷及dznep组成的组中的一种以上小分子化合物以及仙台病毒。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，上述组合物还包含用于细胞培养的培养基。
3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，上述仙台病毒包含山中因子。
4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，上述成纤维细胞来源于人类。
5.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，上述神经干细胞分化为选自由星形胶质细胞、少突胶质细胞、神经元、多巴胺能神经元、γ-氨基丁酸能神经元、运动神经元及胆碱能神经元组成的组中的一种以上。
6.一种神经干细胞的制备方法，其特征在于，包括在包含选自由thiazovivin、丙戊酸、嘌吗啡胺、a8301、sb43154、chir99021、5-氮杂-2’-脱氧胞苷及dznep组成的组中的一种以上小分子化合物以及仙台病毒的培养基中培养人成纤维细胞的步骤。
7.根据权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：洪性会，南宫容，
申请(专利权)人：高丽大学校产学协力团，
类型：发明
国别省市：
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