【技术实现步骤摘要】
本申请涉及米曲霉 aokap9基因应用，具体涉及米曲霉 aokap9基因在提高米曲霉曲酸产量中的应用。
技术介绍
1、曲酸的化学名称为2-羟甲基-5-羟基-4-吡喃酮，是一种主要由曲霉属微生物利用糖类发酵产生的具有多种用途的有机酸。曲酸具有抑制酪氨酸酶、保鲜、防腐、抗氧化等作用，因此被广泛用于化妆品、食品和医药等行业。目前曲酸的生产主要是通过米曲霉菌种以葡萄糖等糖类为原料发酵而成。因此，获取高产曲酸菌株成为提高曲酸产量的关键。而从自然界中分离的米曲霉曲酸产量普遍不高，通常需要通过诱变筛选获得高产曲酸菌株。但目前研究表明诱变提高曲酸产量的效果已不明显。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于，提供一种米曲霉 aokap9基因在提高米曲霉曲酸产量中的应用，利用crispr/cas9技术挖掘鉴定提高米曲霉曲酸产量的基因，构建高产曲酸的米曲霉菌株，有效促进米曲霉曲酸的高效生物合成。
2、本专利技术采取的技术方案是：一种米曲霉 aokap9基因的应用，具体为将所述米曲霉 aokap9基因用于提高米曲霉曲酸产量。
3、进一步地，通过抑制米曲霉中 aokap9基因的表达或活性，以 aokap9基因的第278位至第2
4、进一步地，所述米曲霉 aokap9基因的核苷酸序列为seq id no.1：atggcaccaagtcacctgctgtgtacttttagtccttcgtatgtaaccgggatcaatataaataaaacccaatcacaatggaacaagcgagacagggattgccgatcaccaatcgggctcccgacgccaagccagaacgagcgagtggagcaaggcgcgagaaccaattagcgttgagccggtcaatcctggttgtcagcccacagcgttctttgtattgtcatataaagctctttttgactttcccagccgtctcaccttgtttctttcacctcctatctttctcctgtcaagctatcttgtcatctgtctttcgtttgcatttcgagtctacactttcaactccaatacactcgttcaaatcaagactcacttgaacaacaacacaagtacattcataatgtctactaccaccacctccgtcgccgccagcgccactgcctcctgcaacagcgtgacctactggcagctccccgtcgacgatgccgcctgcgccctccccaagaccggcaactactctgatgtcatggacaaatgctgctccccggccaaggtgaccgatttcgacaacggctgcggcctctactgtctcgcccagggccagagcgtcggcgacctcaaggactgcctgcgcaagaacggcgcccaggacggtcgcgagttctactgcaagggcaatgataccgccaccgccacggcctccgctccgtcttccaccaagaccggcgacaagaccggtactgccactggcagcggtgcctcctccacctcctccgacagcgccgcctatgctatccagcctgctgtttccaagggcggactcggtctcttggccatggtcttctgctccgctttgatgggggttgttgcctagatacttttcacttggggttggctacctgggaagaatgggtggatctgtctatatgctttgttttctttggtgatccgtcttgcgatgcatccggcaggacatattatttaatacccttacgatatgagcctgctgtattatactttttctcgtggtttggacgtcggtcggtattgagcttggttattctaattttaatgactgaaaagttcgatcttttatctgaaacgttctgaaacttgttgcattccgtagatttggaaacttgaacccgaggaaccgttatattttccagataag；
5、所述米曲霉 aokap9基因的氨基酸序列为seq id no.2：mapshllctfspsrltlflsppifllssylviclsfafrvytfnsntlvqikthlnnntstfimsttttsvaasatascnsvtywqlpvddaacalpktgnysdvmdkccspakvtdfdngcglyclaqgqsvgdlkdclrkngaqdgrefyckgndtatatasapsstktgdktgtatgsgasstssdsaayaiqpavskgglgllamvfcsalmgvva。
6、进一步地，抑制米曲霉中 aokap9基因的表达或活性，筛选高产曲酸的菌株的方法为：通过重叠pcr技术获得含有 aokap9靶标的grna表达盒pu6-aokap9-sgrna-tu6，然后将所述含有 aokap9靶标的grna表达盒pu6-aokap9-sgrna-tu6通过重组连接到所述基因编辑载体pprtii-cas9上，获得基因编辑载体pptrii-cas9-aokap9，以所述基因编辑载体pptrii-cas9-aokap9对米曲霉进行原生质体遗传转化，提高米曲霉曲酸产量。
7、进一步地，在所述重叠pcr技术中，以所述基因编辑载体pprtii-cas9-koja为模板，使用引物pu6-f和引物pu6-aokap9-r进行扩增，获得包含 aokap9靶标的pu6的片段pu6-aokap9；另外以所述基因编辑载体pprtii-cas9-koja为模板，使用引物tu6-aokap9-f和引物tu6-r进行扩增，获得包含 aokap9靶标的grna和u6终止子片段aokap9-sgrna-tu6；以包含 aokap9靶标本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种米曲霉Aokap9基因的应用，其特征在于，将所述米曲霉Aokap9基因用于提高米曲霉曲酸产量。
2.根据权利要求1所述的一种米曲霉Aokap9基因的应用，其特征在于，通过抑制米曲霉中Aokap9基因的表达或活性，以Aokap9基因的第278位至第297位作为靶标区域，构建含有米曲霉U6启动子PU6、Aokap9基因靶标序列、sgRNA和米曲霉U6终止子TU6的表达盒，插入到基因编辑载体pPRTII-Cas9上，生成基因编辑载体pPRTII-Cas9-Aokap9，对米曲霉进行原生质体遗传转化，筛选高产曲酸的菌株，提高米曲霉曲酸产量。
3.根据权利要求2所述的一种米曲霉Aokap9基因的应用，其特征在于，所述米曲霉Aokap9基因的核苷酸序列为SEQ ID No.1：ATGGCACCAAGTCACCTGCTGTGTACTTTTAGTCCTTCGTATGTAACCGGGATCAATATAAATAAAACCCAATCACAATGGAACAAGCGAGACAGGGATTGCCGATCACCAATCGGGCTCCCGACGCCAAGCCAGAACGAGCGA
4.根据权利要求3所述的一种米曲霉Aokap9基因的应用，其特征在于，抑制米曲霉中Aokap9基因的表达或活性，筛选高产曲酸的菌株的方法为：通过重叠PCR技术获得含有Aokap9靶标的gRNA表达盒PU6-Aokap9-sgRNA-TU6，然后将所述含有Aokap9靶标的gRNA表达盒PU6-Aokap9-sgRNA-TU6通过重组连接到所述基因编辑载体pPRTII-Cas9上，获得基因编辑载体pPTRII-Cas9-Aokap9，以所述基因编辑载体pPTRII-Cas9-Aokap9对米曲霉进行原生质体遗传转化，提高米曲霉曲酸产量。
5.根据权利要求4所述的一种米曲霉Aokap9基因的应用，其特征在于，在所述重叠PCR技术中，以所述基因编辑载体pPRTII-Cas9-kojA为模板，使用引物PU6-F和引物PU6-Aokap9-R进行扩增，获得包含Aokap9靶标的PU6的片段PU6-Aokap9；另外以所述基因编辑载体pPRTII-Cas9-kojA为模板，使用引物TU6-Aokap9-F和引物...
【技术特征摘要】
1.一种米曲霉aokap9基因的应用，其特征在于，将所述米曲霉aokap9基因用于提高米曲霉曲酸产量。
2.根据权利要求1所述的一种米曲霉aokap9基因的应用，其特征在于，通过抑制米曲霉中aokap9基因的表达或活性，以aokap9基因的第278位至第297位作为靶标区域，构建含有米曲霉u6启动子pu6、aokap9基因靶标序列、sgrna和米曲霉u6终止子tu6的表达盒，插入到基因编辑载体pprtii-cas9上，生成基因编辑载体pprtii-cas9-aokap9，对米曲霉进行原生质体遗传转化，筛选高产曲酸的菌株，提高米曲霉曲酸产量。
3.根据权利要求2所述的一种米曲霉aokap9基因的应用，其特征在于，所述米曲霉aokap9基因的核苷酸序列为seq id no.1：atggcaccaagtcacctgctgtgtacttttagtccttcgtatgtaaccgggatcaatataaataaaacccaatcacaatggaacaagcgagacagggattgccgatcaccaatcgggctcccgacgccaagccagaacgagcgagtggagcaaggcgcgagaaccaattagcgttgagccggtcaatcctggttgtcagcccacagcgttctttgtattgtcatataaagctctttttgactttcccagccgtctcaccttgtttctttcacctcctatctttctcctgtcaagctatcttgtcatctgtctttcgtttgcatttcgagtctacactttcaactccaatacactcgttcaaatcaagactcacttgaacaacaacacaagtacattcataatgtctactaccaccacctccgtcgccgccagcgccactgcctcctgcaacagcgtgacctactggcagctccccgtcgacgatgccgcctgcgccctccccaagaccggcaactactctgatgtcatggacaaatgctgctccccggccaaggtgaccgatttcgacaacggctgcggcctctactgtctcgcccagggccagagcgtcggcgacctcaaggactgcctgcgcaagaacggcgcccaggacggtcgcgagttctactgcaagggcaatgataccgccaccgccacggcctccgctccgtcttccaccaagaccggcgacaagaccggtactgccactggcagcggtgcctcctccacctcctccgacagcgccgcct...
【专利技术属性】
技术研发人员：张哲，邱婷，吴自明，方圣，张焕欣，姚丽华，曾永琦，
申请(专利权)人：江西科技师范大学，
类型：发明
国别省市：
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