【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及的是一种拮抗剂筛选领域的技术，具体是一种ccl5/ccr5生物轴靶向拮抗剂的高通量筛选方法。
技术介绍
1、ccl5/ccr5生物轴是多种疾病的治疗靶点，包括过敏性疾病、炎症、免疫疾病、恶性肿瘤以及covid-19等。其与多种恶性肿瘤，如三阴性乳腺癌等密切相关。靶向该生物轴的拮抗剂被认为是这些恶性疾病的潜在的治疗分子。但目前，靶向该生物轴的特异拮抗剂仍尚无报道。
技术实现思路
1、本专利技术针对现有技术仅针对ccr5单一靶点靶向拮抗剂的不足，提出一种ccl5/ccr5生物轴靶向拮抗剂的高通量筛选方法。通过构建基于微孔孔板的生物轴的靶向拮抗剂的高通量筛选模型，实现各种细胞表面受体与相应配体结合的分析及其相应的拮抗剂的高通量筛选。
2、本专利技术是通过以下技术方案实现的：
3、本专利技术涉及一种ccl5/ccr5生物轴靶向拮抗剂的高通量筛选方法，通过微孔板检测拮抗剂作用前后，趋化因子与其受体相互作用的信号变化，实现靶向ccl5/ccr5生物轴的拮抗剂的筛选。
4、所述的拮抗剂包括：小分子化合物、多肽和/或抗体。
5、所述的拮抗剂作用是指：向固化封闭于微孔板中的过表达人ccr5的人胚肾细胞(hek293t-ccr5)中依次加入待筛选拮抗剂候选物等，以及his-ccl5纯化蛋白。
6、所述的趋化因子与其受体相互作用的信号是指：通过向微孔板中加入的hrp(辣根过氧化物酶)或荧光偶联的anti-his抗体将ccl5与cc
7、所述的直接对信号进行检测是指：根据在405nm处的吸光值或荧光抗体的荧光信号，计算实验组拮抗剂候选物对趋化因子与其受体结合的抑制效率
8、实现其靶向拮抗剂的识别，其中实验组中为拮抗剂候选物，阴性对照组中为含相同浓度的dmso溶液，空白对照组中为含与his-ccl5等体积的pbs溶液。
9、技术效果
10、本专利技术利用微孔板对细胞表面受体与其相应配体结合的分析及其相应的靶向拮抗剂的高通量筛选，实现对小分子化合物，多肽或抗体等拮抗剂库进行高通量筛选，筛选靶向ccl5/ccr5生物轴的多种类型的拮抗剂。本专利技术中已通过对7555个来自多个化合物库的化合物进行筛选，筛选ccl5/ccr5生物轴的靶向拮抗剂。
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1.一种CCL5/CCR5生物轴靶向拮抗剂的高通量筛选方法，其特征在于，通过微孔板检测拮抗剂作用前后，趋化因子与其受体相互作用的信号变化，实现靶向CCL5/CCR5生物轴的拮抗剂的筛选；
2.根据权利要求1所述的CCL5/CCR5生物轴靶向拮抗剂的高通量筛选方法，其特征是，所述的趋化因子与其受体相互作用的信号是指：通过向微孔板中加入的HRP或荧光偶联的anti-His抗体将CCL5与CCR5结合的信号进行放大，并进一步通过加入HRP底物ABTS产生显色产物或直接对荧光信号进行检测。
3.根据权利要求2所述的CCL5/CCR5生物轴靶向拮抗剂的高通量筛选方法，其特征是，所述的直接对信号进行检测是指：根据在405nm处的吸光值或荧光抗体的荧光信号，计算实验组拮抗剂候选物对趋化因子与其受体结合的抑制效率实现其靶向拮抗剂的识别，其中实验组中为拮抗剂候选物，阴性对照组中为含相同浓度的DMSO溶液，空白对照组中为含与his-CCL5等体积的PBS溶液。
4.根据权利要求1所述的CCL5/CCR5生物轴靶向拮抗剂的高通量筛选方法，其特征是，可以检测但不局限于
5.根据权利要求1-4中任一所述的CCL5/CCR5生物轴靶向拮抗剂高通量筛选方法，其特征是，具体包括：
6.一种靶向CCL5/CCR5生物轴维替泊芬的应用，其特征在于，将其用于靶向CCL5/CCR5生物轴的分子探针或用于CCL5/CCR5轴生理及医学作用机制和疾病治疗的小分子化合物。
...【技术特征摘要】
1.一种ccl5/ccr5生物轴靶向拮抗剂的高通量筛选方法，其特征在于，通过微孔板检测拮抗剂作用前后，趋化因子与其受体相互作用的信号变化，实现靶向ccl5/ccr5生物轴的拮抗剂的筛选；
2.根据权利要求1所述的ccl5/ccr5生物轴靶向拮抗剂的高通量筛选方法，其特征是，所述的趋化因子与其受体相互作用的信号是指：通过向微孔板中加入的hrp或荧光偶联的anti-his抗体将ccl5与ccr5结合的信号进行放大，并进一步通过加入hrp底物abts产生显色产物或直接对荧光信号进行检测。
3.根据权利要求2所述的ccl5/ccr5生物轴靶向拮抗剂的高通量筛选方法，其特征是，所述的直接对信号进行检测是指：根据在405nm处的吸光值或荧光抗体的荧光信号，计算实验组拮抗剂候选物对趋化因子与其受体结合的抑制效率实现其靶向拮抗剂的识别，其中实验组中为拮...
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