【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物技术研发领域，具体提供了一种具有膝关节损伤修复功能的干细胞组合物及其制备方法。
技术介绍
1、膝关节损伤一种常见骨科疾病，而骨关节炎(osteoarthritis,oa)是一种退行性疾病，是最为常见且最难治愈的一种的膝关节损伤，可分为原发性oa和继发性oa；原发性oa病因不明，继发性oa病因明确，包括内分泌系统紊乱、解剖结构异常、创伤后关节炎和炎性关节炎(参见koh y.g.,choi y.j.infrapatellar fat pad-derived mesenchymal stemcell therapy for knee osteoarthritis.the knee，2012，19(6)：902–907)。oa的特点是关节软骨细胞减少和关节基质破坏，具体症状包括持续性软骨细胞损伤、关节软骨细胞丢失、软骨下微骨折、软骨下骨外露、关节边缘及软骨下骨增生(参见ghosh p.,smithm.osteoarthritis,genetic and molecular mechanisms.biogerontology，2002，3(1–2)：85–88；espinoza f,matas j,orrego m,et al.allogeneic mesenchymal stromal cell(msc)therapy for knee osteoarthritis(oa):a phase i/ii randomized controlledtrial.cytotherapy，2017，19(5)：24)。临床上oa患
2、流行病学统计显示，40岁以上人群原发性oa的总体患病率为46.3％，其中男性为41.6％，女性为50.4％，在中老年人群中的发病率可达40％和80％。病情较轻时影响生活质量，病情较重时可导致残疾，最终致残率可达50％以上(参见zhu y,wang y,zhao b,etal.comparison of exosomes secreted by induced pluripotent stem cell-derivedmesenchymal stem cells and synovial membrane-derived mesenchymal stem cellsfor the treatment of osteoarthritis.stem cell res ther，2017，8(1)：64)。因此，oa已成为严重的健康问题。
3、此外，运动活动与随后膝oa的发展直接相关。职业运动员进行的体育活动是一个明显的膝oa的危险因素。据统计(参见driban j b,hootman j m,sitler m r,et al.isparticipation in certain sports associated with knee osteoarthritis？j athltrain，2017，52(6)：497-506)，oa患病率在特定运动中均具有明显升高，膝骨性关节炎的患病率分别为足球(or为3.5)、精英级长跑(or为3.3)、竞技举重(or为6.9)和摔跤(or为3.8)，精英运动(足球或定向越野)和非精英运动参与者有更大的患病率。因此，膝oa也成为困扰职业运动员的严重疾病之一。
4、目前，oa的治疗方法非常有限，常规治疗方法包括物理治疗、非甾体抗炎药、止痛药、透明质酸、富血小板血浆(prp)或皮质类固醇关节内注射、传统中药和膝关节镜手术(参见dantas l o，salvini t f and mcalindonb t e，knee osteoarthritis:keytreatments and implications for physical therapy，braz j phys ther，2021，25(2)：135–146)。所有上述治疗都只能缓解症状，但无法修复软骨，随着oa的恶化，需要进行全膝关节置换术(参见jones i a.,togashi r.,wilson m l.et al.intra-articulartreatment options for knee osteoarthritis.nat rev rheumatol，2019，15(2)：77–90)。
5、间充质干细胞(mesenchymal stem cells，mscs)具有自我更新和多向分化潜能，可通过定向分化、调节免疫、抗炎、促血管生成、改善微环境和促进再生，对多种疾病发挥治疗作用。msc已用于治疗多种疾病，如卵巢早衰、帕金森病、神经系统损伤和肌萎缩侧索硬化症。msc疗法可用于oa治疗，并已显示出令人鼓舞的结果，干细胞治疗oa将成为再生医学的一个里程碑。
6、研究表明，mscs具有以下功能：(1)与免疫系统相互作用，促进免疫调节(参见coulson-thomas v j,coulson-thomas y m,gesteira t f,et al.extrinsic andintrinsic mechanisms by which mesenchymal stem cells suppress the immunesystem.ocul surf，2016，14(2)：121–134)；(2)向损伤部位迁移，增强外周组织的耐受性，抑制炎性因子的释放，促进损伤组织的修复，增加损伤细胞的活性(ryu j s,jung y h,chom y,et al.co-culture with human synovium-derived mesenchymal stem cellsinhibits inflammatory activity and increases cell proliferation of sodiumnitroprusside-stimulated chondrocytes.biochem biophys res commun，2014，447(4)：715–720)；(3)具有很大的多向分化和增殖潜力；(4)分泌多种细胞因子，如转化生长因子β1、肝细胞生长因子、成纤维细胞生长因子和血管内皮生长因子，具有抗炎、抗凋亡、抗纤维化、促血管生成、促有丝分裂、促伤口愈合等作用(参见susanne g.,julia l.tissue-engineering strategies to repair chondral and osteochondral tissu本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗NGF抗体，其特征在于，所述抗NGF抗体包括氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示轻链可变区。
2.一种干细胞组合物,其特征在于，其包括间充质干细胞和权利要求1所述的抗体。
3.根据权利要求2所述的干细胞组合物，其特征在于，所述间充质干细胞选自骨髓间充质干细胞、脐带间充质干细胞和脂肪间充质干细胞中的至少一种。
4.根据权利要求3所述的干细胞组合物，其特征在于，所述间充质干细胞为脂肪间充质干细胞。
5.根据权利要求4所述的干细胞组合物，其特征在于，所述脂肪间充质干细胞的制备方法包括：将脂肪组织剪碎，清洗脂肪组织，经100目滤网过滤，使用胶原酶消化；离心收集细胞，用PBS再次洗涤细胞并离心收集细胞；重悬于培养基中,于37℃、5％CO2的条件下，进行传代培养，共传代2-5次。
6.根据权利要求5所述的干细胞组合物，其特征在于，所述脂肪间充质干细胞制备中还包括激活步骤，所述激活步骤包括接种ADSCs细胞培养至细胞融合度达到70％以上时，加入终浓度为100ng/mL的BM
7.根据权利要求2-6任一项所述的干细胞组合物，所述组合物的剂型为注射剂。
8.权利要求2-7任一项所述的干细胞组合物在制备膝关节损伤修复药物中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述膝关节损伤为膝关节炎。
10.一种如权利要求2-7任一项所述的干细胞组合物的制备方法，包括：从脂肪组织中提取脂肪间充质干细胞，使用BMP-9激活；制备抗NGF抗体，所述抗体包括氨基酸序列如SEQID NO:1所示重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示轻链可变区。
...【技术特征摘要】
1.一种抗ngf抗体，其特征在于，所述抗ngf抗体包括氨基酸序列如seq id no:1所示重链可变区和氨基酸序列如seq id no:2所示轻链可变区。
2.一种干细胞组合物,其特征在于，其包括间充质干细胞和权利要求1所述的抗体。
3.根据权利要求2所述的干细胞组合物，其特征在于，所述间充质干细胞选自骨髓间充质干细胞、脐带间充质干细胞和脂肪间充质干细胞中的至少一种。
4.根据权利要求3所述的干细胞组合物，其特征在于，所述间充质干细胞为脂肪间充质干细胞。
5.根据权利要求4所述的干细胞组合物，其特征在于，所述脂肪间充质干细胞的制备方法包括：将脂肪组织剪碎，清洗脂肪组织，经100目滤网过滤，使用胶原酶消化；离心收集细胞，用pbs再次洗涤细胞并离心收集细胞；重悬于培养基中,于37℃、5％co2的条件下，进行传代培养，...
【专利技术属性】
技术研发人员：张桂丽，沈元琳，张彦，
申请(专利权)人：山东清蕊生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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