【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程和分子生物学领域，具体涉及一种鸡nrg4基因近端启动子和双向启动子及其构建方法和应用。
技术介绍
1、神经调节因子(neuregulins,nrgs)是多肽生长因子，是表皮生长因子家族的成员。nrgs家族有4个成员(nrg1、nrg2、nrg3和nrg4)。神经调节蛋白4(neuregulin 4,nrg4)是新发现的脂肪细胞因子，在小鼠肺、心脏和脂肪组织中表达，在棕色脂肪组织中表达水平最高。nrg4含有一个egf样结构域，在蛋白水解裂解后释放，作为自分泌/旁分泌或内分泌信号。哺乳动物研究发现，nrg4主要通过特异性结合表皮生长因子受体4(erb-b2 receptortyrosine kinase 4,erbb4)，激活erbb4信号通路，从而促进葡萄糖摄取和血管生成，抑制炎症产生，维持代谢稳态。
2、肥胖小鼠和人类的脂肪组织nrg4 mrna表达水平均下降，提示其可能具有肥胖保护作用。nrg4转基因小鼠研究发现，nrg4可增加几种脂肪因子的mrna表达，包括脂素、脂联素和血管内皮生长因子α(vegfα)，这些脂肪因子被认为具有改善肥胖代谢失调的作用。此外，nrg4还可以促进白色脂肪组织(wat)褐变和前脂肪细胞分化，通过内分泌途径作用于肝，降低肝脂肪合成。因此，nrg4是有益细胞因子，有望用于肥胖、糖尿病、胰岛素抵抗和非酒精性脂肪肝等代谢疾病的治疗。
3、鸡不仅是一个重要的经济动物，还是发育生物学和免疫学等研究的一个重要动物模型。在现在肉鸡产业中，由于长期的遗传选择，肉鸡的生长速
4、综上所述，nrg4是低脂肉鸡育种的候选基因。许多动植物的研究显示，基因的外显子和内含子，特别是近端外显子和内含子，可以通过多种机制参与调控自身基因的表达。目前，还没有鸡nrg4基因近端外显子和内含子的转录调控的研究报道，开展nrg4基因近端外显子和内含子的启动子分析，对于揭示鸡nrg4的转录调控机制、培育低腹脂肉鸡、以及揭示一些人类疾病发生背后的分子机制和开发靶向，nrg4表达的药物具有潜在应用价值。
技术实现思路
1、基于以上不足之处，本专利技术提供了一种鸡nrg4基因近端启动子，该启动子在鸡胚成纤维细胞中具有启动子活性，且受特定转录因子cebp/α的调控。
2、本专利技术采用如下的技术方案：一种鸡nrg4基因近端启动子，所述鸡nrg4基因近端启动子为核苷酸序列如seq id no：1-seq id no：4所示的a1-a4序列中的任意一条。
3、进一步的，所述鸡nrg4基因近端启动子a1序列其具有双向启动子活性。
4、本专利技术的另一目的是提供一种引物组，用于扩增如上所述的鸡nrg4基因近端启动子，所述引物组包括：扩增a1序列的如seq id no：5所示上游引物和如seq id no：9所示下游引物；扩增a2序列的如seq id no：6所示上游引物和如seq id no：9所示下游引物；扩增a3序列的如seq id no：7所示上游引物和如seq id no：9所示下游引物；扩增a4序列的如seq id no：8所示上游引物和如seq id no：9所示下游引物。
5、本专利技术的另一目的是提供一种试剂盒，其特征在于，包括如上所述的引物组。
6、本专利技术的另一目的是提供一种如上所述的鸡nrg4基因近端启动子的构建方法，包括以下步骤：以鸡全血中提取的dna作为模板，采用如上所述的引物组进行pcr扩增，获取鸡nrg4基因近端启动子。
7、本专利技术的另一目的是提供一种重组载体，包括如上所述的鸡nrg4基因近端启动子。
8、本专利技术的另一目的是提供一种重组菌，包括权利要求上所述的重组载体。
9、本专利技术的另一目的是提供一种如上所述的鸡nrg4基因近端启动子的应用，应用于如下任一项中：(1)、应用于启动萤火虫荧光素酶在真核细胞中表达；所述真核细胞为鸡胚成纤维细胞；(2)、应用于鸡的遗传育种中，所述遗传育种为培育低腹脂肉鸡；(3)、所述鸡nrg4基因近端启动子受特定转录因子cebp/α的调控。
10、本专利技术具有以下技术效果及优点：本专利技术提供的这4种鸡nrg4基因近端启动子在鸡胚成纤维细胞中都具有启动子活性，说明这4种启动子都能直接调控鸡nrg4转录表达，通过过表达c/ebpα能够促进这4种启动子的活性。同时，本专利技术提供的鸡nrg4基因近端启动子a1具有双向启动子活性；同时，本专利技术还验证了鸡nrg4基因近端启动子受到特定转录因子c/ebpα的调控，这对于揭示鸡nrg4的转录调控机制、培育低腹脂肉鸡、以及揭示多种人类疾病发生背后的分子机制和开发靶向nrg4表达的药物具有潜在应用价值及实用价值。
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1.一种鸡NRG4基因近端启动子，其特征在于，所述鸡NRG4基因近端启动子为核苷酸序列如SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：4所示的A1-A4序列中的任意一条。
2.如权利要求1所述的一种鸡NRG4基因近端启动子，其特征在于，所述鸡NRG4基因近端启动子A1序列其具有双向启动子活性。
3.一种引物组，其特征在于，用于扩增如权利要求1所述的鸡NRG4基因近端启动子，所述引物组包括：
4.一种试剂盒，其特征在于，包括如权利要求3所述的引物组。
5.一种如权利要求1所述的鸡NRG4基因近端启动子的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：以鸡全血中提取的DNA作为模板，采用如权利要求3所述的引物组进行PCR扩增，获取鸡NRG4基因近端启动子。
6.一种重组载体，其特征在于，包括如权利要求1所述的鸡NRG4基因近端启动子。
7.一种重组菌，其特征在于，包括权利要求6所述的重组载体。
8.一种如权利要求1所述的鸡NRG4基因近端启动子的应用，其特征在于，应用于如下任一项中：(1)、应用于启动萤火虫荧光素酶
...【技术特征摘要】
1.一种鸡nrg4基因近端启动子，其特征在于，所述鸡nrg4基因近端启动子为核苷酸序列如seq id no：1-seq id no：4所示的a1-a4序列中的任意一条。
2.如权利要求1所述的一种鸡nrg4基因近端启动子，其特征在于，所述鸡nrg4基因近端启动子a1序列其具有双向启动子活性。
3.一种引物组，其特征在于，用于扩增如权利要求1所述的鸡nrg4基因近端启动子，所述引物组包括：
4.一种试剂盒，其特征在于，包括如权利要求3所述的引物组。
5.一种如权利要求1所述的鸡nrg4基因近端启动子的构建方法，其特征在于，包括以下步骤...
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