【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及食品安全监测，尤其是涉及一种leg/碳化钛基适体传感器检测afb1的方法。
技术介绍
1、用于花生、玉米中微量黄曲霉毒素b1（aflatoxin b1，简写为afb1）残留检测的方法主要有高效液相色谱法、高效液相色谱荧光检测联用法、液相色谱-质谱法和酶联免疫吸附法，这些方法均表现出良好的灵敏度和选择性。然而前者的设备仪器维护成本较高，操作需要经过专业培训的人员进行，结果需要解释，样品前处理时间长，仪器对样品成分和质量的变化很敏感，这些原因限制了该方法只能在设备齐全的实验室中使用。后者的灵敏度易受干扰，可能与其他物质发生交叉反应，导致假阳性。因此，建立一种简便、快速、高灵敏的黄曲霉毒素b1分析方法，是当前急需解决的重要科学问题。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术旨在提出一种leg/碳化钛基适体传感器检测afb1的方法，该leg/碳化钛基适体传感器制作简单，且稳定性好、灵敏度低、特异性优良，在0.0001-100ng/ml范围内表现出良好的线性关系，实现了对afb1的检测。
2、为达到上述目的，本专利技术的技术方案是这样实现的：
3、一种leg/碳化钛基适体传感器检测afb1的方法，该方法包括如下步骤：
4、s1、制备leg/ti3c2基适体传感器
5、首先分别制备leg悬液和ti3c2mxene材料，然后将leg悬液和ti3c2mxene材料通过超声混合得到leg/ti3c2mxene纳米材料，再将leg/ti3c2
6、s2、检测afb1
7、s21、绘制afb1的工作曲线
8、将afb1标准液滴加在leg/ti3c2基适体传感器上孵育，之后对其进行差分脉冲伏安法检测，根据电信号ifc和imb的变化比值，进行工作曲线的绘制；
9、s22、检测待测样品中的afb1
10、将待测样品滴加在在leg/ti3c2基适体传感器上孵育，在与步骤s21相同的条件下，记录电流值，并根据步骤s21所得到的工作曲线，计算待测样品中afb1的浓度。
11、本专利技术将石墨粉经过超声剥离之后，不仅可以形成单层，而且单层的片状也可以超声变成更小的片状，形成带电材料，能和ti3c2mxene作用，形成稳定的混合材料。而石墨粉本身颗粒度大，呈多层状态，容易沉淀，不利于制备leg/ti3c2mxene纳米材料。
12、进一步，制备leg悬液的具体方法为：
13、（1）将石墨粉分散于n,n-二甲基甲酰胺和去离子水的共溶剂中；
14、（2）利用超声使石墨片深度分层；
15、（3）分散液经离心去除未剥落的石墨，收集三分之二的上清液作为leg悬液。
16、进一步，步骤（1）中，石墨粉与共溶剂的固液比为1:100g/ml，n,n-二甲基甲酰胺和去离子水的体积比为7:3；
17、步骤（2）中，超声48±5小时，温度为40-50℃；
18、步骤（3）中，离心的条件为：4000±500转，离心40±5min。
19、进一步，制备ti3c2mxene材料的具体方法为：
20、（1）将ti3alc2粉末、氟化锂分散在盐酸中，搅拌，随后用去离子水清洗混合物收集固体样品；
21、（2）将固体样品加入去离子水中超声处理；
22、（3）冷冻干燥后得到最终产品ti3c2mxene材料。
23、进一步，步骤（1）中，ti3alc2粉末与氟化锂的质量比为1:3.2，ti3alc2粉末和氟化锂与盐酸的固液比为21:200g/ml，盐酸的浓度为9m，室温下搅拌26小时；
24、步骤（2）中，超声处理6±1小时；
25、步骤（3）中，冷冻干燥24-48小时。
26、进一步，制备leg/ti3c2基适体传感器的具体方法为：
27、（1）将制备好的leg悬液和ti3c2mxene材料超声混合得到leg/ti3c2mxene纳米材料；
28、（2）选用ito作为工作电极，用丙酮、乙醇、去离子水依次清洗ito，清除表面脏污；
29、（3）将洁净的ito放在烘箱中烘干，在表面滴加leg/ti3c2mxene纳米材料，室温干燥之后，用去离子水冲洗，得到leg/ti3c2mxene/ito；
30、（4）在leg/ti3c2mxene/ito上滴加黄曲霉毒素b1适体fc-aptamer，孵育后在室温下干燥，之后用去离子水冲洗表面，得到fc-aptamer/leg/ti3c2mxene/ito；
31、（5）在fc-aptamer/leg/ti3c2mxene/ito上滴加牛血清白蛋白bsa，在室温条件下干燥，后用去离子水冲洗，得到bsa/fc-aptamer/leg/ti3c2mxene/ito；
32、（6）在bsa/fc-aptamer/leg/ti3c2mxene/ito上滴加适体互补链mb-cdna，在室温下孵育并用去离子水冲洗，得到mb-cdna/bsa/fc-aptamer/leg/ti3c2mxene/ito，最终得到用于检测afb1的leg/ti3c2基适体传感器mb-cdna/bsa/fc-aptamer/leg/ti3c2mxene/ito。
33、进一步，步骤（1）中，先将ti3c2mxene材料溶解在溶剂中形成浓度为5mg/ml的溶液，再与leg悬液超声混合3小时；
34、步骤（3）中，滴加的leg/ti3c2mxene纳米材料覆盖工作电极ito表面即可，体积可以为80μl；
35、步骤（4）中，滴加的黄曲霉毒素b1适体fc-aptamer的浓度为0.5-6μm，体积为20 μl，孵育时间为90±2分钟；
36、步骤（5）中，滴加的牛血清白蛋白bsa的质量浓度为1%，体积为10 μl；在室温条件下干燥1小时；
37、步骤（6）中，滴加的mb-cdna的浓度为1-1.5μm，体积为20μl，孵育时间为80±2分钟。
38、进一步，leg悬液和ti3c2mxene材料的体积为1:4-1:10。
39、进一步，在步骤s21中，孵育时间为40分钟，孵育后室温干燥后用去离子水冲洗，然后将leg/ti3c2基适体传感器置于1mm铁氰化钾溶液中进行差分脉冲伏安法检测。
40、进一步，afb1标准液浓度为1×10-4ng/ml-100ng/ml；
41、实验过程中，循环伏安法cv电压设置为-0.6-1v，差分脉冲伏安法dpv电压设置范围为-0.5-0.6本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种LEG/碳化钛基适体传感器检测AFB1的方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的LEG/碳化钛基适体传感器检测AFB1的方法，其特征在于：制备LEG悬液的具体方法为：
3.根据权利要求2所述的LEG/碳化钛基适体传感器检测AFB1的方法，其特征在于：步骤（1）中，石墨粉与共溶剂的固液比为1:100 g/ml，N,N-二甲基甲酰胺和去离子水的体积比为7:3；
4.根据权利要求1所述的LEG/碳化钛基适体传感器检测AFB1的方法，其特征在于：制备Ti3C2 MXene材料的具体方法为：
5.根据权利要求4所述的LEG/碳化钛基适体传感器检测AFB1的方法，其特征在于：步骤（1）中，Ti3AlC2粉末与氟化锂的质量比为1:3.2，Ti3AlC2粉末和氟化锂与盐酸的固液比为21:200g/ml，盐酸的浓度为9M，室温下搅拌26小时；
6.根据权利要求1所述的LEG/碳化钛基适体传感器检测AFB1的方法，其特征在于：制备LEG/Ti3C2基适体传感器的具体方法为：
7.根据权利要求6所述
8.根据权利要求1-7任一项所述的LEG/碳化钛基适体传感器检测AFB1的方法，其特征在于：LEG悬液和Ti3C2 MXene材料的体积为1:4-1:10。
9.根据权利要求1所述的LEG/碳化钛基适体传感器检测AFB1的方法，其特征在于：在步骤S21中，孵育时间为40分钟，孵育后室温干燥后用去离子水冲洗，然后将LEG/Ti3C2基适体传感器置于1mM铁氰化钾溶液中进行差分脉冲伏安法检测。
10.根据权利要求1所述的LEG/碳化钛基适体传感器检测AFB1的方法，其特征在于：AFB1标准液浓度为1×10-4 ng/mL-100ng/mL；
...【技术特征摘要】
1.一种leg/碳化钛基适体传感器检测afb1的方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的leg/碳化钛基适体传感器检测afb1的方法，其特征在于：制备leg悬液的具体方法为：
3.根据权利要求2所述的leg/碳化钛基适体传感器检测afb1的方法，其特征在于：步骤（1）中，石墨粉与共溶剂的固液比为1:100 g/ml，n,n-二甲基甲酰胺和去离子水的体积比为7:3；
4.根据权利要求1所述的leg/碳化钛基适体传感器检测afb1的方法，其特征在于：制备ti3c2 mxene材料的具体方法为：
5.根据权利要求4所述的leg/碳化钛基适体传感器检测afb1的方法，其特征在于：步骤（1）中，ti3alc2粉末与氟化锂的质量比为1:3.2，ti3alc2粉末和氟化锂与盐酸的固液比为21:200g/ml，盐酸的浓度为9m，室温下搅拌26小时；
6.根据权利要求1所述的leg/碳化钛基适体传感...
【专利技术属性】
技术研发人员：范楷杰，曹东丽，李芳，杨栩，李伟，吴子健，徐梦洁，
申请(专利权)人：天津市食品安全检测技术研究院，
类型：发明
国别省市：
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