【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及土壤检测，具体涉及一种土壤中纤维素酶活性的检测方法。
技术介绍
1、土壤纤维素酶(soil cellulase,s-cl)主要来源于土壤微生物，是一种复合酶，可催化纤维素分解为纤维二糖，进一步分解为葡萄糖，从而为微生物提供可利用的碳源营养物质，因此土壤纤维素酶是土壤碳素代谢中的一种重要酶。在农林业生产中，土壤酶活性是评价土壤肥力和土壤质量的重要指标，纤维素酶作为参与土壤中有机物质矿化的关键酶之一，其活性的测定对于了解土壤肥力和植物生长环境至关重要。
2、目前，关于土壤纤维素酶的检测方法主要有分光光度法、荧光法、酶联免疫吸附测定法等，其中分光光度法主要利用土壤纤维素酶催化纤维素分解生成可溶性糖类，通过测定糖类的生成量来计算土壤纤维素酶的活性，然而在测定过程中易受干扰因素影响，比如金属离子可能会与检测试剂发生化学反应，生成有色物质或沉淀，干扰正常的显色反应，或者阻碍底物与酶的正常结合，降低酶的催化活性，从而影响对酶解产物的准确测定，导致酶活性检测结果出现偏差，干扰测试结果的真实性；而且在复杂的土壤环境中，纤维素酶容易发生非特异性吸附，吸附到土壤颗粒或其他杂质上，从而影响检测结果的准确性。另外，荧光法和酶联免疫吸附测定法操作比较复杂，对操作人员要求高，设备成本也较高，不适合持续使用。
3、因此，如果能基于现有方法设计一种减少干扰因素的影响且结果可靠的检测方法，则有利于纤维素酶检测技术的发展。
技术实现思路
1、针对现有技术的缺陷，本专利技术设计了一种
2、为了实现上述目的，本专利技术解决技术问题采用如下技术方案：
3、一方面，本专利技术提供了一种土壤中纤维素酶活性的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：
4、s1.配制葡萄糖标准溶液，将葡萄糖标准溶液与3,5-二硝基水杨酸溶液沸水浴，冷却后于波长508nm处检测，并绘制标准曲线；
5、s2.将土壤粉末进行预处理除杂；
6、s3.将预处理后的土壤与羧甲基纤维素溶液、缓冲液、甲苯混合恒温培养；
7、s4.培养结束后加硫酸铝钾振荡30min后过滤，取滤液按步骤s1的方法于波长508nm处比色测定。
8、在步骤s3中，加入甲苯是为了防止反应过度进行，从而保证测定结果的准确性，减少样品因高温而发生氧化或分解，避免影响测定结果。
9、在其中一些实施例中，在步骤s1中，所述预处理包括：
10、先将土壤干燥研磨成粉末过50目筛，然后将土壤粉末加入除杂剂150rpm搅拌15-25min，再加入1mmol/l过氧化氢溶液继续搅拌35-55min，搅拌完成后过滤，取滤液，作为待测样品；
11、所述除杂剂包括硫酸钾、硫酸钠。
12、在其中一些实施例中，所述硫酸钾、硫酸钠的质量比为(1-5)：(3-7)。
13、在其中一些实施例中，所述硫酸钾、硫酸钠的质量比为3：5。
14、在其中一些实施例中，所述葡萄糖标准溶液浓度为0-1.2mg/ml。
15、在其中一些实施例中，在步骤s3中，所述培养时间为48-96h。
16、在其中一些实施例中，在步骤s3中，所述培养温度为35-40℃。
17、在其中一些实施例中，所述缓冲液为ph值5.5的0.2mol/l磷酸盐缓冲液缓冲溶液。
18、在其中一些实施例中，所述羧甲基纤维素溶液的质量百分数为1％。
19、与现有技术相比，本专利技术具有如下的有益效果：
20、本专利技术通过除杂剂对土壤进行预处理去除金属离子等干扰因素，从而提高检测准确性。所述除杂剂包括硫酸钾、硫酸钠，在预处理过程中，硫酸钠和硫酸钾通过调节溶液的离子强度，提高纤维素酶的稳定性，并减少纤维素酶非特异性吸附，避免纤维素酶因吸附在土壤颗粒或杂质而使其与底物的接触受限；同时硫酸根离子还可以与干扰纤维素酶活性的金属离子发生沉淀，减少金属离子对检测结果的干扰。然后，本专利技术将预处理后的待测样品与1％羧甲基纤维素溶液、磷酸盐缓冲液及甲苯培养结束后加硫酸铝钾，有利于培养液过滤。
21、使用本专利技术的检测方法，可以准确检测出土壤中的纤维素酶活性，并且相比于现有方法在540nm测定，本专利技术在508nm测试纤维素酶活性，呈现出良好的线性关系，颜色的变化更加稳定和可靠。
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1.一种土壤中纤维素酶活性的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的土壤中纤维素酶活性的检测方法，其特征在于，在步骤S1中，所述预处理包括：
3.根据权利要求2所述的土壤中纤维素酶活性的检测方法，其特征在于，所述硫酸钾、硫酸钠的质量比为(1-5)：(3-7)。
4.根据权利要求3所述的土壤中纤维素酶活性的检测方法，其特征在于，所述硫酸钾、硫酸钠的质量比为3：5。
5.根据权利要求1所述的土壤中纤维素酶活性的检测方法，其特征在于，所述葡萄糖标准溶液浓度为0-1.2mg/mL。
6.根据权利要求1所述的土壤中纤维素酶活性的检测方法，其特征在于，在步骤S3中，所述培养时间为48-96h。
7.根据权利要求1所述的土壤中纤维素酶活性的检测方法，其特征在于，在步骤S3中，所述培养温度为35-40℃。
8.根据权利要求1所述的土壤中纤维素酶活性的检测方法，其特征在于，所述缓冲液为pH值5.5的0.2mol/L磷酸盐缓冲液缓冲溶液。
9.根据权利要求1所述的土壤中纤
...【技术特征摘要】
1.一种土壤中纤维素酶活性的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的土壤中纤维素酶活性的检测方法，其特征在于，在步骤s1中，所述预处理包括：
3.根据权利要求2所述的土壤中纤维素酶活性的检测方法，其特征在于，所述硫酸钾、硫酸钠的质量比为(1-5)：(3-7)。
4.根据权利要求3所述的土壤中纤维素酶活性的检测方法，其特征在于，所述硫酸钾、硫酸钠的质量比为3：5。
5.根据权利要求1所述的土壤中纤维素酶活性的检测方法，其特征在于，所述葡萄糖标准溶液浓...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱夕珍，李悦，
申请(专利权)人：广州宏诚检测有限公司，
类型：发明
国别省市：
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