【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开内容涉及用于使用短发夹rna激活在患有快乐木偶综合征(angelmansyndrome)的受试者中来自ube3a的父系遗传等位基因表达的组合物和方法。对序列表的引用将提交对应于本文描述的序列的序列表。
技术介绍
0、背景
1、快乐木偶综合征(as)是一种影响～1/15,000名个体的神经发育病症。患有as的个体有发育迟缓、严重的认知损害、共济失调步态、频繁癫痫发作(frequent seizures)、短注意时长(short attention span)、言语缺失(absent speech)和特征性快乐举止(characteristic happy demeanor)。从来自as患者的诱导多能干细胞(ipsc)衍生的神经元表现出去极化的静息膜电位、延迟的动作电位发展和自发突触活动减少。fink等人,2017,nat commun 8。as影响相对大的患者群体；已经建立了一个>3,000名患者的联系登记，并且每年有～250例新的as诊断。患有as的个体需要终身护理。
2、as由ube3a的母系拷贝功能丧失引起，ube3a是一种编码e3泛素连接酶的基因。这种功能丧失突变可以由母系等位基因中的任何类型的基因突变引起。ube3a排他地由神经元中的母系等位基因表达。所有患有as的个体都具有正常的父系ube3a等位基因，在神经元中该等位基因被一种称为ube3a反义转录物(ube3a-ats)的长非编码rna以顺式方式表观遗传沉默(rougeulle等人,1997,nat genet 17,14-15；
技术实现思路
0、概述
1、本文提供了通过抑制父系ube3a的沉默并允许父系ube3a从其天然调节元件表达，从而替代或增加缺失的母系ube3a来治疗快乐木偶综合征的新方法。神经元中ube3a表达的增加是通过干扰snord115和/或ube3a-ats的转录来实现的。由于天然调节元件控制表达，因此防止了ube3a的过表达。这种方法可以通过单次治疗改善as症状，并消除多次治疗的需要。
2、本文提供了一种多核苷酸序列，其包括：
3、(seq id no:3)。提供了包含seq id no:3的表达载体。在实施方案中，表达载体是腺相关病毒(aav)载体或慢病毒载体。提供了包含前述物质的药物组合物。
4、本文提供了编码shrna的多核苷酸，该shrna包含与由seq id no:19-360中的任一种编码的rna至少85％、至少90％、至少95％或100％互补的核苷酸序列。在实施方案中，多核苷酸是seq id no:3。在实施方案中，shrna导致父系ube3a的表达激活或增加。在实施方案中，shrna导致父系snord115和ube3a-ats的表达降低。提供了包含shrna的表达载体。在实施方案中，表达载体是腺相关病毒(aav)载体或慢病毒载体。提供了包含前述物质的药物组合物。
5、本文提供了一种治疗快乐木偶综合征的方法，其包括向有相应需要的患者施用seq idno:3的多核苷酸。在实施方案中，seq id no:3的多核苷酸编码导致父系snord115和ube3a-ats表达降低的shrna。在实施方案中，seq id no:3的多核苷酸编码导致父系ube3a基因的表达激活或增加的shrna。
6、本文提供了一种治疗快乐木偶综合征的方法，该方法包括向有相应需要的患者施用编码shrna的多核苷酸，该shrna包含与由seq id no:19-360中的任一种编码的rna至少85％、至少90％、至少95％或100％互补的核苷酸序列。在实施方案中，多核苷酸是seq idno:3。在实施方案中，shrna导致父系ube3a的表达激活或增加。在实施方案中，shrna导致父系snord115和ube3a-ats的表达降低。
7、在实施方案中，seq id no:3编码能够抑制父系ube3a的沉默的shrna。在实施方案中，seq id no:3包含在表达载体内。在实施方案中，表达载体是腺相关病毒(aav)载体或慢病毒载体。在实施方案中，提供了一种抑制由ube3a-ats(seq id no:1)和snord115(seq idno:2)编码的rna反义转录物对父系ube3a基因的沉默的方法，其包括向有相应需要的患者施用有效切割由seq id no:2编码的rna反义转录物的量的seq id no:3。
8、在实施方案中，提供了一种抑制由seq id no:1编码的rna反义转录物对父系ube3a基因的沉默的方法，其包括向有相应需要的患者施用有效切割由seq id no:2编码的rna反义转录物的量的shrna，所述shrna包含与由seq id no:19-360中的任一种编码的rna至少85％、至少90％、至少95％或100％互补的核苷酸序列。
9、在实施方案中，本文提供的shrna由seq id no:3的一部分编码，例如，具有粗体核苷酸，其在粗体核苷酸的任一端被缩短了一个、两个、三个或四个核苷酸。同样地，在实施方案中，本文提供的shrna可以含有seq id no:3的一部分，例如，具有斜体核苷酸，其在斜体核苷酸的任一端被缩短了一个、两个或三个核苷酸。在实施方案中，本文提供的shrna由包含seq id no:19-360中的任一种的多核苷酸编码，该多核苷酸在任意一端缩短了一个、两个、三个或四个核苷酸。
10、在实施方案中，提供如下多核苷酸序列：
11、(seq id no:361)，其中nnnnnnnn可以是ctcgag(seq id no:362)、tcaagag(seq id no:363)、ttcg(seq id no:364)或gaagcttg(seq id no:365)。
12、在实施方案中，提供了多核苷酸序列，其包括第一部分、第二部分和第三部分，第一部分包含seq id no:19-360中的任一种，第二部分包含seq id no:362、363、364或365中中的任一种，并且第三部分包含与seq id no:19-360中的核苷酸序列互补的相应核苷酸序列。
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1.一种多核苷酸序列，所述序列包含：
2.一种表达载体，所述表达载体包含根据权利要求1所述的多核苷酸序列。
3.根据权利要求2所述的表达载体，还包含启动子。
4.根据权利要求3所述的表达载体，其中所述启动子是神经元特异性启动子。
5.根据权利要求4所述的表达载体，其中神经元特异性启动子是神经元特异性烯醇化酶(NSE)、突触蛋白I(Syn)或Ca2+/CaM活化蛋白激酶IIα(CaMKIIα)。
6.根据权利要求3所述的表达载体，其中所述启动子是U6启动子或H1启动子。
7.根据权利要求2所述的表达载体，其中所述表达载体是腺相关病毒(AAV)载体或慢病毒载体。
8.根据权利要求7所述的表达载体，其中所述表达载体是AAV1、AAV2、AAV3、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9或AAV10。
9.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1所述的多核苷酸序列和药学上可接受的运载体。
10.根据权利要求9所述的药物组合物，其中所述多核苷酸序列包含在表达载体内。<...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种多核苷酸序列，所述序列包含：
2.一种表达载体，所述表达载体包含根据权利要求1所述的多核苷酸序列。
3.根据权利要求2所述的表达载体，还包含启动子。
4.根据权利要求3所述的表达载体，其中所述启动子是神经元特异性启动子。
5.根据权利要求4所述的表达载体，其中神经元特异性启动子是神经元特异性烯醇化酶(nse)、突触蛋白i(syn)或ca2+/cam活化蛋白激酶iiα(camkiiα)。
6.根据权利要求3所述的表达载体，其中所述启动子是u6启动子或h1启动子。
7.根据权利要求2所述的表达载体，其中所述表达载体是腺相关病毒(aav)载体或慢病毒载体。
8.根据权利要求7所述的表达载体，其中所述表达载体是aav1、aav2、aav3、aav5、aav6、aav7、aav8、aav9或aav10。
9.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1所述的多核苷酸序列和药学上可接受的运载体。
10.根据权利要求9所述的药物组合物，其中所述多核苷酸序列包含在表达载体内。
11.根据权利要求10所述的药物组合物，其中所述表达载体是aav载体或慢病毒载体。
12.一种多核苷酸，所述多核苷酸编码shrna，所述shrna包含与由seq id no:19-360中的任一种编码的rna至少85％、至少90％、至少95％或100％互补的核苷酸序列。
13.根据权利要求12所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸是seq id no:3。
14.根据权利要求12所述的多核苷酸，其中所述shrna导致父系ube3a的表达激活或增加。
15.根据权利要求12所述的多核苷酸，其中所述shrna导致父系ube3a-ats的表达降低。
16.根据权利要求12所述的多核苷酸，其中所述shrna导致父系snord115的表达降低。
17.一种表达载体，所述表达载体包含权利要求12所述的多核苷酸和启动子。
18.根据权利要求17所述的表达载体，其中所述启动子是神经元特异性启动子。
19.根据权利要求18所述的表达载体，其中神经元特异性启动子是神经元特异性烯醇化酶(nse)、突触蛋白i(syn)或ca2+/cam活化蛋白激酶iiα(camkiiα)。
20.根据权利要求17所述的表达载体，其中所述启动子是u6启动子或h1启动子。
21.根据权利要求17所述的表达载体，其中所述表达载体是腺相关病毒(aav)载体或慢病毒载体。
22.根据权利要求21所述的表达载体，其中所述表达载体是aav1、aav2、aav3、aav5、aav6、aav7、aav8、aav9或aav10。
23.根据权利要求17所述的表达载体，其中所述多核苷酸是dna多核苷酸。
24.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求12所述的多核苷酸序列和药学上可接受的运载体。
25.根据权利要求24所述的药物组合物，其中所述多核苷酸序列包含在表达载体内。
26.根据权利要求25所述的药物组合物，其中所述表达载体是aav载体或慢病毒载体。
27.一种治疗快乐木偶综合征的方法，所述方法包括向有相应需要的患者施用根据权利要求1所述的多核苷酸。
28.根据权利要求27所述的治疗快乐木偶综合征的方法，其中所述多核苷酸编码导致父系ube3a-ats的表达降低的shrna。
29.根据权利要求27所述的治疗快乐木偶综合征的方法，其中所述多核苷酸编码导致父系snord115的表达降低的shrna。
30.根据权利要求27所述的治疗快乐木偶综合征的方法，其中所述多核苷酸编码导致父系ube3a基因的表达激活或增加的shrna。
31.一种治疗快乐木偶综合征的方法，所述方法包括向有相应需要的患者施用根据权利要求12所述的多核苷酸。
32.根据权利要求31所述的治疗快乐木偶综合征的方法，其中所述多核苷酸编码导致父系ube3a-ats的表达降低的shrna。
33.根据权利要求31所述的治疗快乐木偶综合征的方法，其中所述多核苷酸编码导致父系snord115的表达降低的shrna。
34.根据权利要求31所述的治疗快乐木偶综合征的方法，其中所述多核苷酸编码导致父系ube3a基因的表达激活或增加的shrna。
...【专利技术属性】
技术研发人员：斯托米·张伯伦，诺艾儿·杰曼，彼得·佩里诺，
申请(专利权)人：康涅狄格大学，
类型：发明
国别省市：
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