【技术实现步骤摘要】
本公开涉及生物医药领域，具体而言，涉及一种编码肉毒毒素的分离核酸及其用途。
技术介绍
1、肉毒毒素（botulinum toxin，bx）是由细菌肉毒杆菌(clostridium botulinum)分泌的一种蛋白质，亦是一种神经毒素，可分为a、b、cα、cβ、d、e、f、g等8型，常见于腐败的肌肉中。其中肉毒毒素a是8 种血清型中毒性最强的毒素，肉毒毒素a的结构分为两部分：轻链(lc，50kd)和重链(hc，100kd)，轻链和重链间靠一对二硫键链接(c430-c454)，非酰胺键链接。轻链为活性结构域，具有锌依赖性金属内肽酶活性，是毒素的毒性部分；重链包含两个结构域，结合结构域和转位结构域。重链结构域的羧基末端与突触前膜上的多唾液酸神经节苷脂受体结合。
2、当肉毒毒素a多肽链被水解后作用即被激活，其中重链可结合神经细胞胞膜进入细胞，轻链可特异性水解破坏突触相关蛋白-25，进而导致含乙酰胆碱的突触小泡不能释放。
3、肉毒毒素a自发展以来，于1989年被美国fda 批准用于治疗斜视和眼睑痉挛，后于2000 年获批用于治疗颈部肌肉张力障碍，2002 年被批准用于治疗中到重度的眉间皱纹及眼部皱纹，随后陆续被批准用于腋窝多汗症、偏头痛，额纹等疾病的治疗。随着研究者对肉毒毒素a的进一步深入认识及不断尝试，许多非标签化应用也逐渐被报道，如镇痛、治疗膀胱过度活动症、用于吞咽困难等，这说明肉毒毒素a仍具有较大的作用价值值得去深入探索。
4、制备肉毒毒素a的方法包括利用人工培养肉毒梭菌生产天然肉毒毒素a和利用
技术实现思路
1、一方面，本公开提供一种编码肉毒毒素的核酸组合物，所述核酸组合物包含编码肉毒毒素的mrna。
2、另一方面，本公开提供上述编码肉毒毒素的核酸组合物在制备促伤口愈合药物中的用途。
3、另一方面，本公开提供上述编码肉毒毒素的核酸组合物在制备促角质形成细胞迁移药物中的用途。
4、另一方面，本公开提供编码肉毒毒素的分离核酸，所述分离核酸为链状dna分子、环状dna分子、mrna或环形rna中的至少一种。
5、在一些实施方式中，所述肉毒毒素选自肉毒毒素a、肉毒毒素b中至少一种。
6、在一些实施方式中，所述肉毒毒素为肉毒毒素a，所述肉毒毒素a的氨基酸序列如seq id no.7、seq id no.9、seq id no.11或seq id no.13所示。
7、在一些实施方式中，所述核酸组合物包含编码肉毒毒素a的mrna，所述肉毒毒素a的核苷酸序列如seq id no.8、seq id no.10、seq id no.12或seq id no.14所示。
8、在一些实施方式中，所述mrna包括5’utr、orf区域和3’utr。
9、在一些实施方式中，所述5’utr的核苷酸序列如seq id no.1~3所示；和/或，所述3’utr的核苷酸序列如seq id no.4~6所示。
10、在一些实施方式中，所述mrna还含有3’端poly（a），所述poly（a）长度为50~200，优选为80~200。
11、在一些实施例中，所述mrna分子中的一个或多个尿苷用修饰核苷进行置换。
12、在一些实施例中，所述修饰核苷为假尿苷(ψ)、n1-甲基-假尿苷(m1ψ)或5-甲基-尿苷(m5u)(m5u)。
13、在一些实施例中，所述修饰核苷为n1-甲基-假尿苷(m1ψ)。
14、在一些实施例中，所述分离核酸为dna，所述dna由前述的mrna逆转录获得，或，所述dna为能够转录出如前述的mrna的序列。
15、另一方面，本专利技术的涉及一种生物材料，所述生物材料包括表达盒、载体、工程菌或细胞系中的任意一种，所述生物材料含有或表达如前述的mrna或如前述的分离的dna。
16、本专利技术的优势在于：（1）用编码肉毒毒素的mrna方式给药，规避了肉毒毒素蛋白生产存在的工艺繁杂、制备流程长和纯度低等缺点，提高了生产效率；
17、（2）发现了新的作用机制，低浓度的编码肉毒毒素的mrna给药方式能促角质形成细胞迁移，来促进皮肤伤口愈合。
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1.一种编码肉毒毒素的核酸组合物，其特征在于，所述核酸组合物包含编码肉毒毒素的mRNA。
2.如权利要求1所述的核酸组合物在制备促伤口愈合药物中的用途。
3.如权利要求1所述的的核酸组合物在制备促表皮角质形成细胞迁移药物中的用途。
4.一种编码肉毒毒素的分离核酸，其特征在于，所述分离核酸为链状DNA分子、环状DNA分子、mRNA或环形RNA中的至少一种。
5.如权利要求1~3所述的核酸组合物，其特征在于，所述肉毒毒素选自肉毒毒素A、肉毒毒素B中至少一种。
6. 如权利要求5所述的核酸组合物，其特征在于，所述肉毒毒素为肉毒毒素A，所述肉毒毒素A的氨基酸序列如Seq ID NO.7、Seq ID NO.9、Seq ID NO.11或Seq ID NO.13所示；
7.如权利要求1所述的核酸组合物或如权利要求4所述的分离核酸，其特征在于，所述mRNA包括5’UTR、ORF区域、3’UTR和3’端poly（A）；
8.如权利要求1所述的核酸组合物或如权利要求4所述的分离核酸，其特征在于，所述mRNA分子中
9.如权利要求4所述的分离核酸，其特征在于，所述分离核酸为DNA，所述DNA由如权利要求1~3或如权利要求5~8所述的mRNA逆转录获得，或，所述DNA为能够转录出如权利要求1~3或如权利要求5~8的mRNA的序列。
10.一种生物材料，其特征在于，所述生物材料包括表达盒、载体、工程菌或细胞系中的任意一种，所述生物材料含有或表达如权利要求1~3或如权利要求5~8的mRNA或如权利要求4的分离核酸。
...【技术特征摘要】
1.一种编码肉毒毒素的核酸组合物，其特征在于，所述核酸组合物包含编码肉毒毒素的mrna。
2.如权利要求1所述的核酸组合物在制备促伤口愈合药物中的用途。
3.如权利要求1所述的的核酸组合物在制备促表皮角质形成细胞迁移药物中的用途。
4.一种编码肉毒毒素的分离核酸，其特征在于，所述分离核酸为链状dna分子、环状dna分子、mrna或环形rna中的至少一种。
5.如权利要求1~3所述的核酸组合物，其特征在于，所述肉毒毒素选自肉毒毒素a、肉毒毒素b中至少一种。
6. 如权利要求5所述的核酸组合物，其特征在于，所述肉毒毒素为肉毒毒素a，所述肉毒毒素a的氨基酸序列如seq id no.7、seq id no.9、seq id no.11或seq id no.13所示；<...
【专利技术属性】
技术研发人员：李璨，彭育才，翁嘉艺，
申请(专利权)人：珠海丽凡达生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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