【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医学，具体地，涉及一种治疗卵巢早衰的外泌体药物及其制备方法和应用。
技术介绍
1、卵巢早衰(pof)，也称为卵巢功能不全(poi)或过早绝经，其特征是卵巢功能丧失，表现为40岁之前卵巢功能停止和卵泡过早耗竭。pof的发病原因包括遗传因素、自生免疫疾病、不良生活方式等，不同的病因共同导致卵巢内卵泡池储备的减少及引起卵泡功能失调。家族性pof的发病率在不同的人群中报道分别为4％-31％，x染色体的异常被公认为是引起pof的主要病因。自生免疫疾病与pof的发病存在关联，有调查研究显示约有9％-40％的pof患者合并自身免疫性疾病，如sle、重症肌无力、类风湿性关节炎、自身免疫性甲状腺炎、甲状旁腺功能减退、特发性血小板减少性紫癜等。pof在30岁以下人群中发病率约1‰，40岁以下人群中发病率为1-3％。一般在经济发达地区发病率较高，发病率随社会发展水平提高呈上升趋势。pof引起育龄妇女不育造成很大的社会和家庭问题，此外，雌激素水平降低引起一系列低雌激素症状，如性欲低下、潮红、多汗、骨质疏松和泌尿系统疾病，降低了患者的生活质量。
2、外泌体是一类活细胞产生的细胞外囊泡，能介导细胞间通讯或细胞代谢产物的外排。大量有关天然外泌体的研究显示外泌体具有免疫调节、抑制炎症、促进组织修复等生理功能，其所发挥的功能可能与其内容物有关，也可能与其膜成分有关。不同种类细胞的外泌体具有不同的表面特征，赋予其对不同类型的细胞的嗜性。外泌体内容物主要包括蛋白、micro-rna、mrna等，近年来通过转录组学研究等多种手段发现，不同
3、脂质纳米颗粒(lnp)由阳离子脂质、磷脂、聚乙二醇(peg)-脂质和胆固醇4种不同成分组成，其空腔中可通过高流速微流控方式装载各类药物，包括小分子、多肽和核酸，其中含核酸的为水相、脂质混合物为有机相，每种脂质成分及其配比在lnp包封中都发挥着重要作用。带负电荷的核酸和带正电荷的脂质通过静电结合，并通过脂质组分之间的疏水作用和范德华作用组装形成lnp。lnp可以保护被装载的药物免受破坏性蛋白酶的影响，并协助mrna的胞内递送，延长药物在体内的留存时间。此外lnp还可支持重复给药和瞬时给药，弥补了目前基因递送药物载体的不足。
4、卵巢颗粒细胞是卵泡中起保护、滋养、支持作用的重要细胞，通过对卵母细胞营养、机械保护、e2和amh等激素的分泌在卵泡发育、卵母细胞成熟和排卵等过程中发挥至关重要的作用。pof患者通常出现卵泡数量下降、次级和成熟卵泡减少、闭锁卵泡增加、无法排卵等症状，组织学检测显示pof患者和动物模型组织中存在颗粒细胞数减少、颗粒细胞衰老及凋亡增加、分泌能力减弱等现象。因为，恢复颗粒细胞活性和功能是治疗pof的重要途径。
5、目前，针对pof没有很好的治疗手段，特别是对于提高卵子质量并恢复生育能力。常规的激素治疗只能暂时性改善低激素水平引起的相关症状。雌孕激素替代治疗(hrt)主要针对年轻的pof患者，hrt可缓解低雌激素症状及泌尿生殖道萎缩，并预防远期并发症(骨质疏松、老年性痴呆症等)。但长期hrt有导致子宫内膜癌和乳腺癌的发生。孕激素分天然孕激素及合成孕激素，微粒化孕酮可口服，常需较大剂量，价格昂贵。促排卵治疗要求hmg用量大、持续时间长，对长期及重度pof患者效果不佳。脱氢表雄甾酮(dhea)是合成睾酮、e2的重要物质，针对在卵巢储备尚正常但生育年龄较大的不孕症妇女的dhea可一定程度上降低流产率。除上述常规疗法外，免疫抑制治疗对自身免疫疾病相关的pof具有一定作用，目前尚无明确的用药规范，且免疫抑制可引起严重副作用，因为在自身免疫疾病类pof的治疗中受限。使用口服烟酰胺单核苷酸(nmn)治疗pof的啮齿类动物模型的研究中，需要长期高剂量口服摄入，且虽然在啮齿类动物模型中取得较好效果，但nmn作为补剂在人群中的功效目前受到广泛质疑，事实上即使是口服高剂量的nmn在抗衰方面的作用依然不显著，原因可能在于nmn在人体内转化为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nad)的效率过低。直接服用nad存在nad在体内半衰期过短、难以在目标组织中富集的问题。
技术实现思路
1、有鉴于此，为了克服上述现有技术中关于治疗pof的药物存在的技术问题，本专利技术的目的在于提供一种用于治疗pof的外泌体药物及其相关制备方法，该药物通过天然或工程化外泌体提高nad或mrna药物在体内的稳定性和其在卵巢组织中的分布。
2、本专利技术提供的上述治疗pof的药物的制备过程涉及外泌体的获取、lnp-mrna的制备、nad或lnp-mrna与外泌体的混合及电穿孔处理。本专利技术同时涉及以nad为治疗pof的靶点，相较于nmn，nad具有不依赖于体内酶促反应转化而直接发挥作用的优点，在卵巢组织中，通过促进sirt2依赖的纺锤体-动粒组装、parp依赖的dna修复、有氧呼吸等机制改善卵子、黄体、卵巢基质细胞、卵巢巨噬细胞的生理功能，从而长效地改善卵巢早衰等卵巢功能异常。在成药性上，该方法提到的药物制备方法可用来生产静脉回输制剂、原位注射制剂、口服制剂等不同药剂形式，具有良好的临床应用前景。
3、本专利技术的上述专利技术目的通过以下技术方案得以实现：
4、本专利技术的第一方面提供了一种治疗卵巢早衰的核酸组合物。
5、进一步，所述核酸组合物包括编码nampt、nmnat3和cox15的mrna、dna或重组蛋白。
6、在本专利技术中，所述基因nampt、nmnat3和cox15的信息如下：基因nampt(nicotinamide phosphoribosyltransferase[homo sapiens(human)])的gene id为10135，基因nmnat3(nicotinamide nucleotide adenylyltransferase 3[homo sapien(human)])的gene id为349565，基因cox15(cytochrome c oxidase assembly homologcox15[homo sapiens(human)])的gene id为1355，所述基因的详细信息可在https://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/获得。
7、在本专利技术的具体实施方案中，所述核酸组合物为包括编码nampt、nmnat3和cox15的mrna的核酸组合物。
8、本专利技术的第二方面提供了一种卵巢靶本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种治疗卵巢早衰的核酸组合物，其特征在于，所述核酸组合物包括编码NAMPT、NMNAT3和COX15的mRNA、DNA或重组蛋白。
2.一种卵巢靶向肽，其特征在于，所述卵巢靶向肽包括LH-Lamp2b融合蛋白或FSH-Lamp2b融合蛋白；
3.根据权利要求2所述的卵巢靶向肽，其特征在于，所述LH-Lamp2b融合蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；
4.一种特异性靶向卵巢细胞的外泌体，其特征在于，所述外泌体包含权利要求2或3所述的卵巢靶向肽。
5.根据权利要求4所述的外泌体，其特征在于，所述外泌体来源于间充质干细胞；
6.如下任一种产品：
7.根据权利要求6所述的产品，其特征在于，所述包封有权利要求1所述的核酸组合物的LNP或TNP中核酸组合物的浓度为10ng/μL；
8.如下任一种方法：
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述包封有权利要求1所述的核酸组合物的LNP或TNP采用如下方法制备得到：将NAMPT、NMNAT3和COX15的mRNA混合得到混合溶液N
10.如下任一方面应用：
...【技术特征摘要】
1.一种治疗卵巢早衰的核酸组合物，其特征在于，所述核酸组合物包括编码nampt、nmnat3和cox15的mrna、dna或重组蛋白。
2.一种卵巢靶向肽，其特征在于，所述卵巢靶向肽包括lh-lamp2b融合蛋白或fsh-lamp2b融合蛋白；
3.根据权利要求2所述的卵巢靶向肽，其特征在于，所述lh-lamp2b融合蛋白的核苷酸序列如seq id no:1所示；
4.一种特异性靶向卵巢细胞的外泌体，其特征在于，所述外泌体包含权利要求2或3所述的卵巢靶向肽。
5.根据权利要求4所述的外泌体，其特征在于，所述外泌体来源于间...
【专利技术属性】
技术研发人员：武佳燕，张恒，胡兰芳，李慧亮，于雅雯，吴理达，顾雨春，
申请(专利权)人：呈诺再生医学科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：
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