【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及病毒检测领域，尤其涉及一种可用于bsl-2下模拟人类马尔堡病毒病症状的替代病毒感染模型及其建立方法与应用。
技术介绍
1、马尔堡病毒病(marburg virus disease，mvd)是由马尔堡病毒(marburg virus，marv)引起的以发热和出血为特征的烈性传染病之一。自1967年暴发以来，马尔堡病毒病一直存在散发情况，主要在中非地区传播，死亡率高达90％，对人类构成重大威胁。国内外对marv的关注度明显提高，相应的marv疫苗与抗体的研究也在有序推进。目前，没有国际批准的mvd疫苗或治疗方案。
2、研究marv的难点和挑战在于，其被归类为生物安全4级(bsl-4)病原体，需要在bsl-4实验室进行研究，这需要严格的实验条件和大量资金。因此，迫切需要可操作且实用的动物模型来推进marv的预防和治疗策略。
3、水泡性口炎病毒(vesicular stomatitis virus，vsv)反向遗传技术已广泛应用于重组病毒，其安全性高，且易于在病毒表面包装外源糖蛋白，vsv重组病毒可替代原真病毒进行中和抗体检测。
4、本研究旨在基于vsv反向遗传平台构建一种能在生物安全二级(bsl-2)实验室用于评价marv疫苗与抗体的替代动物模型。
技术实现思路
1、本专利技术目的之一是提供一种可用于bsl-2下模拟人类马尔堡病毒病症状的替代病毒感染模型的建立方法，其中，所述替代病毒为重组vsv病毒，所述重组vsv病毒是将vsv的g基因替
2、进一步地，所述vsv重组病毒的构建方法如下：将携带egfp标签的vsv感染性克隆全长质粒中的g基因替换成marv的gp基因，得到marv重组vsv全长质粒；将marv重组vsv全长质粒分别与4个vsv辅助质粒共转染bsr细胞，拯救得到携带egfp标签的marv gp vsv，即vsv-marv/gp。
3、进一步地，所述的马尔堡病毒选用angola毒株。
4、本专利技术目的之二是提供利用上述方法建立的可用于bsl-2下模拟人类马尔堡病毒病症状的替代病毒感染模型。
5、本专利技术目的之三是提供上述可用于bsl-2下模拟人类马尔堡病毒病症状的替代病毒感染模型在作为评价marv抗体或marv疫苗效果的动物模型中的应用。
6、进一步地，应用环境为生物安全二级实验室。
7、与现有技术相比，本专利技术的技术效果：
8、本专利技术首先构建了表达马尔堡病毒糖蛋白(gp)的重组水泡性口炎病毒(vsv-marv/gp)，并将其作为替代病毒导致叙利亚仓鼠致死感染。感染vsv-marv/gp后，5周龄的雌性叙利亚仓鼠表现出体重减轻、多器官衰竭和高病毒载量等症状，发展为类似于人类marv患者观察到的严重全身性疾病，所有动物在感染后两到三天内死亡。通过实验，本专利技术还发现vsv-marv/gp的致病性具有物种特异性、年龄相关性、性别相关性和攻击途径依赖性。最后，mr191单克隆抗体的治疗效果在该模型中得到验证。综上所述，本专利技术提供的模拟人类马尔堡病毒病症状的替代病毒感染模型，可作为在bsl-2条件下对marv的医疗对策进行快速临床前评估的有效工具，避免生物安全四级(bsl-4)实验室进行实验所需苛刻实验条件且需要高额经费的弊端，从而推动marv疫苗和marv抗体的开发。
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1.一种可用于BSL-2下模拟人类马尔堡病毒病症状的替代病毒感染模型的建立方法，其特征在于，所述替代病毒为重组VSV病毒，所述重组VSV病毒是将VSV的G基因替换成马尔堡病毒(MARV)的糖蛋白GP基因的重组水泡性口炎病毒，简称VSV-MARV/GP；所述感染模型的感染动物为5周龄的雌性叙利亚仓鼠，感染剂量为107TCID50，感染途径为腹膜内感染。
2.如权利要求1所述的可用于BSL-2下模拟人类马尔堡病毒病症状的替代病毒感染模型的建立方法，其特征在于，所述VSV重组病毒的构建方法如下：将携带eGFP标签的VSV感染性克隆全长质粒中的G基因替换成MARV的GP基因，得到MARV重组VSV全长质粒；将MARV重组VSV全长质粒分别与4个VSV辅助质粒共转染BSR细胞，拯救得到携带eGFP标签的MARV GPVSV，即VSV-MARV/GP。
3.如权利要求1所述的可用于BSL-2下模拟人类马尔堡病毒病症状的替代病毒感染模型的建立方法，其特征在于，所述的马尔堡病毒选用Angola毒株。
4.一种可用于BSL-2下模拟人类马尔堡病毒病症状的替代病毒
5.如权利要求4所述的可用于BSL-2下模拟人类马尔堡病毒病症状的替代病毒感染模型在作为评价MARV抗体或MARV疫苗效果的动物模型中的应用。
6.如权利要求4所述的应用，其特征在于，应用环境为生物安全二级实验室。
...【技术特征摘要】
1.一种可用于bsl-2下模拟人类马尔堡病毒病症状的替代病毒感染模型的建立方法，其特征在于，所述替代病毒为重组vsv病毒，所述重组vsv病毒是将vsv的g基因替换成马尔堡病毒(marv)的糖蛋白gp基因的重组水泡性口炎病毒，简称vsv-marv/gp；所述感染模型的感染动物为5周龄的雌性叙利亚仓鼠，感染剂量为107tcid50，感染途径为腹膜内感染。
2.如权利要求1所述的可用于bsl-2下模拟人类马尔堡病毒病症状的替代病毒感染模型的建立方法，其特征在于，所述vsv重组病毒的构建方法如下：将携带egfp标签的vsv感染性克隆全长质粒中的g基因替换成marv的gp基因，得到marv重组vsv全长质粒；将marv重组vsv全长质粒分别...
【专利技术属性】
技术研发人员：闫飞虎，杨宛莹，周兀婕，赵永坤，冯娜，王铁成，梁博，夏咸柱，
申请(专利权)人：军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所，
类型：发明
国别省市：
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