【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因工程领域，具体涉及一种rsad1基因为靶点在筛选抑制小核糖核酸病毒科病毒感染药物中的应用。
技术介绍
1、塞内卡病毒(senecavirus a，sva)是单股正链rna病毒，是小rna病毒科塞内卡病毒属的唯一成员，小rna病毒科其它成员包括肠道病毒属、鼻病毒属、心病毒属以及口疮病毒属的病毒。塞内卡病毒对猪的致病性极强，可以感染不同年龄阶段的猪，成年猪感染后在口、鼻和蹄冠发生水疱样溃烂，新生仔猪感染后发生急性死亡。该病毒自2015年传入我国广东省后发生流行，随后在多个省份的猪场发生sva疫情，给我国生猪养殖业造成了严重的经济损失。
2、crispr-cas9系统由成簇的规律间隔的短回文重复序列crispr基因序列与cas家族蛋白组成，是第三代基因编辑技术，几乎可以靶向任何基因，操作简便，敲除效率高，被广泛用于基因编辑，尤其是基因敲除细胞系的构建。
3、含有自由基s-腺苷甲硫氨酸(radical s-adenosyl-methionine(sam))结构域的蛋白通过裂解sam结构域中的s-c(5’)键产生5’-脱氧腺苷自由基，催化一系列复杂的氧化还原反应，发挥氧化还原酶活性。文献报道含自由基s-腺苷甲硫氨酸结构域蛋白2(radicals-adenosyl-methionine domain-containing protein 2，rsad2)具有氧化还原酶活性，能够抑制寨卡病毒、流感病毒、丙肝病毒等多种病毒的复制。
4、本专利技术意外发现，抑制宿主细胞中rsad1基因的表达能
技术实现思路
1、针对上述技术问题，本专利技术意外发现，抑制宿主细胞中rsad1基因的表达能够显著抑制sva的复制，即，所述rsad1基因能够作为筛选和研发抗sva的药物靶点，用于抗sva药物的筛选；在宿主细胞中过表达rsad1蛋白能够显著促进塞内卡病毒的复制，可作为塞内卡病毒或疫苗的生产细胞系，用于塞内卡病毒或疫苗的生产。具体包括以下内容：
2、第一方面，本专利技术提供了rsad1基因/蛋白作为靶点在筛选用于预防或治疗病毒感染药物中的应用，所述药物以rsad1为靶点，抑制rsad1基因/蛋白的表达。
3、优选地，所述病毒为小核糖核酸病毒科病毒。
4、优选地，所述小核糖核酸病毒科病毒为塞内卡病毒。
5、第二方面，本专利技术提供了rsad1基因/蛋白表达抑制剂在制备预防或治疗病毒感染药物中的应用。
6、优选地，所述病毒为小核糖核酸病毒科病毒。
7、优选地，所述小核糖核酸病毒科病毒为塞内卡病毒。
8、优选地，所述rsad1基因/蛋白表达抑制剂包括以rsad1基因/蛋白为靶点设计的小干扰rna或靶向敲除rsad1基因/蛋白的sgrna。
9、优选地，所述靶向敲除rsad1基因/蛋白的sgrna由递送载体递送。
10、优选地，所述靶向敲除rsad1基因/蛋白的sgrna的靶向序列为：tctagccagcccccgtactg。
11、优选地，所述sgrna由sgrna-f和sgrna-r退火形成的双链片段：
12、sgrna-f：5’-caccgtctagccagcccccgtactg-3’；
13、sgrna-r：5’-aaaccagtacgggggctggctagac-3’。
14、第三方面，本专利技术提供了rsad1基因/蛋白作为靶点在筛选病毒或疫苗生产增效剂中的应用，所述药物以rsad1为靶点，促进rsad1基因/蛋白的表达。
15、优选地，所述病毒为小核糖核酸病毒科病毒。
16、优选地，所述小核糖核酸病毒科病毒为塞内卡病毒。
17、第四方面，本专利技术提供了rsad1蛋白或其表达促进剂在制备病毒或疫苗生产增效剂中的应用。
18、优选地，所述病毒为小核糖核酸病毒科病毒。
19、优选地，所述小核糖核酸病毒科病毒为塞内卡病毒。
20、第五方面，本专利技术提供了rsad1蛋白过表达细胞系在制备病毒或疫苗生产细胞系中的应用。
21、优选地，所述病毒为小核糖核酸病毒科病毒。
22、优选地，所述小核糖核酸病毒科病毒为塞内卡病毒。
23、本专利技术的有益效果是：①本专利技术首先发现，抑制宿主细胞中rsad1基因的表达能够抑制小rna病毒科病毒sva的复制；②本专利技术提供了一种靶向rsad1基因的sgrna，所述sgrna能够靶向rsad1基因，结合crispr-cas9技术可实现宿主细胞中rsad1基因的高效率敲除；③本专利技术提供了一种通过crispr-cas9技术将所述sgrna递送到宿主细胞，构建rsad1基因敲除细胞系的方法；④依据本专利技术所述方法获得的单克隆细胞系能够显著抑制小rna病毒科病毒sva的复制，可作为治疗小rna病毒科病毒的药物筛选靶点，为进一步研究rsad1基因在细胞内调控小rna病毒科病毒复制的分子机制提供研究工具和材料；⑤本专利技术发现，在宿主细胞中过表达rsad1蛋白能够显著促进塞内卡病毒的复制，可作为塞内卡病毒或疫苗的生产细胞系，用于塞内卡病毒或疫苗的生产。
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1.RSAD1基因/蛋白作为靶点在筛选用于预防或治疗小核糖核酸病毒科病毒感染药物中的应用，所述药物以RSAD1为靶点，抑制RSAD1基因/蛋白的表达。
2.RSAD1基因/蛋白表达抑制剂在制备预防或治疗小核糖核酸病毒科病毒感染药物中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述RSAD1基因/蛋白表达抑制剂包括以RSAD1基因/蛋白为靶点设计的小干扰RNA，或靶向敲除RSAD1基因/蛋白的sgRNA。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述靶向敲除RSAD1基因/蛋白的sgRNA的靶向序列为：TCTAGCCAGCCCCCGTACTG。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述sgRNA由sgRNA-F和sgRNA-R退火形成的双链片段：
6.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述小核糖核酸病毒科病毒为塞内卡病毒。
7.RSAD1基因/蛋白作为靶点在筛选小核糖核酸病毒科病毒或疫苗生产增效剂中的应用，所述药物以RSAD1为靶点，促进RSAD1基因/蛋白的表达。
8.RSAD1蛋
9.RSAD1蛋白过表达细胞系在制备小核糖核酸病毒科病毒或疫苗生产细胞系中的应用。
10.如权利要求7-9任一所述的应用，其特征在于，所述小核糖核酸病毒科病毒为塞内卡病毒。
...【技术特征摘要】
1.rsad1基因/蛋白作为靶点在筛选用于预防或治疗小核糖核酸病毒科病毒感染药物中的应用，所述药物以rsad1为靶点，抑制rsad1基因/蛋白的表达。
2.rsad1基因/蛋白表达抑制剂在制备预防或治疗小核糖核酸病毒科病毒感染药物中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述rsad1基因/蛋白表达抑制剂包括以rsad1基因/蛋白为靶点设计的小干扰rna，或靶向敲除rsad1基因/蛋白的sgrna。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述靶向敲除rsad1基因/蛋白的sgrna的靶向序列为：tctagccagcccccgtactg。
5.如权利要求4所述的应用...
【专利技术属性】
技术研发人员：郑海学，李伟伟，范许许，朱兆宇，张伟，杨洋，朱紫祥，曹雪静，裴丹诗，王一卓，张继燕，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：
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