【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物分析检测，特别是涉及一种液相色谱-串联质谱检测鸡血浆和肺组织中新型截短侧耳素的方法。
技术介绍
1、鸡毒支原体是造成禽类养殖经济损失最显著的病原微生物之一。鸡毒支原体是全球范围内家禽领域的一个严重问题，它会导致肉鸡、蛋鸡、种群鸡出现慢性呼吸道疾病，并导致火鸡出现感染性鼻窦炎。它还会降低产蛋量，影响家禽养殖业的经济效益。最严重的，鸡毒支原体感染会加剧病毒感染和继发性细菌并发症，并且会降低禽病毒疫苗的作用。
2、截短侧耳素类抗菌药抗菌谱广，具有独特的抗菌机制，与大多数抗菌药不产生交叉耐药，对革兰氏阳性菌、支原体等有良好的抗菌效果。目前成功上市的泰妙菌素和沃尼妙林主要作为饲料添加剂，用于防治猪禽的支原体及革兰氏阳性菌感染。人用批准的瑞他莫林和来法莫林主要用于治疗球菌感染和获得性细菌性肺炎。以截短侧耳素为先导化合物，有望开发出可用于治疗鸡毒支原体感染的兽用抗菌药。但是目前检测截短侧耳素的方法存在精密度和准确性不高，工作效率低等问题，因此，亟需开发一种新的截短侧耳素的检测方法，以为更多种截短侧耳素的检测提供新方法，为治疗鸡毒支原体感染提供更多兽用抗菌药的原料来源。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种液相色谱-串联质谱检测鸡血浆和肺组织中新型截短侧耳素的方法，以解决上述现有技术存在的问题，该方法操作简便快捷、重现性好、灵敏度高、分析速度快，可快速高效检测鸡血浆和肺组织中新型截短侧耳素浓度，可用于药物代谢动力学研究，为新型截短侧耳素临床前及临床研究提供方法
2、为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
3、本专利技术提供一种液相色谱-串联质谱检测鸡血浆和肺组织中新型截短侧耳素的方法，包括以下步骤：
4、对待测鸡的血浆样品或肺组织样品进行前处理，然后采用液相色谱-串联质谱检测鸡血浆或肺组织样品中新型截短侧耳素。
5、优选的是，鸡的血浆样品的前处理包括以下步骤：将待测鸡血浆样品室温解冻后，再与乙腈充分混合均匀，离心，取上清液，再用滤膜过滤。
6、优选的是，所述鸡的血浆样品与所述乙腈的体积比为1：3。
7、优选的是，鸡的肺组织样品的前处理包括以下步骤：
8、将鸡的肺组织样品进行匀浆后，加入乙腈和无水硫酸钠提取，经涡旋(5min)、超声、离心，取上层清液，再加入乙腈重复提取，合并上层清液，得到乙腈提取液；
9、将所述乙腈提取液与水混匀，加入hlb固相萃取柱中进行洗脱净化处理，收集洗脱液；将所述洗脱液吹干，之后采用乙腈-水溶液复溶，涡旋、超声，再加入正己烷除脂，涡旋，取下层液体，再用滤膜过滤。
10、优选的是，所述鸡的肺组织样品、乙腈和无水硫酸钠的配比为(0.5-1)g：4ml：(0.5-1)g。
11、优选的是，所述乙腈提取液和水的体积比为(1-2)：6。
12、优选的是，所述洗脱净化处理的步骤包括：将所述乙腈提取液与水混匀后的溶液过柱，之后用水淋洗，抽干，再用乙腈洗脱目标物，收集洗脱液，其中所述溶液、水和乙腈的体积比为(7-8)：(3-4)：(5-7)。
13、优选的是，所述目标物即为新型截短侧耳素p14-1，化学结构式如下所示：
14、
15、优选的是，所述液相色谱-串联质谱检测中液相色谱条件包括：色谱柱为hypersilgold色谱柱，填料为c18，粒径为5μm，规格为150mm×2.1mm；流动相a为5mm乙酸铵水溶液，流动相b为乙腈，采用梯度洗脱方式进行洗脱，梯度洗脱程序为：0.0～0.5min，流动相b体积分数由15％变化至95％；0.5～3.0min，流动相b体积分数为95％；3.0～3.5min，流动相b体积分数由95％变化至15％；3.5～9.0min，流动相b体积分数为15％；流速：0.25ml/min；柱温：40℃；进样量：5μl。
16、优选的是，所述液相色谱-串联质谱检测中质谱条件包括：离子化方式：电喷雾电离，三重四极杆串联质谱；扫描方式：esi+；检测模式：多反应监测模式；气帘气流速：35l/min，雾化气流速：60l/min，辅助雾化气流速：55l/min；离子源温度：540℃；喷雾电压：4500v；定量离子对：605.4/303.2；驻留时间：200ms；去簇电压：140v；碰撞能量：23ev。
17、本专利技术公开了以下技术效果：
18、本专利技术提供的方法通过对鸡血浆或肺组织样品进行前处理后，再采用液相色谱-串联质谱检测样品中的新型截短侧耳素p14-1的浓度，可以缩短组织样品的提取时间，减少有机试剂的用量，并且采用该方法检测鸡血浆或肺组织样品中的新型截短侧耳素p14-1，精密度好、准确度高，基质效应、回收率、稀释线性等指标满足生物样品定量分析的要求，能够支持新型截短侧耳素p14-1的临床前及临床药代动力学研究。
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1.一种液相色谱-串联质谱检测鸡血浆和肺组织中新型截短侧耳素的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，鸡的血浆样品的前处理包括以下步骤：将待测鸡血浆样品室温解冻后，再与乙腈充分混合均匀，离心，取上清液，再用滤膜过滤。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述鸡的血浆样品与所述乙腈的体积比为1：3。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，鸡的肺组织样品的前处理包括以下步骤：
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述鸡的肺组织样品、乙腈和无水硫酸钠的配比为(0.5-1)g：4mL：(0.5-1)g。
6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述乙腈提取液和水的体积比为(1-2)：6。
7.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述洗脱净化处理的步骤包括：将所述乙腈提取液与水混匀后的溶液过柱，之后用水淋洗，抽干，再用乙腈洗脱目标物，收集洗脱液，其中所述溶液、水和乙腈的体积比为(7-8)：(3-4)：(5-7)。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述目标物
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述液相色谱-串联质谱检测中液相色谱条件包括：色谱柱为Hypersil GOLD色谱柱，填料为C18，粒径为5μm，规格为150mm×2.1mm；流动相A为5mM乙酸铵水溶液，流动相B为乙腈，采用梯度洗脱方式进行洗脱，梯度洗脱程序为：0.0～0.5min，流动相B体积分数由15％变化至95％；0.5～3.0min，流动相B体积分数为95％；3.0～3.5min，流动相B体积分数由95％变化至15％；3.5～9.0min，流动相B体积分数为15％；流速：0.25mL/min；柱温：40℃；进样量：5μL。
10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述液相色谱-串联质谱检测中质谱条件包括：离子化方式：电喷雾电离，三重四极杆串联质谱；扫描方式：ESI+；检测模式：多反应监测模式；气帘气流速：35L/min，雾化气流速：60L/min，辅助雾化气流速：55L/min；离子源温度：540℃；喷雾电压：4500V；定量离子对：605.4/303.2；驻留时间：200ms；去簇电压：140V；碰撞能量：23eV。
...【技术特征摘要】
1.一种液相色谱-串联质谱检测鸡血浆和肺组织中新型截短侧耳素的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，鸡的血浆样品的前处理包括以下步骤：将待测鸡血浆样品室温解冻后，再与乙腈充分混合均匀，离心，取上清液，再用滤膜过滤。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述鸡的血浆样品与所述乙腈的体积比为1：3。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，鸡的肺组织样品的前处理包括以下步骤：
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述鸡的肺组织样品、乙腈和无水硫酸钠的配比为(0.5-1)g：4ml：(0.5-1)g。
6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述乙腈提取液和水的体积比为(1-2)：6。
7.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述洗脱净化处理的步骤包括：将所述乙腈提取液与水混匀后的溶液过柱，之后用水淋洗，抽干，再用乙腈洗脱目标物，收集洗脱液，其中所述溶液、水和乙腈的体积比为(7-8)：(3-4)：(5-7)。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述目标物即为新型截短侧耳素...
【专利技术属性】
技术研发人员：郝海红，邹紫莹，邢梦然，安永福，张玉倩，黄安雄，阮紫涵，邹紫云，王涵宇，孙靖，刘海燕，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：
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