【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫及药物制剂，具体涉及一种具有免疫协同增效作用的纳米颗粒免疫佐剂及其制备方法。
技术介绍
1、目前，只有少数佐剂被用于人类疫苗，包括铝盐佐剂、mf59、as01和as03等。传统的免疫佐剂如铝盐佐剂和油乳佐剂已经被广泛使用。但是铝盐佐剂存在一定的安全性问题，不能增强细胞介导的th1或细胞毒性t淋巴细胞免疫反应，也不适用于粘膜免疫系统。油乳佐剂则存在局部注射部位炎症反应的问题，副作用较大。此外，为了应对传染病和肿瘤等疾病给人畜带来的威胁，新型疫苗不断被开发出来，仍然需要研制更安全有效的免疫佐剂来诱导免疫反应。
2、通过联合佐剂(通常是免疫刺激剂和递送载体的组合)的方式往往可以对疫苗抗原产生更好的免疫反应和疫苗效力。目前，联合佐剂的使用已经越来越重要，通过诱导机体对疫苗的免疫反应的互补作用或协同增强作用，可以开发出除了传统佐剂以外的新型疫苗佐剂。
3、纳米颗粒由于尺寸和结构与病原体相似，能够很容易地被免疫细胞识别，作为递送载体，可以提高抗原的稳定性，靶向递送抗原并缓慢释放抗原；作为免疫刺激剂，还能激活某些免疫途径，增强免疫系统的应答。纳米颗粒常用的制备方法有乳化-溶剂挥发法、盐析法、透析法、膜乳化法、喷雾干燥法和纳米沉淀法等。其中纳米沉淀法具有制备方法简单，成本低廉的优点。通常，纳米颗粒的尺寸及药物包封效率会受到溶剂、聚合物浓度、表面活性剂、药物和聚合物用量比等因素的影响。
4、聚乳酸-羟基乙酸共聚物(plga)是由乳酸(la)和羟基乙酸(ga)开环共聚而成的高分子材料。目前已经在
5、α-生育酚是维生素e中最具生物活性的物质，具有一定的免疫增强特性，已经在乳液疫苗佐剂领域得到了广泛应用。由于α-生育酚具有高度亲脂性，在水中的溶解度很低，α-生育酚作为免疫刺激剂的开发局限于油乳佐剂中，关于α-生育酚的负载和缓释，以及纳米颗粒免疫佐剂的构建还鲜有报道。
6、因此，本专利技术公开了一种具有免疫协同增效作用的纳米颗粒免疫佐剂及其制备方法，是首次利用高分子聚合物plga作为载体材料，并使免疫增强剂α-生育酚负载于plga纳米颗粒上，实现了高包封率负载α-生育酚的plga纳米颗粒的可控制备。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种具有免疫协同增效作用的纳米颗粒免疫佐剂及其制备方法，针对新型疫苗纳米佐剂开发的需求，提出以plga作为载体，以α-生育酚作为免疫刺激剂，开发一种负载α-生育酚的plga纳米粒子，以协同持续缓释的α-生育酚和plga纳米粒子的免疫调节作用，从而作为一种稳定性好的具有持续免疫增效作用的新型纳米颗粒免疫佐剂。
2、本专利技术的目的通过以下技术方案来实现：
3、一种具有免疫协同增效作用的纳米颗粒免疫佐剂及其制备方法，所述具有免疫协同增效作用的纳米颗粒免疫佐剂，该纳米颗粒由球形主体的高分子聚合物和结构内负载的免疫增强剂构成。
4、优选地，以聚合物载药纳米颗粒的总质量百分比来计算，所述球形主体的高分子聚合物的质量百分比为70％～99％，所述结构内负载的免疫增强剂α-生育酚的质量百分比为1％～30％。
5、优选地，所述高分子聚合物为聚乳酸-羟基乙酸共聚物(plga)，所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物(plga)中乳酸(la)和羟基乙酸(ga)的单体摩尔比为90：10～10：90。
6、进一步优选地，所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物(plga)中乳酸(la)和羟基乙酸(ga)的单体摩尔比为50：50。
7、所述具有免疫协同增效作用的纳米颗粒免疫佐剂的制备方法，所述方法利用纳米沉淀原理，通过调节plga浓度、α-生育酚浓度和制备条件的方法，具体包括如下步骤：
8、(1)取表面活性剂溶于去离子水中，所得溶液作为水相w；
9、(2)取聚乳酸-羟基乙酸共聚物(plga)和α-生育酚溶于易挥发有机溶剂中，所得溶液作为有机相o；
10、(3)使w相在搅拌状态下时向其中加入o相，所得溶液作为载药纳米颗粒悬液；
11、(4)将步骤(3)得到的载药纳米颗粒悬液进行反复离心洗涤，浓缩得到免疫协同增效作用的纳米颗粒悬液，低温保存。
12、优选地，步骤(1)中，所述表面活性剂的浓度为0.1mg/ml～4mg/ml，所述表面活性剂选自泊洛沙姆188、聚乙烯醇(pva)、十二烷基磺酸钠(sds)、吐温(tween)中的一种，但不限于以上几种。
13、优选地，步骤(2)中，所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物(plga)的浓度为1mg/ml～25mg/ml，所述α-生育酚的浓度为0.1mg/ml～10mg/ml，所述易挥发有机溶剂选自丙酮、甲醇、乙腈、甲苯、乙酸乙酯中的一种，但不限于以上几种。
14、优选地，步骤(3)中，所述载药纳米颗粒的粒径、分散性以及包封率由调控o相和w相的体积比或者o相滴加速度和搅拌条件来控制，所述o相与w相的体积比为1：2～1：50，所述o相滴加速度为0.5ml/min～3ml/min，搅拌转速为100～1000rpm，搅拌时间为2min～30min。
15、优选地，步骤(4)中，离心转速为8000r/min～20000r/min，离心时间为10min～30min。
16、优选地，所述具有免疫协同增效作用的纳米颗粒免疫佐剂在疫苗佐剂领域的应用。
17、工作机理：
18、本专利技术采用纳米沉淀法，由可降解聚合物plga作为载体材料，负载免疫增强剂α-生育酚，通过调节plga和α-生育酚浓度、表面活性剂用量、有机相和水相的体积比和搅拌条件完成制备，制备所述载药纳米颗粒佐剂的原料包括plga和α-生育酚。
19、由于上述技术方案运用，本专利技术与现有技术相比具有如下有益效果：
20、1、本专利技术利用纳米沉淀原理，通过调节plga浓度、α-生育酚浓度和制备条件的方法，使制备得到的负载α-生育酚的plga纳米粒子粒径可控并具有良好的单分散系数(pdi<0.2)，工艺简单，重复性好，有利于负载α-生育酚的plga纳米颗粒免疫佐剂的生产，负载α-生育酚的plga纳米粒子平均粒径为90～120nm，pdi小于0.2，zeta电位约为-13mv，包封率可达80％以上，载药量为1％～30％，产品均一稳定，具有药物缓释效果；
21、2、本专利技术制备方法操作简单，制备的负载α-生育酚的plga纳米粒子具有优良的综合性能，体外细胞实验表明可以促进小鼠raw264.7巨噬细胞的增殖，还能促进raw264.7细胞促炎性细胞因子il-6的分泌，增强raw264.7细胞表面分子cd80的表达，具有免疫增效作用，比没有负载的plga纳米颗粒和直接使本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种具有免疫协同增效作用的纳米颗粒免疫佐剂，其特征在于，该纳米颗粒由球形主体的高分子聚合物和结构内负载的免疫增强剂构成。
2.根据权利要求1所述的一种具有免疫协同增效作用的纳米颗粒免疫佐剂，其特征在于，以聚合物载药纳米颗粒的总质量百分比来计算，所述球形主体的高分子聚合物的质量百分比为70％～99％，所述结构内负载的免疫增强剂α-生育酚的质量百分比为1％～30％。
3.根据权利要求1所述的一种具有免疫协同增效作用的纳米颗粒免疫佐剂，其特征在于，所述高分子聚合物为聚乳酸-羟基乙酸共聚物，所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物中乳酸和羟基乙酸的单体摩尔比为90：10～10：90。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的具有免疫协同增效作用的纳米颗粒免疫佐剂的制备方法，其特征在于，具体包括如下步骤：
5.根据权利要求4所述的一种具有免疫协同增效作用的纳米颗粒免疫佐剂的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述表面活性剂的浓度为0.1mg/mL～4mg/mL，所述表面活性剂选自泊洛沙姆188、聚乙烯醇(PVA)、十二烷基磺酸钠(SDS)、吐温(Tween
6.根据权利要求4所述的一种具有免疫协同增效作用的纳米颗粒免疫佐剂的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物的浓度为1mg/mL～25mg/mL，所述α-生育酚的浓度为0.1mg/mL～10mg/mL，所述易挥发有机溶剂选自丙酮、甲醇、乙腈、甲苯、乙酸乙酯中的一种，但不限于以上几种。
7.根据权利要求4所述的一种具有免疫协同增效作用的纳米颗粒免疫佐剂的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述载药纳米颗粒的粒径、分散性以及包封率由调控O相和W相的体积比或者O相滴加速度和搅拌条件来控制，所述O相与W相的体积比为1：2～1：50，所述O相滴加速度为0.5mL/min～3mL/min，搅拌转速为100～1000rpm，搅拌时间为2min～30min。
8.根据权利要求4所述的一种具有免疫协同增效作用的纳米颗粒免疫佐剂的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，离心转速为8000r/min～20000r/min，离心时间为10min～30min。
9.根据权利要求1-3任意一项所述的具有免疫协同增效作用的纳米颗粒免疫佐剂以及权利要求4-9任意一项所述的具有免疫协同增效作用的纳米颗粒免疫佐剂的制备方法所制备的具有免疫协同增效作用的纳米颗粒免疫佐剂在疫苗佐剂领域的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种具有免疫协同增效作用的纳米颗粒免疫佐剂，其特征在于，该纳米颗粒由球形主体的高分子聚合物和结构内负载的免疫增强剂构成。
2.根据权利要求1所述的一种具有免疫协同增效作用的纳米颗粒免疫佐剂，其特征在于，以聚合物载药纳米颗粒的总质量百分比来计算，所述球形主体的高分子聚合物的质量百分比为70％～99％，所述结构内负载的免疫增强剂α-生育酚的质量百分比为1％～30％。
3.根据权利要求1所述的一种具有免疫协同增效作用的纳米颗粒免疫佐剂，其特征在于，所述高分子聚合物为聚乳酸-羟基乙酸共聚物，所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物中乳酸和羟基乙酸的单体摩尔比为90：10～10：90。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的具有免疫协同增效作用的纳米颗粒免疫佐剂的制备方法，其特征在于，具体包括如下步骤：
5.根据权利要求4所述的一种具有免疫协同增效作用的纳米颗粒免疫佐剂的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述表面活性剂的浓度为0.1mg/ml～4mg/ml，所述表面活性剂选自泊洛沙姆188、聚乙烯醇(pva)、十二烷基磺酸钠(sds)、吐温(tween)中的一种，但不限于以上几种。
6.根据权利要求4所述的一种具有免疫协同增效...
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