【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开内容的实施方案至少包括细胞生物学、分子生物学、免疫学和医学(包括癌症医学)的领域。
技术介绍
0、背景
1、在自然杀伤(nk)细胞作为治疗的领域中，某些障碍阻碍了它们的使用，包括由于数量有限而需要离体扩增，此外它们的持久性不足影响了它们作为抗癌治疗的功效。细胞因子刺激是增强nk细胞响应肿瘤靶细胞的功能能力的重要信号。此外，用il-18、il-15和il-12的组合预激活nk细胞过夜已被证明产生在再刺激后具有增强的细胞因子产生的长寿命的记忆样nk细胞(leong等人,2014)。然而，在没有离体扩增的情况下使用来自外周血(pb)的预激活nk细胞的程序需要繁琐的程序才能产生足够的数量供临床使用。此外，还存在与癌症识别缺陷和nk细胞激活不良相关的其他障碍。因此，对改进策略以产生用于治疗应用的并且在癌抗原靶向方面特别有效的高功能nk细胞的需求尚未得到满足。
技术实现思路
0、专利技术概述
1、本公开内容的实施方案涉及与用于医学状况的免疫疗法相关的方法和组合物。免疫疗法可用于其中靶向需要破坏的细胞在临床上是有用的，并且靶细胞上存在抗体和/或细胞可能针对其具有特异性的特定抗原的任何医学状况。在特定实施方案中，免疫疗法包括过继细胞疗法和被配置为与细胞结合的抗体、由其组成或基本上由其组成。
2、在一些实施方案中，本文提供了组合物，其包含(i)包含一种或多种转基因的一种或多种工程化自然杀伤(nk)细胞；和(ii)包括埃万妥单抗(amivantamab)、玛格
3、在一些实施方案中，本文提供的组合物进一步定义为工程化nk细胞与玛格妥昔单抗、埃万妥单抗和/或伊马曲单抗之间通过抗体的fc区与工程化nk细胞的结合形成的复合物。在一些实施方案中，复合物进一步包括与其靶抗原结合的一种或多种抗体的一个或多个抗原结合结构域。
4、在一些实施方案中，一种或多种抗体靶抗原是表皮生长因子受体(egfr)、表皮生长因子受体-2(her2/egfr-2)和/或酪氨酸蛋白激酶met(c-met)。在一些实施方案中，工程化nk细胞来源于从脐带血(cb)单核细胞、cb造血干细胞、外周血(pb)nk细胞、骨髓、干细胞、ipsc、nk细胞系或其组合获得的nk细胞或nk细胞前体。在一些实施方案中，工程化nk细胞来源于原代nk细胞，而不是来源于干细胞和/或诱导多能干细胞(ipsc)。在一些实施方案中，nk细胞来源于脐带血，并且其中cb单核细胞和/或cb造血干细胞的来源是来自1个供体的cb或来自2个或更多个个体cb单元的汇集。在一些实施方案中，工程化nk细胞被修饰以包含一种或多种转基因以用于表达一种或多种异源蛋白质。
5、在一些实施方案中，一种或多种异源蛋白质包括一种或多种工程化受体和/或一种或多种细胞因子。在一些实施方案中，一种或多种工程化受体是嵌合抗原受体(car)、t细胞受体(tcr)、识别ig的fc部分的受体(fc识别受体)、趋化因子受体、归巢受体、嵌合细胞因子受体或其任何组合。在一些实施方案中，fc识别受体包括cd16、cd32和/或cd64，和/或其中工程化nk细胞表达编码一种或多种受体的一种或多种转基因以增强其与抗体的结合。在一些实施方案中，工程化受体包括tcr和/或car。在一些实施方案中，所述工程化受体靶向干细胞抗原、自身抗原或选自以下的癌抗原：cd19、cd319(cs1)、ror1、cd20、cd22、cd70、癌胚抗原、甲胎蛋白、ca-125、muc-1、egfr、上皮肿瘤抗原、黑色素瘤相关抗原、突变的p53、突变的ras、egfr-2/her2/neu、erbb2、叶酸结合蛋白、hiv-1包膜糖蛋白gp120、hiv-1包膜糖蛋白gp41、gd2、cd5、cd123、cd23、cd30、cd38、cd56、cd70、c-met、间皮素、gd3、herv-k、il-11rα、κ链、λ链、cspg4、erbb2、wt-1、trail/dr4、vegfr2、cd33、cd47、cll-1、u5snrnp200、cd200、baff-r、bcma、cd99、hla-g、trop2及其组合。
6、在一些实施方案中，工程化抗原受体靶向cd70和/或trop2。在一些实施方案中，靶向cd70的抗原受体包含与seq id no：2或5至少或约80％、81％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的序列、由其组成或基本上由其组成。在一些实施方案中，工程化nk细胞包含构建体，该构建体包含与seq id no：1、3或4至少或约80％、81％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的序列、由其组成或基本上由其组成。在一些实施方案中，靶向trop2的抗原受体包含与seq id no：7或9至少或约80％、81％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的序列、由其组成或基本上由其组成。在一些实施方案中，工程化的nk细胞包含构建体，所述构建体包含与seq id no：6、8或10至少或约80％、81％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的序列、由其组成或基本上由其组成。
7、在一些实施方案中，工程化nk细胞包含一种或多种异源细胞因子，所述一种或多种异源细胞因子包括il-2、il-4、il-7、il-12、il-15、il-18、il-21和/或il-23。在一些实施方案中，细胞因子包括il-15、由其组成或基本上由其组成，所述il-15由与seq id no：11或12至少或约80％、81％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的序列编码和/或包含所述序列、由所述序列组成或基本上由所述序列组成。在一些实施方案中，细胞因子包括il-21、由其组成或基本上由其组成，所述il-21由与seq id no：13-16至少或约80％、81％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种组合物，其包含：
2.权利要求1的组合物，其中所述工程化NK细胞来自扩增或未扩增的群体。
3.权利要求1或2的组合物，其中所述工程化NK细胞来自预激活或未预激活的群体。
4.权利要求1-3中任一项的组合物，其中在(i)中，所述组合物进一步定义为工程化NK细胞与玛格妥昔单抗、埃万妥单抗和/或伊马曲单抗之间通过抗体的Fc区与工程化NK细胞的结合形成的复合物。
5.权利要求1-4中任一项的组合物，其中所述复合物进一步包括与其靶抗原结合的一种或多种抗体的一个或多个抗原结合结构域。
6.权利要求1-5中任一项的组合物，其中一种或多种抗体靶抗原是表皮生长因子受体(EGFR)、表皮生长因子受体-2(HER2/EGFR-2)和/或酪氨酸蛋白激酶Met(c-Met)。
7.权利要求1-6中任一项的组合物，其中所述工程化NK细胞来源于从脐带血(CB)单核细胞、CB造血干细胞、外周血(PB)NK细胞、骨髓、干细胞、iPSC、NK细胞系或其组合获得的NK细胞或NK细胞前体。
8.权利要求1-7中任一项的组合物，其
9.权利要求1-8中任一项的组合物，其中NK细胞来源于脐带血，并且其中CB单核细胞和/或CB造血干细胞的来源是来自1个供体的CB或来自2个或更多个个体CB单元的汇集。
10.权利要求1-9中任一项的组合物，其中工程化NK细胞被修饰以包含一种或多种转基因以用于表达一种或多种异源蛋白质。
11.权利要求10的组合物，其中一种或多种异源蛋白质包括一种或多种工程化受体和/或一种或多种细胞因子。
12.权利要求11的组合物，其中所述一种或多种工程化受体是嵌合抗原受体(CAR)、T细胞受体(TCR)、识别Ig的FC部分的受体(FC识别受体)、趋化因子受体、归巢受体、嵌合细胞因子受体或其任何组合。
13.权利要求12的组合物，其中所述FC识别受体包括CD16、CD32和/或CD64，和/或其中所述工程化NK细胞表达编码一种或多种受体的一种或多种转基因以增强其与抗体的结合。
14.权利要求11-13中任一项的组合物，其中所述工程化受体包括TCR和/或CAR。
15.权利要求11-14中任一项的组合物，其中所述工程化受体靶向干细胞抗原、自身抗原或选自以下的癌抗原：CD19、CD319(CS1)、ROR1、CD20、CD22、CD70、癌胚抗原、甲胎蛋白、CA-125、MUC-1、EGFR、上皮肿瘤抗原、黑色素瘤相关抗原、突变的p53、突变的ras、EGFR-2/HER2/Neu、ERBB2、叶酸结合蛋白、HIV-1包膜糖蛋白gp120、HIV-1包膜糖蛋白gp41、GD2、CD5、CD123、CD23、CD30、CD38、CD56、CD70、c-Met、间皮素、GD3、HERV-K、IL-11Rα、κ链、λ链、CSPG4、ERBB2、WT-1、TRAIL/DR4、VEGFR2、CD33、CD47、CLL-1、U5snRNP200、CD200、BAFF-R、BCMA、CD99、HLA-G、Trop2及其组合。
16.权利要求11-15中任一项的组合物，其中所述工程化抗原受体靶向CD70和/或TROP2。
17.权利要求16的组合物，其中靶向CD70的抗原受体包含与SEQ ID NO：2或5至少或正好80％、81％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的序列。
18.权利要求16或17的组合物，其中工程化NK细胞包含与SEQ ID NO：1、3或4至少或正好80％、81％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的构建体。
19.权利要求16-18中任一项的组合物，其中靶向TROP2的抗原受体包含与SEQ ID NO：7或9至少或正好80％、81％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的序列。
20.权利要求16-19中任一项的组合物，其中工程化NK细胞包含与SEQ ID NO：6、8或10至少或正好80％、81％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、8...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种组合物，其包含：
2.权利要求1的组合物，其中所述工程化nk细胞来自扩增或未扩增的群体。
3.权利要求1或2的组合物，其中所述工程化nk细胞来自预激活或未预激活的群体。
4.权利要求1-3中任一项的组合物，其中在(i)中，所述组合物进一步定义为工程化nk细胞与玛格妥昔单抗、埃万妥单抗和/或伊马曲单抗之间通过抗体的fc区与工程化nk细胞的结合形成的复合物。
5.权利要求1-4中任一项的组合物，其中所述复合物进一步包括与其靶抗原结合的一种或多种抗体的一个或多个抗原结合结构域。
6.权利要求1-5中任一项的组合物，其中一种或多种抗体靶抗原是表皮生长因子受体(egfr)、表皮生长因子受体-2(her2/egfr-2)和/或酪氨酸蛋白激酶met(c-met)。
7.权利要求1-6中任一项的组合物，其中所述工程化nk细胞来源于从脐带血(cb)单核细胞、cb造血干细胞、外周血(pb)nk细胞、骨髓、干细胞、ipsc、nk细胞系或其组合获得的nk细胞或nk细胞前体。
8.权利要求1-7中任一项的组合物，其中工程化nk细胞来源于原代nk细胞，而不是来源于干细胞和/或诱导多能干细胞(ipsc)。
9.权利要求1-8中任一项的组合物，其中nk细胞来源于脐带血，并且其中cb单核细胞和/或cb造血干细胞的来源是来自1个供体的cb或来自2个或更多个个体cb单元的汇集。
10.权利要求1-9中任一项的组合物，其中工程化nk细胞被修饰以包含一种或多种转基因以用于表达一种或多种异源蛋白质。
11.权利要求10的组合物，其中一种或多种异源蛋白质包括一种或多种工程化受体和/或一种或多种细胞因子。
12.权利要求11的组合物，其中所述一种或多种工程化受体是嵌合抗原受体(car)、t细胞受体(tcr)、识别ig的fc部分的受体(fc识别受体)、趋化因子受体、归巢受体、嵌合细胞因子受体或其任何组合。
13.权利要求12的组合物，其中所述fc识别受体包括cd16、cd32和/或cd64，和/或其中所述工程化nk细胞表达编码一种或多种受体的一种或多种转基因以增强其与抗体的结合。
14.权利要求11-13中任一项的组合物，其中所述工程化受体包括tcr和/或car。
15.权利要求11-14中任一项的组合物，其中所述工程化受体靶向干细胞抗原、自身抗原或选自以下的癌抗原：cd19、cd319(cs1)、ror1、cd20、cd22、cd70、癌胚抗原、甲胎蛋白、ca-125、muc-1、egfr、上皮肿瘤抗原、黑色素瘤相关抗原、突变的p53、突变的ras、egfr-2/her2/neu、erbb2、叶酸结合蛋白、hiv-1包膜糖蛋白gp120、hiv-1包膜糖蛋白gp41、gd2、cd5、cd123、cd23、cd30、cd38、cd56、cd70、c-met、间皮素、gd3、herv-k、il-11rα、κ链、λ链、cspg4、erbb2、wt-1、trail/dr4、vegfr2、cd33、cd47、cll-1、u5snrnp200、cd200、baff-r、bcma、cd99、hla-g、trop2及其组合。
16.权利要求11-15中任一项的组合物，其中所述工程化抗原受体靶向cd70和/或trop2。
17.权利要求16的组合物，其中靶向cd70的抗原受体包含与seq id no：2或5至少或正好80％、81％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的序列。
18.权利要求16或17的组合物，其中工程化nk细胞包含与seq id no：1、3或4至少或正好80％、81％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的构建体。
19.权利要求16-18中任一项的组合物，其中靶向trop2的抗原受体包含与seq id no：7或9至少或正好80％、81％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的序列。
20.权利要求16-19中任一项的组合物，其中工程化nk细胞包含与seq id no：6、8或10至少或正好80％、81％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的构建体。
21.权利要求11-20中任一项的组合物，其中所述一种或多种异源细胞因子包括il-2、il-4、il-7、il-12、il-15、il-18、il-21和/或il-23。
22.权利要求21的组合物，其中细胞因子包括由与seq id no：11或12至少或正好80％、81％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的序列编码和/或包含所述序列的il-15。
23.权利要求21或22的组合物，其中细胞因子包括由与seq id no：13-16至少或正好80％、81％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的序列编码和/或包含所述序列的il-21。
24.权利要求1-23中任一项的组合物，其中所述工程化nk细胞表达编码一种或多种自杀基因的一种或多种转基因。
25.权利要求1-24中任一项的组合物，其中所述工程化nk细胞包含内源基因中的一种或多种工程化突变。
26.权利要求25的组合物，其中所述工程化突变包括cish、cd38、糖皮质激素受体和/或tgfbr2基因突变。
27.权利要求4-26中任一项的组合物，其中一种或多种抗体分子与nk细胞的复合包括将nk细胞与一种或多种抗体孵育至少或正好约1小时然后洗涤组合物以去除未结合的抗体。
28.权利要求4-27中任一项的组合物，其中一种或多种抗体分子以约1至约1000μg/ml最终浓度、约1μg/ml最终浓度、约10μg/ml最终浓度、约50μg/ml最终浓度或约100μg/ml最终浓度的浓度与nk细胞孵育以形成复合物。
29.权利要求27或28的组合物，其中抗体和nk细胞在click's/rpmi培养基中孵育。
30.权利要求27-29中任一项的组合物，其中用于工程化nk细胞与抗体的复合的孵育和洗涤条件是在孵育和洗涤后使至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％的工程化nk细胞与抗体复合至少1小时、4小时、8小时、12小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天或12天。
31.权利要求30的组合物，其中相对于在孵育和洗涤后约1小时测量的与工程化nk细胞复合的抗体的量，至少约9％的抗体在孵育和洗涤后至少3天结合到nk细胞表面。
32.权利要求30的组合物，其中相对于在孵育和洗涤后约1小时测量的与工程化nk细胞复合的抗体的量，至少约6％的抗体在孵育和洗涤后至少5天结合到nk细胞表面。
33.权利要求30的组合物，其中相对于在孵育和洗涤后约1小时测量的与工程化nk细胞复合的抗体的量，至少约4％的抗体在孵育和洗涤后至少7天结合到nk细胞表面。
34.权利要求30的组合物，其中相对于在孵育和洗涤后约1小时测量的与工程化nk细胞复合的抗体的量，至少约3％的抗体在孵育和洗涤后至少12天结合到nk细胞表面。
35.权利要求1-34中任一项的组合物，其中所述组合物未被冷冻、被冷冻保存或从冷冻保存中解冻。
36.权利要求35的组合物，其中所述组合物从冷冻保存中解冻，并且至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％的工程化nk细胞与抗体复合。
37.权利要求35或36的组合物，其中相对于在孵育和洗涤后约1小时测量的与非冷冻保存的工程化nk细胞复合的抗体的量，在从冷冻保存中解冻后，至少约30％、40％、50％或60％的抗体结合到nk细胞表面。
38.权利要求35-36中任一项的组合物，其中工程化nk细胞在冷冻保存之前被去活化。
39.权利要求38的组合物，其中去活化剂包括激酶抑制剂。
40.权利要求39的组合物，其中去活化剂包括达沙替尼。
41.权利要求1-26中任一项的组合物，其中所述组合物是在体内产生的。
42.权利要求41的组合物，其中在体内产生组合物包括通过在施用抗体后约1小时内施用工程化nk细胞来在体内用抗体加载工程化nk细胞。
43.权利要求1-42中任一项的组合物，其中一种或多种抗体包括埃万妥单抗或由其组成。
44.权利要求1-42中任一项的组合物，其中一种或多种抗体包括玛格妥昔单抗或由其组成。
45.权利要求1-42中任一项的组合物，其中所述一种或多种抗体包括伊马曲单抗或由其组成。
46.一种产生权利要求1-45中任一项的组合物的方法，所述方法包括以下步骤：
47.权利要求46的方法，其中所述方法包括在扩增步骤之前和/或之后的预激活步骤，其中工程化nk细胞在包含有效浓度的il-2、il-12、il-15和il-18中的一种或多种的培养物中被预激活。
48.权利要求47的方法，其中所述培养物包含有效浓度的il-12、il-15和il-18。
49.权利要求46-48中任一项的方法，其中所述提供步骤进一步定义为将工程化nk细胞与抗体分子孵育特定的持续时间、在输注之前立即组合工程化nk细胞和抗体分子、或通过时间协调施用在受试者体内组合工程化nk细胞和抗体。
50.权利要求49的方法，其中持续时间为约5分钟至约24小时或更长时间。
51.权利要求50的方法，其中持续时间为约1小时。
52.权利要求46-51中任一项的方法，其中用于预激活步骤的培养物包含浓度为0.1-1000ng/ml、1-1000ng/ml或约10ng/ml的il-18和/或il-15。
53.权利要求46-52中任一项的方法，其中用于预激活步骤的培养物包含浓度为0.1-1000ng/ml、1-1000ng/ml或约10ng/ml的il-12。
54.权利要求46-53中任一项的方法，还包括在扩增步骤之前和/或之后对预激活的工程化nk细胞的一个或多个洗涤步骤。
55.权利要求46-54中任一项的方法，其中在扩增步骤期间用il-12、il-15、il-18、il-2或其任何组合激活工程化nk细胞至少两次或更多次。
56.权利要求46-55中任一项的方法，其中扩增持续5-60天、12-16天或18-24天。
57.权利要求46-56中任一项的方法，其中扩增培养物还包含il-2。
58.权利要求57的方法，其中il-2以10-500u/ml、100-300u/ml或约200u/ml的浓度存在。
59.权利要求46-58中任一项的方法，其中每2-3天在扩增培养物中补充il-2。
60.权利要求46-59中任一项的方法，其中用于工程化nk细胞与一种或多种抗体的复合的孵育条件是在孵育和洗涤后使至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％的工程化nk细胞与抗体复合至少1小时、4小时、8小时、12小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天或12天。
61.权利要求46-60中任一项的方法，其中相对于在孵育和洗涤后约1小时测量的与工程化nk细胞复合的抗体的量，至少约9％的抗体在孵育和洗涤后至少3天结合到nk细胞表面。
62.权利要求46-61中任一项的方法，其中相对于在孵育和洗涤后约1小时测量的与工程化nk细胞复合的抗体的量，至少约6％的抗体在孵育和洗涤后至少5天结合到nk细胞表面。
63.权利要求46-62中任一项的方法，其中相对于在孵育和洗涤后约1小时测量的与工程化nk细胞复合的抗体的量，至少约4％的抗体在孵育和洗涤后至少7天结合到nk细胞表面。
64.权利要求46-63中任一项的方法，其中相对于在孵育和洗涤后约1小时测量的与工程化nk细胞复合的抗体的量，至少约3％的抗体在孵育和洗涤后至少12天结合到nk细胞表面。
65.权利要求46-64中任一项的方法，其中与一种或多种抗体一起提供的nk细胞未被冷冻、被冷冻保存或从冷冻保存中解冻。
66.权利要求65的方法，其中与一种或多种抗体一起提供的nk细胞从冷冻保存中解冻，并且至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％的工程化nk细胞与抗体复合。
67.权利要求65或66的方法，其中相对于在孵育和洗涤后约1小时测量的与非冷冻保存的工程化nk细胞复合的抗体的量，在从冷冻保存中解冻后，至少约30％、40％、50％或60％的抗体结合到nk细胞表面。
68.一种治疗受试者的疾病或病症的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的权利要求1-45中任一项的组合物。
69.权利要求68的方法，其中所述疾病或病症是癌症、炎症、移植物抗宿主病、移植排斥、自身免疫性疾病、免疫缺陷疾病、b细胞恶性肿瘤或感染。
70.权利要求68或69的方法，其中所述癌症包括血液癌症或实体肿瘤。
71.权利要求70的方法，其中所述癌症包括胰腺癌、结直肠癌、肾脏癌、脑癌、乳腺癌、肾癌和/或骨髓瘤。
72.权利要求68-71中任一项的方法，其中所述工程化nk细胞相对于所述受试者是同种异体的。
73.权利要求68-71中任一项的方法，其中所述工程化nk细胞相对于所述受试者是自体的。
74.权利要求68-73中任一项的方法，其中所述受试者是人类。
75.权利要求68-74中任一项的方法，其进一步包括向所述受试者施用至少一种第二治疗剂。
76.权利要求75的方法，其中所述至少一种第二治疗剂是治疗有效量的一种或多种抗癌剂、一种或多种免疫调节剂和/或一种或多种免疫抑制剂。
77.权利要求76的方法，其中所述抗癌剂是化疗、放疗、基因疗法、手术、激素疗法、抗血管生成疗法或免疫疗法。
78.权利要求76的方法，其中所述免疫抑制剂是钙调神经磷酸酶抑制剂、mtor抑制剂、抗体、化疗剂辐射、趋化因子、白介素或趋化因子或白介素的抑制剂。
79.权利要求75-78中任一项的方法，其中所述组合物和/或所述至少一种第二治疗剂静脉内、腹膜内、气管内、肿瘤内、肌肉内、内窥镜下、病灶内、经皮、皮下、区域性或通过直接注射或灌注施用。
80.权利要求75-79中任一项的方法，其中所述第二治疗剂是抗体。
81.一种使用工程化nk细胞治疗癌症患者的方法，所述方法包括：
82.权利要求81的方法，其中加载工程化nk细胞包括将所述工程化nk细胞暴露于一种或多种抗体大于或等于约1小时或者小于或等于约1小时。
83.权利要求81或82的方法，其中工程化nk细胞保持加载抗体至少约或为约1小时、4小时、8小时、12小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天或12天。
84.权利要求81-83中任一项的方法，其中所述一种或多种抗体通过与cd16表面蛋白相互作用与所述工程化nk细胞结合。
85.权利要求81-84中任一项的方法，其中所述工程化nk细胞来源于脐带血。
86.权利要求81-85中任一项的方法，其中所述工程化nk细胞被离体激活。
87.权利要求81-86中任一项的方法，其中所述工程化nk细胞用il-18、il-15和il-12预激活。
88.权利要求81-87中任一项的方法，其中所述一种或多种转基因包括工程化受体。
89.权利要求88的方法，其中所述工程化受体包括嵌合抗原受体(car)、t细胞受体、趋化因子受体、嵌合细胞因子受体或其任何组合。
90.权利要求88或89的方法，其中所述工程化受体包括car或tcr。
91.权利要求88-90中任一项的方法，其中所述工程化受体靶向干细胞抗原、自身抗原或选自以下的癌抗原：cd19、cd319(cs1)、ror1、cd20、cd22、cd70、癌胚抗原、甲胎蛋白、ca-125、muc-1、egfr、上皮肿瘤抗原、黑色素瘤相关抗原、突变的p53、突变的ras、egfr-2/her2/neu、erbb2、叶酸结合蛋白、hiv-1包膜糖蛋白gp120、hiv-1包膜糖蛋白gp41、gd2、cd5、cd123、cd23、cd30、cd38、cd56、cd70、c-met、间皮素、gd3、herv-k、il-11rα、κ链、λ链、cspg4、erbb2、wt-1、trail/dr4、vegfr2、cd33、cd47、cll-1、u5snrnp200、cd200、baff-r、bcma、cd99、hla-g、trop2及其组合。
92.权利要求91的方法，其中所述工程化抗原受体靶向cd70和/或trop2。
93.权利要求91或92的方法，其中靶向cd70的抗原受体包含与seq id no：2或5至少或正好80％、81％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的序列。
94.权利要求92或93的方法，其中所述工程化nk细胞包含与seq id no：1、3或4至少或正好80％、81％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的构建体。
95.权利要求91-94中任一项的方法，其中靶向trop2的抗原受体包含与seq id no：7或9至少或正好80％、81％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的序列。
96.权利要求91-95中任一项的方法，其中所述工程化nk细胞包含与seq id no：6、8或10至少或正好80％、81％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的构建体。
97.权利要求81-96中任一项的方法，其中一种或多种转基因包括细胞因子。
98.权利要求97的方法，其中一种或多种异源细胞因子包括il-2、il-4、il-7、il-12、il-15、il-18、il-21和/或il-23。
99.权利要求98的方法，其中细胞因子包括il-2、il-12、il-15、il-18和/或il-21。
100.权利要求99的方法，其中细胞因子包括由与seq id no：11或12至少或正好80％、81％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的序列编码和/或包含所述序列的il-15或由其组成。
101.权利要求99或100的方法，其中细胞因子包括由与seq id no：13-16至少或正好80％、81％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的序列编码和/或包含所述序列的il-21或由其组成。
102.权利要求81-101中任一项的方法，其中所述工程化nk细胞包含内源基因中的一种或多种工程化突变。
103.权利要求102的方法，其中内源基因中的一种或多种工程化突变包括cish、cd38、糖皮质激素受体和/或tgfbr2基因突变。
104.一种组合物，其包含：
105.权利要求104或105的组合物，其中所述抗体至少靶向cd123和nkp46。
106.权利要求104-105中任一项的组合物，其中所述组合物进一步定义为工程化nk细胞iph61之间通过抗体的fc区与工程化nk细胞的结合和/或抗体的nkp46靶向区与工程化nk细胞的结合形成的复合物。
107.权利要求104-106中任一项的组合物，其中所述复合物进一步包括与其靶抗原结合的一种或多种抗体的一个或多个抗原结合结构域。
108.权利要求104-107中任一项的组合物，其中所述工程化nk细胞来源于从脐带血(cb)单核细胞、cb造血干细胞、外周血(pb)nk细胞、骨髓、干细胞、ipsc、nk细胞系或其组合获得的nk细胞或nk细胞前体。
109.权利要求104-108中任一项的组合物，其中所述工程化nk细胞被修饰以包含一种或多种转基因以用于表达一种或多种异源蛋白质。
110.权利要求109的组合物，其中所述一种或多种异源蛋白质包括一种或多种工程化受体和/或一种或多种细胞因子。
111.权利要求110的组合物，其中一种或多种工程化受体是嵌合抗原受体(car)、t细胞受体(tcr)、识别ig的fc部分的受体(fc识别受体)、趋化因子受体、归巢受体、嵌合细胞因子受体或其任何组合。
112.权利要求111的组合物，其中所述fc识别受体包括cd16、cd32和/或cd64，和/或其中所述工程化nk细胞表达编码一种或多种受体和/或nk细胞表面抗原的一种或多种转基因以增强nk细胞与抗体的结合。
113.权利要求110的组合物，其中所述工程化nk细胞表面抗原和/或受体是cd16、cd32、cs1、cd56、cd64、nkg2d、nkg2c、dnam、2b4、cd2、ncr、nkp30、nkp44、nkp46或kir。
114.权利要求110-113中任一项的组合物，其中所述工程化受体包括tcr和/或car。
115.权利要求110-114中任一项的组合物，其中所述工程化受体靶向干细胞抗原、自身抗原或选自以下的癌抗原：cd19、cd319(cs1)、ror1、cd20、cd22、cd70、癌胚抗原、甲胎蛋白、ca-125、muc-1、egfr、上皮肿瘤抗原、黑色素瘤相关抗原、突变的p53、突变的ras、egfr-2/her2/neu、erbb2、叶酸结合蛋白、hiv-1包膜糖蛋白gp120、hiv-1包膜糖蛋白gp41、gd2、cd5、cd123、cd23、cd30、cd38、cd56、cd70、c-met、间皮素、gd3、herv-k、il-11rα、κ链、λ链、cspg4、erbb2、wt-1、trail/dr4、vegfr2、cd33、cd47、cll-1、u5snrnp200、cd200、baff-r、bcma、cd99、hla-g、trop2及其组合。
116.权利要求110-115中任一项的组合物，其中所述工程化抗原受体靶向cd70和/或trop2。
117.权利要求116的组合物，其中靶向cd70的抗原受体包含与seq id no：2或5至少或正好80％、81％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的序列。
118.权利要求116或117的组合物，其中工程化nk细胞包含与seq id no：1、3或4至少或正好80％、81％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的构建体。
119.权利要求116-118中任一项的组合物，其中靶向trop2的抗原受体包含与seq idno：7或9至少或正好80％、81％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的序列。
120.权利要求116-119中任一项的组合物，其中工程化nk细胞包含与seq id no：6、8或10至少或正好80％、81％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的构建体。
121.权利要求116-120中任一项的组合物，其中一种或多种异源细胞因子是il-2、il-4、il-7、il-12、il-15、il-18、il-21和/或il-23。
122.权利要求121的组合物，其中细胞因子包括由与seq id no：11或12至少或正好80％、81％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的序列编码和/或包含所述序列的il-15。
123.权利要求121或122的组合物，其中细胞因子包括由与seq id no：13-16至少或正好80％、81％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的序列编码和/或包含所述序列的il-21。
124.权利要求104-123中任一项的组合物，其中所述工程化nk细胞表达编码一种或多种自杀基因的一种或多种转基因。
125.权利要求104-124中任一项的组合物，其中所述工程化nk细胞包含内源基因中的一种或多种工程化突变。
126.权利要求125的组合物，其中所述一种或多种工程化突变包括cish、cd38、糖皮质激素受体和/或tgfbr2基因突变。
127.权利要求106-126中任一项的组合物，其中包括iph61的一种或多种抗体与nk细胞的复合包括将nk细胞与一种或多种抗体孵育至少或正好约1小时然后洗涤组合物以去除未结合的抗体。
128.权利要求106-127中任一项的组合物，其中一种或多种抗体分子以约1至约1000μg/ml最终浓度、约1μg/ml最终浓度、约10μg/ml最终浓度、约50μg/ml最终浓度或约100μg/ml最终浓度的浓度与nk细胞孵育以形成复合物。
129.权利要求12...
【专利技术属性】
技术研发人员：K·雷兹瓦尼，R·巴萨尔，S·阿查亚，N·尤普赖特瑞，M·达希尔，E·施帕尔，D·马林科斯达，
申请(专利权)人：得克萨斯大学体系董事会，
类型：发明
国别省市：
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