【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于酶固定化，具体涉及一种利用酵母孢子固定化β-甘露聚糖酶和β-木聚糖酶的方法、应用及其产品。
技术介绍
1、甘露聚糖(mannan)是一种重要的植物半纤维素聚多糖，广泛存在于豆科植物细胞壁中。水解后的甘露低聚糖(mos)是一种功能性营养物质，能够改善肠道菌群，在食品、饲料、造纸纺织、石油工业等领域应用广泛。甘露聚糖水解涉及几种不同的酶，起主要作用的为内切β-甘露聚糖酶和β-木聚糖酶。
2、孢子固定化酶是采用基因工程技术将含有目的酶基因的质粒转入酿酒酵母，酿酒酵母产孢过程中孢子壁从内到外依次组装甘露糖层、β-葡聚糖层、壳聚糖层和二酪氨酸层，在组装过程中目标酶从孢子膜内腔被固定到壳聚糖层和二酪氨酸层之间。
3、现有技术cn109182302a公开了一种利用酵母孢子固定化纤维素酶的方法，成功获得了能够在孢子二酪氨酸层与壳聚糖层之间固定的半纤维素酶，通过对该固定化的半纤维素酶进行检测，发现固定化酶的最适温度提高到75℃、最佳反应ph值降低为3.2，在磷酸盐浓度20mmol/l、mg2+浓度15mmol/l以内时，酶活最高。
4、迄今为止，已经从不同微生物中克隆并在异源宿主细胞中表达了游离型β-甘露聚糖酶与β-木聚糖酶。但游离酶在工业应用中存在较大的局限性，例如，甘露聚糖酶与木聚糖酶在高温、强酸碱等极端条件下容易失活，并且不易于从反应体系中分离出来，同时，游离酶的加入也不利于低聚甘露糖与低聚木糖的纯化与精制。因此，构建性能优异的重组β-木聚糖酶以及β-甘露聚糖酶，并固定化提升其耐酸碱性及可重
技术实现思路
1、本专利技术针对现有技术的不足，提供了一种利用酵母孢子固定化甘露聚糖酶和木聚糖酶的方法、应用及其产品。
2、为实现上述专利技术目的，本专利技术的技术方案如下：
3、第一方面，本专利技术提供了一种酵母孢子固定化β-甘露聚糖酶和β-木聚糖酶的方法，所述方法包括以下步骤：
4、(1)β-甘露聚糖酶和β-木聚糖酶目的基因的合成；
5、(2)构建重组质粒分别转化到表达菌株；
6、(3)诱导表达菌株产孢固定化β-甘露聚糖酶和β-木聚糖酶。
7、具体的，所述β-甘露聚糖酶来源于aspergillus niger，其核苷酸序列如sed idno：1所示。
8、具体的，所述β-木聚糖酶来源于aspergillus niger，其核苷酸序列如sed id no：2所示。
9、seq id no 1:
10、atgaagctttccaacgccctcctcaccctggctagcctggcgctggccaacgtctccacggctctgccgaaagcctcccctgcaccgagcaccagcagcagtgctgcctccacctccttcgccagcacctccggcctccaattcaccattgatggcgaaactggctacttcgccggaacgaacagctactggatcggtttcctcactgacaacgcggacgtcgacctcgtcatgggccacctgaagtcgtccggcctcaagatcctccgcgtgtggggcttcaacgatgtcacctcgcagccctcctccggcacagtctggtaccaactgcaccaggacggcaaatcgacaatcaacacgggtgccgacggtctccagcgcctcgactacgtcgtctcgtctgccgaacagcacgacatcaaactcatcatcaacttcgtcaactactggaccgattacggtggtatgtctgcgtacgtgagcgcgtatggcggatccggcgagacggatttctataccagtgataccatgcagagtgcctatcagacatatatcaagacggtcgtggagcggtacagtaactcctcggcggtgtttgcgtgggagttggcgaatgagccgagatgtccgagttgcgatacttctgtgttgtataactggattgagaagacgagtaagtttattaaggggttggatgcggatcgtatggtttgtattggtgatgagggcttcggtctcaacatcgactcggacggcagctacccttatcaattctccgagggcttgaactttacgatgaacctcggtatcgatactattgactttggtaccctccacttgtaccctgatagctggggcacctccgacgactggggcaacggctggatcaccgcccacggcgcagcctgcaaagcggccggcaagccatgtctcctggaggaatacggagtcacctcgaaccactgcagtgtggagggctcgtggcagaagacagcgctcagcacaacgggcgtcggcgcggatctgttctggcagtatggtgatgatttgagtaccgggaagtcgccggatgatgggaatactatctactatgggactagtgattatcagtgcctggtgacggatcatgttgctgctattggtagtgcttaa。
11、seq id no 2:
12、gactctgtcgcccagcgttcggatgccttgcacatgctctctgagcgctcgaccccgagctcgaccggcgagaacaacggcttctactactccttctggaccgacggcggtggcgacgtgacctacaccaacggagatgctggtgcctacactgttgagtggtccaacgtgggcaactttgtcggtggaaagggctggaaccccggaagtgcgcaggacatcacctacagcggcaccttcacccctagcggcaacggctatctctccgtctatggctggaccactgaccccctgatcgagtactacatcgtcgagtcctacggcgactacaaccccggcagtggaggcacatacaagggcaccgtcacctcggacggatccgtttacgatatctacacggctacccgtaccaatgctgcttccattcagggaaccgctaccttcactcagtactggtccgtccgccagaacaagagagttggcggaactgttaccacctccaaccacttcaatgcttgggctaagctgggaatgaacctgggtactcacaactaccagatcgtggctaccgagggttaccagagcagtggatcttcgtccatcactgttcagtaa。
13、其中，编码β-甘露聚糖酶的基因命名为mana；编码β-木聚糖酶的基因命名为xynb。
14、具本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.β-甘露聚糖酶和β-木聚糖酶在酵母孢子固定中的应用，其特征在于，所述应用通过β-甘露聚糖酶和β-木聚糖酶固定到酵母壳聚糖层和二酪氨酸层中实现。
2.酵母孢子固定化β-甘露聚糖酶和β-木聚糖酶的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述β-甘露聚糖酶来源于Aspergillusniger，其核苷酸序列如SED ID NO：1所示。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述β-木聚糖酶来源于Aspergillusniger，其核苷酸序列如SED ID NO：2所示。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述重组质粒为pRS424或pRS426。
6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述表达菌株为野生型酿酒酵母菌株或者缺陷型酿酒酵母菌株。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述表达菌株为野生型酿酒酵母菌株AN120。
8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述产孢还包括重组菌株培养基培养、沉降收集菌体和沉降收集孢
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述培养基组分包括：蛋白胨、酵母提取物、乙酸钾和腺嘌呤。
10.一种生物材料，其特征在于，包括权利要求1所述的应用或权利要求1-9中任意一项方法所制备的酵母孢子。
...【技术特征摘要】
1.β-甘露聚糖酶和β-木聚糖酶在酵母孢子固定中的应用，其特征在于，所述应用通过β-甘露聚糖酶和β-木聚糖酶固定到酵母壳聚糖层和二酪氨酸层中实现。
2.酵母孢子固定化β-甘露聚糖酶和β-木聚糖酶的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述β-甘露聚糖酶来源于aspergillusniger，其核苷酸序列如sed id no：1所示。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述β-木聚糖酶来源于aspergillusniger，其核苷酸序列如sed id no：2所示。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所...
【专利技术属性】
技术研发人员：苑鹏，刘国玉，柳嘉，段盛林，刘士伟，李巨秀，马芙俊，周芳，曾雪莹，杨书恒，邹延，马喜山，刘金洋，王皓天，王玺，
申请(专利权)人：中国食品发酵工业研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：
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