生物标志物组合及其在预测胚胎质量中的应用制造技术

技术编号：44139746 阅读：0 留言：0更新日期：2025-01-29 10:16

本发明专利技术公开了生物标志物组合及其在预测胚胎质量中的应用。其中，所述生物标志物组合包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1～3所示的小分子非编码RNA；或如SEQ ID NO.1～8所示的小分子非编码RNA；或如SEQ ID NO.1～13所示的小分子非编码RNA。本发明专利技术的生物标志物组合不仅包含miRNA，还包含tsRNA、snRNA、Y RNA、snoRNA等多种类型的sncRNA，该生物标志物组合具有明显的可区分胚胎质量的特征。采用该生物标志物组合预测胚胎质量仅需胚胎培养液，作为一种非侵入性的样本采集操作对胚胎本身形态及后续发育没有影响。同时，本发明专利技术还提供了胚胎质量预测模型的构建方法和预测方法，最终模型具有高灵敏度和高特异性，从而为胚胎筛选提供指导。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，特别涉及生物标志物组合及其在预测胚胎质量中的应用。

技术介绍

1、不孕不育是全球面临的一大健康挑战，大约每六人中就有一人受到影响。虽然辅助生殖技术已经应用了几十年，但每次移植的怀孕率和分娩率仍分别约为35％和25％。为了提高辅助生殖技术的成功率，降低患遗传病婴儿的风险，学者们在胚胎筛选方面做出了诸多努力，包括植入前基因检测(pgt)。然而，pgt是一种侵入性的检测方法，这可能会影响胚胎的存活率和植入潜力，且可能对后代造成长期风险。因此，利用人胚胎培养液(hscm)进行胚胎筛选的无创胚胎活检(nipgt)技术应运而生。现有的nipgt技术更多的关注在利用细胞外dna进行胚胎整倍性的检测，但有研究表明，胚胎培养液中的细胞外小分子非编码rna(sncrna)，尤其是microrna(mirna)，一类长度约为22个核苷酸的sncrna，其在调控胚胎发育和预测胚胎植入潜能方面发挥着重要作用。

2、mirna在细胞外环境中稳定，易于检测，因此可作为预测胚胎植入结果的生物标记物。迄今为止，已有多篇论文揭示了microrna在胚胎培养液中的预测潜力。这些研究采用了多种检测方法，包括实时反转录定量聚合酶链反应(rt-qpcr)、液滴数字pcr、芯片、新一代测序(ngs)或这些方法的组合。然而，这些研究的结果并不一致，甚至相互矛盾，这可能是由于使用了不同的检测策略和技术，和胚胎培养液中microrna含量微小而导致灵敏度和准确性下降，以及个体样本的异质性造成的。为了克服检测灵敏度低的问题，学者们尝试混合多个胚胎来源

3、对于辅助生殖
，一种高灵敏性高特异性的早期胚胎质量预测方法，可以有效的筛选高质量胚胎，对于提高移植成功率和妊娠率是很有必要的。胚胎培养液作为一种无创的、非侵入性的样本类型，其中的sncrna组成信息可以作为一种预测胚胎质量的载体。现有的预测方法仅集中在mirna，但本专利技术人通过全面的剖析胚胎培养液中sncrna的组成，发现mirna仅占据很小一部分，约1％，剩下的大部分为tsrna和其他sncrna。因此，全面利用sncrna信息来构建预测模型是必要的。同时，目前还没有利用所有种类sncrna信息构建预测早期胚胎质量模型的流程和方法的报道。

技术实现思路

1、鉴于上述现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供生物标志物组合及其在预测胚胎质量中的应用，旨在解决了现有胚胎质量预测方法灵敏度和准确性有限，无法对单个胚胎进行筛选的问题。

2、本专利技术的技术方案如下：

3、本专利技术的第一方面，提供一种生物标志物组合，所述生物标志物组合包括核苷酸序列如seq id no.1～3所示的小分子非编码rna。

4、具体的，本专利技术提供了一种预测胚胎质量的生物标志物组合，该生物标志物组合包括囊胚时期胚胎培养液来源的3种mirna：hsa-mir-345-5p(seq id no:1)、hsa-mir-202-3p(seq id no:2)和hsa-mir-12136(seq id no:3)。

5、本专利技术的第二方面，提供一种生物标志物组合，所述生物标志物组合包括核苷酸序列如seq id no.1～8所示的小分子非编码rna。

6、具体的，在第一方面的基础上，本专利技术进一步提供了一种预测胚胎质量的生物标志物组合，该生物标志物组合包括囊胚时期胚胎培养液来源的4种mirna、1种trna、1种snrna、1种y rna和1种snorna。其中，mirna为：hsa-mir-345-5p(seq id no:1)、hsa-mir-202-3p(seq id no:2)、hsa-mir-12136(seq id no:3)和hsa-mir-128-3p(seq id no:4)；trna为：trna-ile-aat-6-1(seq id no:5)；snrna为：rnu4-82p(seq id no:6)；y rna为：y_rna.142(seq id no:7)；snorna为：snord65(seq id no:8)。

7、本专利技术的第三方面，提供一种生物标志物组合，所述生物标志物组合包括核苷酸序列如seq id no.1～13所示的小分子非编码rna。

8、具体的，在第一方面的基础上，本专利技术进一步提供了一种预测胚胎质量的生物标志物组合，该生物标志物组合包括囊胚时期胚胎培养液来源的4种mirna、1种trna、1种snrna、2种y rna和5种snorna。其中，mirna为：hsa-mir-345-5p(seq id no:1)、hsa-mir-202-3p(seq id no:2)、hsa-mir-12136(seq id no:3)和hsa-mir-128-3p(seq id no:4)；trna为：trna-ile-aat-6-1(seq id no:5)；snrna为：rnu4-82p(seq id no:6)；y rna为：y_rna.142(seq id no:7)和y_rna.449(seq id no:9)；snorna为：snord65(seq id no:8)、snord58c(seq id no:10)、snord88c(seq id no:11)、snord68(seq id no:12)和snord43(seq id no:13)。

9、本专利技术的第四方面，提供一种如上任一项所述的生物标志物组合在制备预测胚胎质量的试剂盒中的应用。

10、本专利技术的第五方面，提供一种用于检测生物标志物组合的试剂，所述试剂用于检测如上任一项所述的生物标志物组合的表达水平。

11、优选的技术方案，所述试剂为引物和/或探针。可以理解的，所述引物和/或探针是依据上述sncrna核苷酸序列本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种生物标志物组合，其特征在于，所述生物标志物组合包括核苷酸序列如SEQ IDNO.1～3所示的小分子非编码RNA。

2.一种生物标志物组合，其特征在于，所述生物标志物组合包括核苷酸序列如SEQ IDNO.1～8所示的小分子非编码RNA。

3.一种生物标志物组合，其特征在于，所述生物标志物组合包括核苷酸序列如SEQ IDNO.1～13所示的小分子非编码RNA。

4.一种如权利要求1～3任一项所述的生物标志物组合在制备预测胚胎质量的试剂盒中的应用。

5.一种用于检测生物标志物组合的试剂，其特征在于，所述试剂用于检测如权利要求1～3任一项所述的生物标志物组合的表达水平。

6.根据权利要求5所述的试剂，其特征在于，所述试剂为引物和/或探针。

7.一种如权利要求5～6任一项所述的试剂在制备预测胚胎质量的试剂盒中的应用。

8.一种胚胎质量预测模型的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括：

9.一种胚胎质量预测模型，其特征在于，所述胚胎质量预测模型由如权利要求8所述的方法构建得到。