【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药，具体涉及包载fret荧光探针的脂质体及其应用。
技术介绍
1、血脑屏障(blood-brain barrier，bbb)，是由脑微血管内皮细胞(brainmicrovascular endothelial cells，bmvec)及其细胞间紧密连接(tightjunction，tj)、毛细血管基底膜以及嵌入其中的周细胞、星形胶质细胞和狭小的细胞外间隙共同组成的一个严密结构。bbb作为一个生理性屏障，对物质的进入具有选择性，能够阻止大部分有害物质进入脑部，维持脑部内环境的稳定。但同时bbb也限制了药物进入脑部发挥对于脑部疾病的治疗作用。cn113880913a公开了由rvgp和r9共修饰的两种双重介导的脑靶向脂质体ptb-ssl(本专利技术采用rvgpr9-ssl表示)与rvgp-r9-ssl，是采用分子对接和粗粒化计算模拟手段，在原子及分子尺度层面进行研究获得的ptb修饰脂质体的结构，这种技术具有高效、成本低、准确性强的优势，可以分析递药系统中的分子相互作用，提供关键物理化学信息。但ptb-ssl与rvgp-r9-ssl在实际应用时能否有效的透过bbb，以及跨越bbb后脂质体的完整性等，将直接影响其进入脑部的浓度，以及到达病灶部位的制剂形式。因此，考察ptb-ssl与rvgp-r9-ssl的bbb渗透率以及跨越bbb的完整性，对评价其脑部药物递送效果具有重要意义。
2、目前建立的体外bbb模型主要包括以下四种：1)bmvec单层细胞模型；2)bmvec与星形胶质细胞共培养模型；3)bmvec、
技术实现思路
1、针对
技术介绍
中指出的难点问题，本专利技术提供包载fret荧光探针的脂质体及其应用，通过在双重介导脑靶向脂质体中包载fret对(dio+dii)，并利用fret效用，可以精准评价脑靶向脂质体的bbb渗透率和跨越bbb完整性，该方法为后续脑靶向脂质体制剂脑部递药能力的评价提供了一种新思路。
2、为达到以上技术目的，本申请采用的技术方案如下：
3、第一方面，本专利技术提供包载fret荧光探针的脂质体，所述fret荧光探针为dio和/或dii，并且所述fret荧光探针与脂质体中大豆磷脂的摩尔比为1：200。
4、优选地，所述脂质体为脑靶向脂质体，优选为rvgpr9-ssl或者rvgp-r9-ssl。
5、第二方面，本专利技术提供第一方面所述的脂质体的制备方法，所述制备方法包括：按照脂质体的基材配料，将所述基材、所述fret荧光探针与溶剂混合，然后除去溶剂至脂质体形成。
6、优选地，所述溶剂选自氯仿、丙酮、甲醇、乙醇中的至少一种。
7、优选地，所述脂质体为包载fret荧光探针的rvgpr9-ssl，所述制备方法包括：将大豆磷脂、胆固醇、dspe-peg2000、dspe-peg2000-rvgpr9和所述fret荧光探针混合，然后除去溶剂至脂质体形成；进一步优选地，大豆磷脂、胆固醇、dspe-peg2000、dspe-peg2000-rvgpr9的摩尔比为：100：50：6：2。
8、优选地，所述dspe-peg2000-rvgpr9的制备方法包括：
9、步骤1，将rvgpr9多肽和dspe-peg2000-nhs分别配制成溶液，将dspe-peg2000-nhs溶液加入rvgpr9多肽溶液中，加毕后进一步加入dmap，室温下进行遮光反应；
10、步骤2，反应结束后，进行透析提纯，将提纯后的产物先预冻，然后冷冻干燥，获得所述dspe-peg2000-rvgpr9；
11、进一步优选地，所述步骤1中，dspe-peg2000-nhs与rvgpr9多肽的摩尔比为1:2；和/或，避光反应30～40h。
12、优选地，所述脂质体为包载fret荧光探针的rvgp-r9-ssl，所述制备方法包括：将大豆磷脂、胆固醇、dspe-peg2000、dspe-peg2000-rvgp、dspe-peg1000-r9和所述fret荧光探针混合，然后除去溶剂至脂质体形成；优选地，大豆磷脂、胆固醇、dspe-peg2000、dspe-peg2000-rvgp、dspe-peg1000-r9的摩尔比为：95～105：45～55：1～3：1～3：3～5。
13、优选地，所述dspe-peg2000-rvgp的制备方法包括：
14、步骤1，将rvgp多肽和dspe-peg2000-nhs分别配制成溶液，并将rvgp多肽溶液的ph调节成7.4，然后将dspe-peg2000-nhs溶液加入调完ph的rvgp多肽溶液中，加毕后进一步加入dmap，室温下进行遮光反应；优选地，dspe-peg2000-nhs与rvgp多肽的摩尔比为1:2；和/或，避光反应30～40h；
15、步骤2，反应结束后，进行透析提纯，将提纯后的产物先预冻，然后冷冻干燥，获得所述dspe-peg2000-rvgp；
16、和/或，所述dspe-peg1000-r9的制备方法包括：
17、步骤1，将r9多肽和dspe-peg1000-nhs分别配制成溶液，并将r9多肽溶液的ph调节成7.4，然后将dspe-peg1000-nhs溶液加入调完ph的r9多肽溶液中，加毕后进一步加入dmap，室温下进行遮光反应；优选地，dspe-peg1000-nhs与r9多肽的摩尔比为1:2；和/或，避光反应30～40h；
18、步骤2，反应结束后，进行透析提纯，将提纯后的产物先预冻，然后冷冻干燥，获得所述dspe-peg1000-r9。
19、第三方面，本专利技术提供第一方面所述的脂质体在制备药物靶向能力评价试剂盒上的应用，所述试剂盒是基于fret技术进行药物靶向能力评价。
20、第四方面，本专利技术提供药物靶向能力评价试剂盒，包括：第一方面所述的脂质本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.包载FRET荧光探针的脂质体，其特征在于，所述FRET荧光探针为DiO和/或DiI，并且所述FRET荧光探针与脂质体中大豆磷脂的摩尔比为1：200。
2.根据权利要求1所述的脂质体，其特征在于，所述脂质体为脑靶向脂质体，优选为RVGPR9-SSL或者RVGP-R9-SSL。
3.权利要求1或2所述的脂质体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：按照脂质体的基材配料，将所述基材、所述FRET荧光探针与溶剂混合，然后除去溶剂至脂质体形成。
4.根据权利要求3所述制备方法，其特征在于，所述溶剂选自氯仿、丙酮、甲醇、乙醇中的至少一种。
5.根据权利要求3或4所述的制备方法，其特征在于，所述脂质体为包载FRET荧光探针的RVGPR9-SSL，所述制备方法包括：将大豆磷脂、胆固醇、DSPE-PEG2000、DSPE-PEG2000-RVGPR9和所述FRET荧光探针混合，然后除去溶剂至脂质体形成；优选地，大豆磷脂、胆固醇、DSPE-PEG2000、DSPE-PEG2000-RVGPR9的摩尔比为：100：50：6：2。
6.根
7.根据权利要求3或4所述的制备方法，其特征在于，所述脂质体为包载FRET荧光探针的RVGP-R9-SSL，所述制备方法包括：将大豆磷脂、胆固醇、DSPE-PEG2000、DSPE-PEG2000-RVGP、DSPE-PEG1000-R9和所述FRET荧光探针混合，然后除去溶剂至脂质体形成；优选地，大豆磷脂、胆固醇、DSPE-PEG2000、DSPE-PEG2000-RVGP、DSPE-PEG1000-R9的摩尔比为：95～105：45～55：1～3：1～3：3～5。。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述DSPE-PEG2000-RVGP的制备方法包括：
9.权利要求1或2所述的脂质体在制备药物靶向能力评价试剂盒上的应用，所述试剂盒是基于FRET技术进行药物靶向能力评价。
10.药物靶向能力评价试剂盒，其特征在于，包括：权利要求1或2所述的脂质体和细胞模型。
11.药物靶向能力评价方法，其特征在于，是采用权利要求10所述的试剂盒，所述评价方法包括：
12.根据权利要求11所述的评价方法，其特征在于，所述脂质体为包载FRET荧光探针的RVGPR9-SSL或者RVGP-R9-SSL。
...【技术特征摘要】
1.包载fret荧光探针的脂质体，其特征在于，所述fret荧光探针为dio和/或dii，并且所述fret荧光探针与脂质体中大豆磷脂的摩尔比为1：200。
2.根据权利要求1所述的脂质体，其特征在于，所述脂质体为脑靶向脂质体，优选为rvgpr9-ssl或者rvgp-r9-ssl。
3.权利要求1或2所述的脂质体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：按照脂质体的基材配料，将所述基材、所述fret荧光探针与溶剂混合，然后除去溶剂至脂质体形成。
4.根据权利要求3所述制备方法，其特征在于，所述溶剂选自氯仿、丙酮、甲醇、乙醇中的至少一种。
5.根据权利要求3或4所述的制备方法，其特征在于，所述脂质体为包载fret荧光探针的rvgpr9-ssl，所述制备方法包括：将大豆磷脂、胆固醇、dspe-peg2000、dspe-peg2000-rvgpr9和所述fret荧光探针混合，然后除去溶剂至脂质体形成；优选地，大豆磷脂、胆固醇、dspe-peg2000、dspe-peg2000-rvgpr9的摩尔比为：100：50：6：2。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述dspe-peg2000-rvgpr9的制备方法包...
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