【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种具有增强外源基因表达水平的核酸分子及其应用。
技术介绍
1、重组蛋白是通过载体将目的蛋白的基因引入宿主细胞，通过宿主细胞的生物机制使其表达出特定蛋白。目前已开发了各种载体系统以及宿主细胞，包括原核生物，如大肠杆菌和真核生物（例如酵母菌、昆虫细胞和哺乳动物细胞），以产生接近其自然状态的广谱重组蛋白，促进生化研究、工业催化、食品加工、疫苗和治疗等方面的发展。
2、高质量的重组蛋白是研究工作和药物开发的重要起始材料。由于蛋白质本身的复杂性，蛋白质表达和纯化往往具有挑战性。蛋白质的某些序列或结构特征可能影响重组蛋白产品的产量和稳定性。大多数蛋白质是脆弱分子，在表达和纯化过程中易受到环境压力的影响。因此，重组蛋白表达往往需要精心规划和工艺优化，以确保重组蛋白的高产量，并尽量减少质量受损。
3、在瞬转表达中，由于细胞中的外源基因会随着细胞分裂而丢失，目的蛋白表达只能维持几天到十几天时间，存在表达量低的缺点。那么如何提高瞬时转染的表达量，用最短的时间，最低的成本获得更多的重组蛋白用于药效，制剂研究，成为亟待解决的问题。
技术实现思路
1、本专利技术旨在构建一种含有具有增强外源基因表达水平的核酸分子，利用塞姆利基森林脑炎病毒（semliki forest virus，sfv）的capsid蛋白n端前34个氨基酸（后简称c肽），从而提高瞬转表达系统中重组蛋白。该翻译增强子的氨基酸序列为：mnyiptqtfygrrwrprpaarpwplqatp
2、为了实现上述目的，本专利技术第一个方面公开了一种增强外源基因表达水平的核酸分子，
3、其中所述核酸分子的核苷酸序列如seq id no：1、2、3或4所示。
4、其中所述核酸分子表达蛋白的氨基酸序列如seq id no：5所示。
5、本专利技术第二个方面公开了一种重组表达载体，所述重组表达载体包括上述的核酸分子和目的蛋白基因。
6、其中，所述重组表达载体还包括dna载体、rna载体、质粒、转座子载体、脂质体、crispr/cas9载体或病毒载体。
7、所述目的蛋白基因中还连接有蛋白标签，所述蛋白标签优选为his标签。
8、所述核酸分子和目的蛋白基因之间还连接有2a肽；所述2a肽的核苷酸序列如seqid no：6所示。
9、ggcagcggcgccaccaacttcagcctgctgaagcaagccggcgacgtggaggagaaccccggcccc（seq id no：6）。
10、本专利技术第三个方面公开了一种重组宿主细胞，将上述的重组表达载体构建进入宿主细胞的基因组中，使得目的蛋白基因在宿主细胞中表达。
11、本专利技术第四个方面公开了上述的核酸分子、重组表达载体或宿主细胞在生产重组蛋白系统中的应用。
12、其中，所述应用生产重组蛋白系统具体为293表达系统。
13、本专利技术所制备得到的重组表达载体转染进入293体系中，可提高外源目的蛋白在瞬转系统中的表达量。
14、本专利技术在c肽和目的蛋白之间插入密码子优化的2a肽，通过2a肽自我切割分离c肽和目的蛋白，得到完整的目的蛋白；避免外源插入的基因对目的蛋白原有功能的影响。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种增强外源基因表达水平的核酸分子，其特征在于，
2.如权利要求1所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子表达蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示。
3.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包括权利要求1所述的核酸分子和目的蛋白基因。
4.如权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体还包括DNA载体、RNA载体、质粒、转座子载体、脂质体、CRISPR/Cas9载体或病毒载体。
5.如权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于，所述目的蛋白基因中还连接有蛋白标签，所述蛋白标签选为His标签。
6.如权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于，所述核酸分子和目的蛋白基因之间还连接有2A肽；所述2A肽的核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示。
7.一种重组宿主细胞，将权利要求3-6任一项所述的重组表达载体构建进入宿主细胞的基因组中，使得目的蛋白基因在宿主细胞中表达。
8.如权利要求1-2任一项所述的核酸分子、权利要求3-6任一项所述的重组表达载体或权利要求7所述的宿主细
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述应用生产重组蛋白系统为293表达系统。
...【技术特征摘要】
1.一种增强外源基因表达水平的核酸分子，其特征在于，
2.如权利要求1所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子表达蛋白的氨基酸序列如seq id no：5所示。
3.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包括权利要求1所述的核酸分子和目的蛋白基因。
4.如权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体还包括dna载体、rna载体、质粒、转座子载体、脂质体、crispr/cas9载体或病毒载体。
5.如权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于，所述目的蛋白基因中还连接有蛋白标签，所述蛋白标...
【专利技术属性】
技术研发人员：丁玥，朱双光，陈柳华，肖志华，
申请(专利权)人：上海奥浦迈生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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