【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，特别涉及一种军团菌培养检测试剂盒及其应用。
技术介绍
1、军团菌是一种革兰氏阴性杆菌，广泛存在于自然环境和人工环境的水体、土壤中，是一种具有高度爆发流行性的呼吸道感染致病菌，人体吸入污染有军团菌的气溶胶“饮用污染有军团菌的水或创面接触污染水源等均可能引发军团菌病。
2、军团菌病是伴随着人类社会进步和经济的发展而出现的一种新发传染性疾病，已经成为现代化城市发展中所面临的一个重要公共卫生问题，世界上许多国家和地区相继有该病散发的报道，我国大部分地区均报道过军团菌病例，由于缺乏系统的病原学和流行病学调查资料，人群军团菌感染现况和军团菌病流行情况不明。近年研究结果显示，呼吸道或肺部疾患人群中军团菌感染率为在6.0％～17.5％。
3、据各地对公共场所目标人群的血清中igm抗体检测，公共场所目标人群的抗体阳性率为4.63％，重点行业从业人员为12.70％，甚至有报道暴露人群的阳性率能高达53％，说明军团菌已对重点行业从业人员构成了潜在威胁。对公共场所定期清理、监管，从源头控制生物性污染，对降低军团菌感染风险有巨大意义。
4、目前用于军团病实验室诊断的方法有：在培养基上分离微生物、尿液中抗原检测、显微镜检查、细菌脱氧核糖核酸(dna)检测和使用配对血清学。
5、尿抗原试验和痰液培养或支气管肺泡灌洗液是对军团菌最合适的临床试验。还应对在爆发期间可能暴露于军团菌的患者进行军团病检测，包括培养。
6、军团菌培养通常是最指定的检测方法，具有较高的特异性，尽管培养的敏感性
7、目前军团菌肺炎诊断的金标准是细菌分离培养阳性，特异性100％，敏感性50％～70％。军团菌仅能在特殊培养基上生长，环境样本的分离率高达50％以上，而生物样本培养法检测阳性率与病情的严重程度有关，在轻度患者中军团菌检出率15％～25％；重症合并呼吸衰竭的病人中军团菌检出率>90％。
8、目前培养法的缺点是：易受标本采集质量、操作技术的影响，分离效果差，阳性率不一致；费时较长，约7～10天；培养基价格较贵。这些弊端导致临床诊断军团菌肺炎存在一定困难。具体地：
9、1)jp2021090403a中介绍一种添加环糊精的培养基，其介绍可以取代活性炭或血清的作用，但是对目的菌生长促进及样本中目的菌的检出并没有促进作用；
10、2)cn101643713的军团菌选择性分离培养基中虽然添加有指示剂，但是其是在活性炭平板的基础上添加的，没有促进目的菌的生长，对检出没有促进作用；
11、3)cn112888790a中介绍了一款无碳培养基，但是该培养基包括：血清，其中血清的浓度为1％～35％。
12、对于培养，现有培养技术的培养基为添加活性炭平板，无显色功能，临床分离率低，非目的菌抑制能力效果不好。添加血清或bsa的无活性炭平板，成本相对较高。采用环糊精替换血清或活性炭的平板只是利用环糊精的吸附作用，解除代谢物对军团菌的抑制，对样本分离并没有明显作用，尤其是呼吸道样本中物质对军团菌的抑制作用的解除。
13、另一方面，对于样本前处理，国标上虽有盐酸样本前处理试剂，但是盐酸处理对军团菌影响较大，会影响军团菌的检出，且不具备消化功能，被粘液包括的军团菌不容易被释放出来，影响目的菌的检出。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术提供了一种军团菌培养检测试剂盒及其应用，其分离军团菌效果好，灵敏度高，培养时间短，抑菌性强，杂菌影响少。本专利技术无需添加活性炭和动物血或血清，菌落显色，呈蓝灰色或蓝色，容易观察，菌落易于区分。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、本专利技术提供了军团菌培养基，包括缓冲试剂、浸粉、氨基酸、金属离子、碳水化合物、胨、酶、抗生素、指示剂；
4、不包括：
5、(1)、血液；和
6、(2)、血清；和
7、(3)、炭；和
8、(4)、活性炭；
9、所述碳水化合物至少包括环糊精；
10、所述氨基酸至少包括半胱氨酸。
11、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述军团菌培养基的所述缓冲试剂包括aces、mops、磷酸氢二钾、柠檬酸钾中至少一种。
12、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述军团菌培养基的所述浸粉包括酵母浸粉。
13、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述军团菌培养基的所述氨基酸包括甘氨酸、丝氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸中至少一种。
14、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述军团菌培养基的所述金属离子包括铁离子、镁离子中至少一种。
15、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述军团菌培养基的所述碳水化合物还包括丙酮酸钠、α-酮戊二酸、淀粉、甘露醇中至少一种。
16、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述军团菌培养基的所述胨包括动物蛋白胨、植物蛋白胨中至少一种。
17、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述军团菌培养基的所述酶包括辅酶i、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶中至少一种。
18、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述军团菌培养基的所述抗生素包括万古霉素、替考拉宁、林可霉素、杆菌肽、头孢磺啶钠、多粘菌素、两性霉素中至少一种。
19、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述军团菌培养基的所述指示剂包括溴甲酚紫、溴百里香酚蓝中至少一种。
20、在本专利技术的一些具体实施方案中，以重量份计，上述军团菌培养基的所述aces为5～15份，所述mops为5～15份，所述磷酸氢二钾为0.05～2份，所述柠檬酸钾为0.1～0.5份，所述酵母浸粉为5～15份，所述半胱氨酸为0.1～1份，所述甘氨酸为1～10份，所述丝氨酸为0.2～5份，所述酪氨酸为0.2～5份，所述苯丙氨酸为0.2～5份，所述铁离子为0.06～0.4份硝酸铁，所述镁离子为0.05～0.2份氯化镁，所述丙酮酸钠为1～5份，所述α-酮戊二酸为0.2～2份，所述淀粉为1～10份，所述甘露醇为1～5份，所述胨为1～10份，所述辅酶i为0.002～0.02份，所述万古霉素为0.0001～0.01份，所述替考拉宁为0.0001～0.01份，所述林可霉素为0.0001～0.01份，所述头孢磺啶钠为0.001～0.01份，所述两性霉素为0.001～0.02份，所述溴甲酚紫为0.01～0.1份，所述溴百里香酚蓝为0.001～0.05份；
21、以酶活性计，所述过氧化氢酶为5000～50000iu，所述超氧化物歧化酶为5000～50000iu，所述杆菌肽为500～3000iu，所述多粘菌素为1000～20000iu本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.军团菌培养基，其特征在于，包括缓冲试剂、浸粉、氨基酸、金属离子、碳水化合物、胨、酶、抗生素、指示剂；
2.如权利要求1所述的军团菌培养基，其特征在于，包括：
3.如权利要求2所述的军团菌培养基，其特征在于，以重量份计，所述ACES为5～15份，所述MOPS为5～15份，所述磷酸氢二钾为0.05～2份，所述柠檬酸钾为0.1～0.5份，所述酵母浸粉为5～15份，所述半胱氨酸为0.1～1份，所述甘氨酸为1～10份，所述丝氨酸为0.2～5份，所述酪氨酸为0.2～5份，所述苯丙氨酸为0.2～5份，所述铁离子为0.06～0.4份硝酸铁，所述镁离子为0.05～0.2份氯化镁，所述丙酮酸钠为1～5份，所述α-酮戊二酸为0.2～2份，所述淀粉为1～10份，所述甘露醇为1～5份，所述胨为1～10份，所述辅酶I为0.002～0.02份，所述万古霉素为0.0001～0.01份，所述替考拉宁为0.0001～0.01份，所述林可霉素为0.0001～0.01份，所述头孢磺啶钠为0.001～0.01份，所述两性霉素为0.001～0.02份，所述溴甲酚紫为0.01～0.1份，所述溴百里
4.如权利要求1至3任一项所述的军团菌培养基，其特征在于，还包括琼脂。
5.如权利要求1至4任一项所述的军团菌培养基，其特征在于，pH值为6.5～7.5。
6.如权利要求1至5任一项所述的军团菌培养基的制备方法，其特征在于，包括将所述缓冲试剂、所述浸粉、所述氨基酸、所述金属离子、所述碳水化合物、所述胨、所述酶、所述抗生素、所述指示剂混合，制备成固体培养基，获得军团菌培养基。
7.试剂盒，其特征在于，包括样本前处理试剂和权利要求1至5任一项所述的军团菌培养基；
8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，包括：
9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，以重量份计，所述柠檬酸为10～80份，所述乳酸为10～40份，所述氯化钾为10～15份，所述TCEP为1～4份，所述DTT为0.1～1份，所述硫脲为0.2～4份。
10.非疾病诊断或诊断目的的军团菌的分离培养方法，其特征在于，基于权利要求1至5任一项所述的军团菌培养基或权利要求7至9任一项所述的试剂盒培养。
...【技术特征摘要】
1.军团菌培养基，其特征在于，包括缓冲试剂、浸粉、氨基酸、金属离子、碳水化合物、胨、酶、抗生素、指示剂；
2.如权利要求1所述的军团菌培养基，其特征在于，包括：
3.如权利要求2所述的军团菌培养基，其特征在于，以重量份计，所述aces为5～15份，所述mops为5～15份，所述磷酸氢二钾为0.05～2份，所述柠檬酸钾为0.1～0.5份，所述酵母浸粉为5～15份，所述半胱氨酸为0.1～1份，所述甘氨酸为1～10份，所述丝氨酸为0.2～5份，所述酪氨酸为0.2～5份，所述苯丙氨酸为0.2～5份，所述铁离子为0.06～0.4份硝酸铁，所述镁离子为0.05～0.2份氯化镁，所述丙酮酸钠为1～5份，所述α-酮戊二酸为0.2～2份，所述淀粉为1～10份，所述甘露醇为1～5份，所述胨为1～10份，所述辅酶i为0.002～0.02份，所述万古霉素为0.0001～0.01份，所述替考拉宁为0.0001～0.01份，所述林可霉素为0.0001～0.01份，所述头孢磺啶钠为0.001～0.01份，所述两性霉素为0.001～0.02份，所述溴甲酚紫为0.01～0.1份，所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨咏康，张晨阳，王则宇，吴旭晓，李倩倩，杨红云，付光宇，李彬，吴学炜，
申请(专利权)人：郑州安图生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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