【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物检测，具体涉及一种基于pcr的单管多重快速检测样品中单纯疱疹病毒1、单纯疱疹病毒2和梅毒螺旋体的试剂盒及其用途。
技术介绍
1、每年全球新增超过3.4亿例性传播疾病(stis)病例。梅毒螺旋体(treponemapallidum，tp)、单纯疱疹病毒1(herpes simplex virus1，hsv-1)、单纯疱疹病毒2(herpessimplex virus 2，hsv-2)是造成生殖器、肛周及口咽区域溃疡的主要病原体。这些生殖器溃疡不仅对患者的健康造成直接影响，还显著增加了人类免疫缺陷病毒(hiv)的传播风险。因此，准确识别这些溃疡的病原体对于降低hiv感染的风险至关重要。梅毒的诊断主要依赖于临床表现和血清学检测方法，但由于抗体反应窗口期和再感染等因素，其有效性受到限制。虽然传统的细胞培养和血清学检测用于单纯疱疹病毒的诊断，近年来聚合酶链反应(pcr)技术的发展显著提高了病原体诊断的速度和敏感性，使得在单个样本中同时检测多种病原体成为可能。
2、尽管pcr技术已广泛应用于hsv-2的诊断，梅毒的核酸检测方法在临床实践中的应用仍相对有限。目前的单一病原体核酸检测通常需要独立的拭子，且梅毒的拭子收集需在高度临床怀疑的情况下进行，这导致了诊断和治疗时间的延误。需要开发一种多重荧光pcr检测试剂盒，旨在同时诊断不同类型皮损中的tp、hsv-1和hsv-2，以解决目前诊断过程中的诸多瓶颈，提高临床诊断的准确性和效率。
3、多重pcr技术虽然能够在单一次的pcr反应体系中加入多个目标dn
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的之一在于提供一种多重荧光pcr的引物探针组合，本专利技术的目的之二在于提供该多重荧光pcr的引物探针组合在制备同时检测梅毒螺旋体、单纯疱疹病毒1、单纯疱疹病毒2试剂或试剂盒中的应用。本专利技术的目的之三在于提供包含该引物探针组合的试剂或试剂盒。
2、为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
3、1.一种多重荧光pcr的引物探针组合，包括：引物或其组合；和/或探针或其组合；(1)所述引物或其组合，具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：
4、ⅰ、具有seq id no：1～seq id no：6任意所示的核苷酸序列；
5、或ⅱ、具有seq id no：1～seq id no：6任意所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列且具有seq id no：1～seq id no：6任意所示的核苷酸序列功能相同的核苷酸序列；
6、或iii、与seq id no：1～seq id no：6任意所示的核苷酸序列具有至少90％同源性的序列且具有seq id no：1～seq id no：6任意所示的核苷酸序列功能相同的核苷酸序列；
7、或iv、如ⅰ、ⅱ或iii所示序列的互补序列；
8、(2)所述探针或其组合，具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：
9、v、具有seq id no：7～seq id no：9任意所示的核苷酸序列；
10、或vi、具有seq id no：7～seq id no：9任意所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列且具有seq id no：7～seq id no：9任意所示的核苷酸序列功能相同的核苷酸序列；
11、或vii、与seq id no：7～seq id no：9任意所示的核苷酸序列具有至少90％同源性的序列且具有seq id no：7～seq id no：9任意所示的核苷酸序列功能相同的核苷酸序列；
12、或viii、如v、vi或vii所示序列的互补序列。
13、进一步，所述探针或其组合中，探针序列的5’端连接有荧光报告基团，3’端连接有荧光淬灭基团。
14、进一步，所述荧光报告基团选自fam、vic、cy5、hex、joe、rox、texas red、tamra、cy3。
15、进一步，所述荧光淬灭基团包括选自bhq-1、bhq-2、bhq-3、mgb。
16、进一步，所述的多重荧光pcr的引物探针组合中，还包括人源内标基因的特异性引物和探针。
17、进一步，所述人源内标基因选自g3pdh基因、actin基因、gapdh基因、β2微球蛋白基因、globin基因。
18、进一步，所述人源内标基因为g3pdh基因。
19、进一步，g3pdh基因的正向引物序列如seq id no:10所示，反向引物序列如seq idno:11所示；g3pdh基因检测探针的序列如seq id no:12所示。
20、技术方案二具体是上述任一项多重荧光pcr的引物探针组合在制备检测梅毒螺旋体、单纯疱疹病毒1、单纯疱疹病毒2的试剂或试剂盒中的应用。
21、技术方案三具体是检测梅毒螺旋体、单纯疱疹病毒1、单纯疱疹病毒2的试剂或试剂盒，包括如上述任一项所述的引物探针组合以及可接受的助剂。
22、进一步试剂或试剂盒中，各引物或探针浓度为0.1～1.0μm。
23、进一步试剂或试剂盒中，还包括pcr反应液，所述pcr反应液包括：5～15u dna聚合酶、0.1～5u udg酶、0.1～0.3mm datp、0.1～0.3mm dgtp、0.1～0.3mm dctp、0.2～0.6mmdutp、0.05％～2％v/v tween20、1％～2％v/v甘油、10～100mm三(羟甲基)甲基甘氨酸、1～8mm氯化镁。
24、进一步，还包括核酸释放剂，所述核酸释放剂包括10～100mm氢氧化钠、0.01％～2％w/v十二烷基磺酸钠、1％～8％v/vtween20。
25、进一步，还包括阳性质控品或/和阴性质控品；所述阳性质控品为梅毒螺旋体、单纯疱疹病毒1、单纯疱疹病毒2的克隆质粒混合；所述阴性质控品为不含有梅毒螺旋体、单纯疱疹病毒1、单纯疱疹病毒2的克隆质粒的试剂。
26、本专利技术的有益效果在于：本专利技术通过设计多个特异性引物进行实验验证，最终提供了一组可以同时在一个实验中同时检测梅毒螺旋体、单纯疱疹病毒1、单纯疱疹病毒2等多种病原体的引物和探针序列，一步实现多重pcr。该引物组避免了相互作用以及引物二聚体的形成，提高灵敏度和特异性，有望在临床实践中发挥重要作用，特别是在高风险人群的初步筛查和已有相关症状患者的快速诊断中，从而有效减少并发症和传播风险。该引物和探针序列组在对梅毒螺旋体和hsv检测时，和临床常见病原体沙眼衣原体、淋球菌、解脲脲原体、人巨细胞病毒、人类乳头瘤病毒16、人类乳头瘤病毒1本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种多重荧光PCR的引物探针组合，其特征在于，包括：引物或其组合；和/或探针或其组合；(1)所述引物或其组合，具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：
2.根据权利要求1所述的多重荧光PCR的引物探针组合，其特征在于，所述探针或其组合中，探针序列的5’端连接有荧光报告基团，3’端连接有荧光淬灭基团。
3.根据权利要求1所述的多重荧光PCR的引物探针组合，其特征在于，还包括人源内标基因的特异性引物和探针。
4.根据权利要求1所述的多重荧光PCR的引物探针组合，其特征在于，所述人源内标基因为G3PDH基因。
5.权利要求1-4任一项多重荧光PCR的引物探针组合在制备检测梅毒螺旋体、单纯疱疹病毒1、单纯疱疹病毒2的试剂或试剂盒中的应用。
6.检测梅毒螺旋体、单纯疱疹病毒1、单纯疱疹病毒2的试剂或试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1-4任一项所述的引物探针组合以及可接受的助剂。
7.根据权利要求6所述的试剂或试剂盒，其特征在于，各引物或探针浓度为0.1～1.0μM。
8.根据权利要求6所述的试剂或试剂盒
9.根据权利要求6所述的试剂或试剂盒，其特征在于，还包括核酸释放剂，所述核酸释放剂包括10～100mM氢氧化钠、0.01％～2％w/v十二烷基磺酸钠、1％～8％v/v Tween20。
10.根据权利要求6所述的试剂或试剂盒，其特征在于，还包括阳性质控品或/和阴性质控品；所述阳性质控品为梅毒螺旋体、单纯疱疹病毒1、单纯疱疹病毒2的克隆质粒混合；所述阴性质控品为不含有梅毒螺旋体、单纯疱疹病毒1、单纯疱疹病毒2的克隆质粒的试剂。
...【技术特征摘要】
1.一种多重荧光pcr的引物探针组合，其特征在于，包括：引物或其组合；和/或探针或其组合；(1)所述引物或其组合，具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：
2.根据权利要求1所述的多重荧光pcr的引物探针组合，其特征在于，所述探针或其组合中，探针序列的5’端连接有荧光报告基团，3’端连接有荧光淬灭基团。
3.根据权利要求1所述的多重荧光pcr的引物探针组合，其特征在于，还包括人源内标基因的特异性引物和探针。
4.根据权利要求1所述的多重荧光pcr的引物探针组合，其特征在于，所述人源内标基因为g3pdh基因。
5.权利要求1-4任一项多重荧光pcr的引物探针组合在制备检测梅毒螺旋体、单纯疱疹病毒1、单纯疱疹病毒2的试剂或试剂盒中的应用。
6.检测梅毒螺旋体、单纯疱疹病毒1、单纯疱疹病毒2的试剂或试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1-4任一项所述的引物探针组合以及可接受的助剂。
7.根据权利要求6所述的试剂或试剂...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨华，陈夏敏，崔玉峰，
申请(专利权)人：上海北昂医药科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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