【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药，具体涉及一种方柱翼手参八至十糖混合物及其制备方法和应用。
技术介绍
1、血栓栓塞是心血管疾病的主要病因之一，其治疗和预防依赖于抗凝药物的使用。目前临床上常用的抗凝药物包括肝素，但其来源和安全性问题引起了人们的关注。因此，研究和开发新的抗凝药物变得尤为重要。海参硫酸化多糖因其强效的抗凝血活性而受到研究者的关注。已有研究表明，海参硫酸化多糖通过激活血浆中的抗凝血酶或肝素辅助因子ii，抑制凝血因子的活性，发挥抗凝血作用。不同的硫酸化模式和硫酸基含量对海参硫酸化多糖的抗凝血活性有显著影响。此外，分子质量较低的海参硫酸化多糖寡糖片段具有更强且更安全的抗凝血活性。方柱翼手参(colochirus quadrangularis)是一种资源丰富且价格低廉的海参物种，其多糖的研究尚未见报道。从这类海参中提取硫酸化多糖，并制备低聚糖化合物，可能成为开发抗凝新药的重要途径。已有研究表明，从其他海参物种提取的硫酸化多糖具有显著的抗凝血活性，例如从stichopus monotuberculatus和apostichopusjaponicus提取的岩藻糖化糖胺聚糖(fg)。
2、综上所述，方柱翼手参的硫酸化多糖具有成为抗凝新药候选物质的潜力，其结构新颖、资源丰富，是值得进一步研究和开发的重要资源。未来的研究可能会集中在提取、分离、结构鉴定以及活性评估等方面，以期开发出更安全、更有效的抗凝药物。
技术实现思路
1、本专利技术旨在提供一种方柱翼手参八至十糖混合物及其制备方法和应用
2、为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案如下：
3、本专利技术提供了一种方柱翼手参八至十糖混合物，所述方柱翼手参八至十糖混合物的单糖组成包括n-乙酰氨基半乳糖、岩藻糖、葡萄糖醛酸或其糖醇、半乳糖、n-乙酰氨基葡萄糖、脱水塔罗糖及硫酸酯基；方柱翼手参八至十糖混合物结构如下：
4、
5、式中，a、b糖基中r1＝r3＝-so3na，r2＝h；
6、c、f、j糖基中r1＝r3＝-so3na，r＝h；
7、d糖基中r1＝r2＝r＝-so3na；
8、e、i糖基中r1＝r2＝h，r3＝-so3na；
9、g、h糖基中r2＝-so3na，r1＝r3＝h；
10、k糖基中r1＝-so3na，r2＝r3＝h。
11、优选的，a、b糖基占总侧链摩尔百分含量的30.8％-40.8％，l、m、n、o、p、q和c、f、j糖基构成的二糖侧链占总侧链摩尔百分含量的20％-30％，d糖基占总侧链摩尔百分含量的7.4％-13.4％，e、i糖基占总侧链含量的7.1％-13.1％，g、h糖基占总侧链含量的15.7％-25.7％，k糖基占总侧链含量的3.5％-5.5％。
12、优选的，a、b糖基为2,4-二-o-硫酸岩藻糖侧链，l、m、n、o、p、q包括硫酸半乳糖、硫酸乙酰氨基葡萄糖或硫酸乙酰氨基半乳糖中的一种或多种，c、f、j糖基为2,4-二-o-硫酸岩藻糖，d糖基为2,3,4-三-o-硫酸岩藻糖侧链，e、i糖基为4-o-硫酸岩藻糖侧链，g、h糖基为3-o-硫酸岩藻糖侧链，k糖基为2-o-硫酸岩藻糖侧链。
13、优选的，其是从方柱翼手参多糖解聚、分离获得的，以右旋糖酐标定的重均分子量为67.7-87.7kda，糖醛酸含量为10％-30％，硫酸酯基含量为10％-30％。
14、优选的，该方柱翼手参八至十糖混合物，分子量为2.0-3.5kda，硫酸酯基含量为10％-45％。
15、本专利技术还公开了一种所述方柱翼手参八至十糖混合物的制备方法，包括以下步骤：
16、s1、将方柱翼手参匀浆液或干粉加入木瓜蛋白酶中酶解，将酶解后的混悬液加入终浓度为0.1-1.0m的氢氧化钠溶液中碱解；
17、s2、等电点除蛋白、盐析醇沉得到方柱翼手参粗多糖提取物，采用阴离子交换柱层析纯化，收集1.0-2.0m氯化钠水溶液洗脱组分，反复醇沉、浓缩、冻干，得到方柱翼手参纯化多糖；
18、s3、将步骤s3得到的方柱翼手参纯化多糖加入80％的水合肼或一水合肼，在有或无硫酸肼下，60-100℃进行肼解，再加入1-6mph为1-4的亚硝酸水溶液，室温或冰浴条件下进行脱氨基解聚，反应后加入硼氢化钠还原，反复醇沉，离心，所得沉淀溶解后透析或超滤除盐、冻干得方柱翼手参多糖解聚产物；
19、s4、将步骤s3得到的方柱翼手参多糖解聚产物上凝胶柱层析柱分离，采用0.1或0.2m氯化钠水溶液洗脱，洗脱流速为5～15ml/h，2～8ml/管接收，采用苯酚硫酸法检测并绘制洗脱曲线，根据洗脱曲线合并各洗脱峰的流份，合并样品采用高效液相色谱法分析洗脱流份的分子量，合并八至十糖组分，脱盐、冻干，得到方柱翼手参八至十糖混合物。
20、优选的，凝胶柱为bio-gel p系列色谱柱p-6、p-10或sephadex g系列凝胶柱g-50、g-25中的一种。
21、本专利技术还公开了一种所述方柱翼手参八至十糖混合物在制备治疗和/或预防血栓性心血管疾病的药物中的应用。
22、一种药物制剂，包含所述方柱翼手参八至十糖混合物。
23、一种药物制剂，包括以所述方柱翼手参八至十糖混合物作为活性成分和药学上可接受的载体。
24、所述的药物制剂，包括如下剂型：注射用冻干粉针剂、注射用水溶液或口服液。
25、与现有技术相比，本专利技术具有如下优点和技术效果：
26、1.本专利技术公开的方柱翼手参八至十糖混合物，是一种结构组成新颖的寡糖化合物，含有2-o、3-o或4-o单硫酸取代的岩藻糖侧链，3-o-硫酸岩藻糖侧链含量较高(>20％)；含有结构新颖的二糖侧链，二糖侧链中含有2-o-硫酸半乳糖、4-o-硫酸半乳糖、2,3-二-o硫酸半乳糖、3,4-二-o硫酸半乳糖、4,6-二-o-硫酸乙酰氨基葡萄糖、4-o-硫酸乙酰氨基半乳糖等糖基，并且仅连接于2,4-二-o硫酸岩藻糖的o-3位；不含3,4-二-o硫酸取代的岩藻糖侧链。
27、2.本专利技术公开的方柱翼手参八至十糖混合物可显著延长活化部分凝血活酶时间(aptt)和凝血酶原时间(tt)，有效抑制内源性和共同凝血途径。这种药理特征不同于文献中报道的其他海参来源的寡糖，表明其在抗凝作用方面具有独特的优势。
28、下面通过附图和实施例，对本专利技术的技术方案做进一步的详细描述。
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1.一种方柱翼手参八至十糖混合物，其特征在于所述方柱翼手参八至十糖混合物的单糖组成包括N-乙酰氨基半乳糖、岩藻糖、葡萄糖醛酸或其糖醇、半乳糖、N-乙酰氨基葡萄糖、脱水塔罗糖及硫酸酯基；方柱翼手参八至十糖混合物结构如下：
2.根据权利要求1所述的方柱翼手参八至十糖混合物，其特征在于，a、b糖基占总侧链摩尔百分含量的30.8％-40.8％，l、m、n、o、p、q和c、f、j糖基构成的二糖侧链占总侧链摩尔百分含量的20％-30％，d糖基占总侧链摩尔百分含量的7.4％-13.4％，e、i糖基占总侧链含量的7.1％-13.1％，g、h糖基占总侧链含量的15.7％-25.7％，k糖基占总侧链含量的3.5％-5.5％。
3.根据权利要求1或2所述的方柱翼手参八至十糖混合物，其特征在于，a、b糖基为2,4-二-O-硫酸岩藻糖侧链，l、m、n、o、p、q包括硫酸半乳糖、硫酸乙酰氨基葡萄糖或硫酸乙酰氨基半乳糖中的一种或多种，c、f、j糖基为2,4-二-O-硫酸岩藻糖，d糖基为2,3,4-三-O-硫酸岩藻糖侧链，e、i糖基为4-O-硫酸岩藻糖侧链，g、h糖基为3-O-硫酸岩藻糖
4.根据权利要求1所述的方柱翼手参八至十糖混合物，其特征在于，其是从方柱翼手参多糖解聚、分离获得的，以右旋糖酐标定的重均分子量为67.7-87.7kDa，糖醛酸含量为10％-30％，硫酸酯基含量为10％-30％。
5.根据权利要求1所述的方柱翼手参八至十糖混合物，其特征在于，该方柱翼手参八至十糖混合物，分子量为2.0-3.5kDa，硫酸酯基含量为10％-45％。
6.一种如权利要求1-5任一所述的方柱翼手参八至十糖混合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
7.一种如权利要求1-5任一所述的方柱翼手参八至十糖混合物在制备治疗和/或预防血栓性心血管疾病的药物中的应用。
8.一种药物制剂，包含一种以上如权利要求1-5中任一项所述的方柱翼手参八至十糖混合物。
9.一种如权利要求8所述药物制剂，其特征在于，包括以所述方柱翼手参八至十糖混合物作为活性成分和药学上可接受的载体。
...【技术特征摘要】
1.一种方柱翼手参八至十糖混合物，其特征在于所述方柱翼手参八至十糖混合物的单糖组成包括n-乙酰氨基半乳糖、岩藻糖、葡萄糖醛酸或其糖醇、半乳糖、n-乙酰氨基葡萄糖、脱水塔罗糖及硫酸酯基；方柱翼手参八至十糖混合物结构如下：
2.根据权利要求1所述的方柱翼手参八至十糖混合物，其特征在于，a、b糖基占总侧链摩尔百分含量的30.8％-40.8％，l、m、n、o、p、q和c、f、j糖基构成的二糖侧链占总侧链摩尔百分含量的20％-30％，d糖基占总侧链摩尔百分含量的7.4％-13.4％，e、i糖基占总侧链含量的7.1％-13.1％，g、h糖基占总侧链含量的15.7％-25.7％，k糖基占总侧链含量的3.5％-5.5％。
3.根据权利要求1或2所述的方柱翼手参八至十糖混合物，其特征在于，a、b糖基为2,4-二-o-硫酸岩藻糖侧链，l、m、n、o、p、q包括硫酸半乳糖、硫酸乙酰氨基葡萄糖或硫酸乙酰氨基半乳糖中的一种或多种，c、f、j糖基为2,4-二-o-硫酸岩藻糖，d糖基为2,3,4-三-o-硫酸岩藻糖侧链，e、i糖基为4...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵龙岩，袁清霞，张雪冬，符洁雯，刘昕明，刘梓栋，钟声平，黄亮华，
申请(专利权)人：广西中医药大学，
类型：发明
国别省市：
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