【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，尤其涉及一种含有f（ab’）2片段的抗毒素血清的制备方法。
技术介绍
1、抗毒素血清，又称抗毒素或抗血清，是通过将动物（主要为马属动物）或人类免疫产生的血浆（血清）与相应的毒素或类毒素、细菌、病毒等结合后制成的免疫血浆。将动物来源的血浆经过猪胃蛋白酶消化、硫酸铵盐析和层析纯化后制得的免疫球蛋白制剂在临床上广泛用于治疗因有毒动物咬伤或蜇伤导致的中毒症状。如果患者能够在第一时间及时注射抗毒血清，生存的可能性将显著增加，同时为后续抢救和治疗赢得宝贵的时间。
2、然而，动物来源的抗毒素血清在治疗过程中具有两面性：一方面，它为患者提供了特异性抗毒素抗体，可有效中和体内相应的外毒素，发挥治疗和预防作用；另一方面，由于其本质上是异种蛋白，具有抗原性，可能刺激人体产生抗动物源血清蛋白的抗体。患者在首次接触这种异种蛋白后，如果再次接受类似的免疫血清注射，可能会因产生抗体导致超敏反应，即过敏反应。
技术实现思路
1、本专利技术的技术方案在于提供一种制备含有f(ab')2片段的抗毒素血清的方法，旨在解决在抗毒素血清生产过程中使用动物源胃蛋白酶所引入的异源蛋白及杂质难以彻底去除，导致过敏的问题。
2、为解决上述技术问题，本专利技术是这样实现的，一种含有f（ab’）2片段的抗毒素血清的制备方法，步骤包括：
3、s1、对重组链球菌免疫球蛋白g降解酶进行固定化处理，得到固定化酶层析柱，其中，所述重组链球菌免疫球蛋白g降解酶包括谷胱甘肽-s-转移酶标签和
4、s2、对免疫血浆进行初步处理，得到预处理抗体溶液；
5、s3、将所述预处理抗体溶液加入到固定化酶层析柱中，进行消化，消化完成后依次经过固定化谷胱甘肽亲和柱或镍亲和柱进行超滤、纯化以及溶液配制，得到抗毒素血清原液，所述抗毒素血清原液中包括f(ab')2片段，不包括fc片段、杂蛋白以及小分子杂质。
6、在本专利技术的一些实施例中，所述步骤s1包括：
7、s1.1、分别配制偶联溶液a和偶联溶液b；
8、s1.2、将nhs活化介质置于所述偶联溶液a中，进行洗涤，其中，所述nhs活化介质和所述偶联溶液a的体积比为1:15~30；
9、s1.3、将重组链球菌免疫球蛋白g降解酶置于所述偶联溶液b中，再加入洗涤后的nhs活化介质进行搅拌混合，得到混合溶液，其中，所述nhs活化介质与所述重组链球菌免疫球蛋白g降解酶的体积比为1:1~2；
10、s1.4、对所述混合溶液进行静置沉积，沉积完成后将上层清液去除，在所述混合溶液的沉淀中加入封闭液进行封闭操作，得到固定化酶，其中，封闭时间为2~4h，封闭温度为20~30℃；
11、s1.5、将所述固定化酶交替置于清洗液a和清洗液b，进行交替洗涤，其中，所述固定化酶和所述清洗液a的体积比为1:2~5，所述固定化酶和所述清洗液b的体积比为1:2~5；
12、s1.6、将洗涤完成后的所述固定化酶放置在层析柱中并加入保存液，得到固定化酶层析柱。
13、在本专利技术的一些实施例中，在所述步骤s1.4中，当沉积温度为20~30℃时，沉积时间为3~6h，当沉积温度为0~10℃时，沉积时间为12~20h。
14、在本专利技术的一些实施例中，所述偶联溶液a包括盐酸、醋酸、磷酸、甲酸中的至少一种，所述偶联溶液a的浓度为0.5~2mm；
15、所述偶联溶液b包括缓冲剂和碱性调节剂，所述缓冲剂包括碳酸氢钠、磷酸氢二钠、三乙醇胺中的至少一种，所述缓冲剂的浓度为0.05~0.5m，所述碱性调节剂包括氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠中的至少一种，所述碱性调节剂的浓度为0.1~1m，所述偶联溶液的ph为8~9；
16、所述封闭液包括盐酸三羟甲基氨基甲烷、碳酸氢钠-碳酸钠缓冲液、4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸缓冲液中的至少一种，所述封闭液的浓度为0.05~0.5m，所述封闭液的ph为8~9；
17、所述清洗液a包括碱性ph缓冲液和离子强度调节剂，所述碱性ph缓冲液包括盐酸三羟甲基氨基甲烷、碳酸氢钠-碳酸钠缓冲液、4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸缓冲液中的至少一种，所述碱性ph缓冲液的浓度为0.05~0.5m，所述离子强度调节剂包括氯化钾、氢氧化钠、氢氧化钾中的至少一种，所述离子强度调节剂的浓度为0.1~1m，所述清洗液a的ph为8~9；
18、所述清洗液b包括酸性ph缓冲液和离子强度调节剂，所述酸性ph缓冲液包括醋酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液中的至少一种，所述酸性ph缓冲液的浓度为0.05~0.5m，所述离子强度调节剂包括氯化钾、氢氧化钠、氢氧化钾中的至少一种，所述离子强度调节剂的浓度为0.1~1m，所述清洗液a的ph为3~4；
19、所述保存液包括中性缓冲剂和抑菌剂，所述中性缓冲剂包括磷酸盐缓冲盐溶液、3-（n-吗啡啉）丙磺酸缓冲液、盐酸三羟甲基氨基甲烷中的至少一种，所述中性缓冲剂的浓度为15~30mm，所述中性缓冲剂的ph为7~8，所述抑菌剂包括异丙醇、乙醇、苯扎氯铵中的至少一种，所述抑菌剂的浓度为10%~30%。
20、在本专利技术的一些实施例中，所述步骤s2包括：
21、s2.1、对免疫血浆依次进行过滤和离心操作，获取抗体清液；
22、s2.2、在所述抗体清液中加入酸性缓冲剂，进行搅拌混合，在搅拌过程中加入沉淀溶液，经过离心、过滤操作，得到抗体滤液，其中，所述抗体清液和所述酸性缓冲剂的体积比为1:2~4；
23、s2.3、在所述抗体滤液中加入缓冲剂，再滴加碱性溶液，得到抗体缓冲液，其中，所述抗体缓冲液的ph值为7~7.5，所述缓冲剂和所述抗体滤液的体积比为1:8~15；
24、s2.4、对所述抗体缓冲液进行冰浴，再加入蛋白质沉淀剂进行搅拌，搅拌完成后进行静置沉积，得到抗体沉积液；
25、s2.5、对所述抗体沉积液进行离心，分离所述抗体沉积液的清液和沉淀，在所述抗体沉积液的沉淀中加入稳定液，依次进行离心、过滤、超滤、浓缩，得到预处理抗体溶液，其中，所述稳定液和所述抗体沉积液的清液的体积比为1:8~15。
26、在本专利技术的一些实施例中，在步骤s2.3中，所述缓冲剂包括磷酸盐缓冲盐溶液、3-（n-吗啡啉）丙磺酸缓冲液、盐酸三羟甲基氨基甲烷中的至少一种，所述缓冲剂的浓度为0.05~0.5m，所述缓冲剂的ph为7~8；
27、所述碱性溶液包括氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸氢钠中的至少一种，所述碱性溶液的浓度为1~3m；
28、在步骤s2.4中，所述蛋白质沉淀剂包括硫酸铵、异丙醇、聚乙二醇中的至少一种，所述蛋白质沉淀剂的浓度为250~300g/l；
29、在步骤s2.5中，所述稳定液包括磷酸盐缓冲盐溶液、碳酸氢钠缓冲液、柠檬酸缓冲液中的至少一种，所述稳定液的浓度为0.005~0.05m。
30、在本专利技术的一些实施例中，在所述步骤s2本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种含有F（ab’）2片段的抗毒素血清的制备方法，其特征在于，步骤包括：
2.根据权利要求1所述的一种含有F（ab’）2片段的抗毒素血清的制备方法，其特征在于，所述步骤S1包括：
3.根据权利要求2所述的一种含有F（ab’）2片段的抗毒素血清的制备方法，其特征在于，在所述步骤S1.4中，当沉积温度为20~30℃时，沉积时间为3~6h，当沉积温度为0~10℃时，沉积时间为12~20h。
4.根据权利要求2所述的一种含有F（ab’）2片段的抗毒素血清的制备方法，其特征在于，所述偶联溶液A包括盐酸、醋酸、磷酸、甲酸中的至少一种，所述偶联溶液A的浓度为0.5~2mM；
5.根据权利要求1所述的一种含有F（ab’）2片段的抗毒素血清的制备方法，其特征在于，所述步骤S2包括：
6.根据权利要求5所述的一种含有F（ab’）2片段的抗毒素血清的制备方法，其特征在于，
7.根据权利要求5所述的一种含有F（ab’）2片段的抗毒素血清的制备方法，其特征在于，在所述步骤S2.2中，所述沉淀溶液包括酸性调节剂和沉淀剂，所述酸性调节
8.根据权利要求1所述的一种含有F（ab’）2片段的抗毒素血清的制备方法，其特征在于，所述步骤S3包括：
9.根据权利要求8所述的一种含有F（ab’）2片段的抗毒素血清的制备方法，其特征在于，在所述步骤S3中，所述平衡溶液包括注射用水、去离子水、纯水、甘油中的至少一种；
...【技术特征摘要】
1.一种含有f（ab’）2片段的抗毒素血清的制备方法，其特征在于，步骤包括：
2.根据权利要求1所述的一种含有f（ab’）2片段的抗毒素血清的制备方法，其特征在于，所述步骤s1包括：
3.根据权利要求2所述的一种含有f（ab’）2片段的抗毒素血清的制备方法，其特征在于，在所述步骤s1.4中，当沉积温度为20~30℃时，沉积时间为3~6h，当沉积温度为0~10℃时，沉积时间为12~20h。
4.根据权利要求2所述的一种含有f（ab’）2片段的抗毒素血清的制备方法，其特征在于，所述偶联溶液a包括盐酸、醋酸、磷酸、甲酸中的至少一种，所述偶联溶液a的浓度为0.5~2mm；
5.根据权利要求1所述的一种含有f（ab’）2片段的抗毒素血清的制备...
【专利技术属性】
技术研发人员：姚晓东，刘姣，徐凯，沈光夫，肖聪，贺云娇，王鹏，敬玥，季冲，
申请(专利权)人：江西生物制品研究所股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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