【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子生物，具体而言，涉及一种用于her2基因扩增检测的质控品或参考品的制备方法及应用。
技术介绍
1、乳腺癌是全世界女性最常见的癌症，约15％-20％的病例以her2过表达或扩增为特征。her2基因(人类表皮生长因子受体-2，human epidermal growth factor receptor-2)位于染色体17q21，其编码产物为185kd的跨膜受体样蛋白，具有酪氨酸蛋白激酶活性。在人体中，her2基因扩增引起her2蛋白受体的过表达会促进细胞的生长和增殖从而导致肿瘤发生，同时也会抑制细胞的凋亡致化疗耐药，诱导血管新生，提高细胞运动能力增强肿瘤的浸润转移作用。因此her2是肿瘤免疫治疗研究中的一个重要靶分子。研究表明20％～30％的原发性浸润性乳腺癌有her2基因的扩增/过度表达，并有大约30％的乳腺癌中出现her2基因过度表达，并与患者预后较差相关。her2过度表达的乳腺癌患者病情进展迅速，化疗缓解期短，内分泌治疗效果差，无病生存和总生存率低。
2、近几十年来，随着her2靶向药物治疗的引入，主要有曲妥珠单抗、帕妥珠单抗、抗体-药物偶联物和酪氨酸激酶抑制剂，患者预后因此得到显著改善。her2检测结果不仅涉及患者是否适合针对her2的靶向治疗(曲妥珠单抗等)，并且对内分泌治疗，化疗方案的选择及预后评估起指导作用。正确检测和评估her2蛋白表达和基因扩增状态对临床治疗和预后判断至关重要。
3、临床常用免疫组织化学(ihc)法检测her2蛋白的表达水平，原位杂交(ish)法检测her2
4、随着基于数字pcr技术的her2基因扩增检测方法的涌现，现需要相应的质控品来评估检测方法的准确性等性能。目前细胞系制备的质控品，成本高，且需要养细胞，质控品制备流程复杂，且不一定能拿到预期的拷贝数的细胞系原材料。
5、鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种用于her2基因扩增检测的质控品或参考品的制备方法及应用以解决上述技术问题。
2、本专利技术是这样实现的：
3、第一方面，本专利技术提供了一种用于her2基因扩增检测的质控品的制备方法，其包括如下步骤：
4、制备阴性质控品：对包括her2基因片段和参照基因片段的第一质粒进行酶切，并对酶切产物进行拷贝数定量，制得阴性质控品；其中，第一质粒上her2基因片段与参照基因片段的拷贝数比例为1:1，且her2基因片段的两端和参照基因片段的两端均具有酶切位点；
5、制备阳性质控品：对包括her2基因片段和参照基因片段的第二质粒进行酶切，并对酶切产物进行拷贝数定量，制得阳性质控品；其中，第二质粒上her2基因片段的拷贝数与参照基因片段的拷贝数比例至少为2:1，且在第二质粒上，每个her2基因片段的两端以及参照基因片段的两端均具有酶切位点；
6、参照基因为：位于人17号染色体上的管家基因。
7、第二方面，本专利技术还提供了一种用于her2基因扩增检测的参考品的制备方法，其包括如下步骤：
8、取上述用于her2基因扩增检测的质控品的制备方法制备的阴性质控品和阳性质控品按照预设体积比例混合；
9、在本专利技术应用较佳的实施方式中，将按照预设体积比例混合后的混合液进行稀释。
10、第三方面，本专利技术还提供了用于her2基因扩增检测的质控品的制备方法制备的质控品或上述用于her2基因扩增检测的参考品的制备方法的参考品在制备her2基因扩增检测试剂盒或评估her2基因检测方法性能中的应用。
11、第四方面，本专利技术还提供了一种试剂盒，其包括上述的用于her2基因扩增检测的质控品的制备方法制备的质控品，和/或，上述的用于her2基因扩增检测的参考品的制备方法的参考品。
12、本专利技术具有以下有益效果：
13、本专利技术提供了一种用于her2基因扩增检测的质控品和参考品的制备方法，与细胞系的质控品或参考品相比，采用合成的质粒制备质控品和参考品，其生物材料更易于获得，且来源广，容易大量低成本制备，制得的质控品和参考品的具有良好的准确性和一致性，制备批间差异小，应用价值高。
14、通过对质粒的设计，即根据her2基因核酸片段的重复次数来制备不同her2扩增水平的质控品，该制作方法简便，能够批量生产，易于保存，可以长期保存在-20℃条件下，可用于评估her2基因检测方法准确性、重复性等性能。
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1.一种用于HER2基因扩增检测的质控品的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的用于HER2基因扩增检测的质控品的制备方法，其特征在于，所述参照基因为：位于人17号染色体上的管家基因；
3.根据权利要求1所述的用于HER2基因扩增检测的质控品的制备方法，其特征在于，在所述第一质粒或第二质粒上，所述HER2基因片段的长度为100～1000bp；
4.根据权利要求1所述的用于HER2基因扩增检测的质控品的制备方法，其特征在于，制备所述阴性质控品和阳性质控品时，所述酶切步骤所使用的限制性内切酶相同或不同；
5.根据权利要求1所述的用于HER2基因扩增检测的质控品的制备方法，其特征在于，对酶切产物进行拷贝数定量通过如下至少一种方法进行：
6.根据权利要求5所述的用于HER2基因扩增检测的质控品的制备方法，其特征在于，所述拷贝数定量后，还包括：采用稀释液对酶切产物进行稀释，以获得目标拷贝数的质控品；
7.根据权利要求5所述的用于HER2基因扩增检测的质控品的制备方法，其特征在于，所述数字PCR
8.一种用于HER2基因扩增检测的参考品的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：
9.如权利要求1-7任一项所述的用于HER2基因扩增检测的质控品的制备方法制备的质控品或权利要求8所述的用于HER2基因扩增检测的参考品的制备方法的参考品在制备HER2基因扩增检测试剂盒、或评估HER2基因检测方法性能中的应用。
10.一种试剂盒，其特征在于，其包括权利要求1-7任一项所述的用于HER2基因扩增检测的质控品的制备方法制备的质控品，和/或，权利要求8所述的用于HER2基因扩增检测的参考品的制备方法的参考品。
...【技术特征摘要】
1.一种用于her2基因扩增检测的质控品的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的用于her2基因扩增检测的质控品的制备方法，其特征在于，所述参照基因为：位于人17号染色体上的管家基因；
3.根据权利要求1所述的用于her2基因扩增检测的质控品的制备方法，其特征在于，在所述第一质粒或第二质粒上，所述her2基因片段的长度为100～1000bp；
4.根据权利要求1所述的用于her2基因扩增检测的质控品的制备方法，其特征在于，制备所述阴性质控品和阳性质控品时，所述酶切步骤所使用的限制性内切酶相同或不同；
5.根据权利要求1所述的用于her2基因扩增检测的质控品的制备方法，其特征在于，对酶切产物进行拷贝数定量通过如下至少一种方法进行：
6.根据权利要求5所述的用于her2基因扩增检测的质控品的制备方法，其特征在于，所述拷贝数定量后，...
【专利技术属性】
技术研发人员：王洁，张亚飞，王方杰，庞振国，
申请(专利权)人：迈杰转化医学研究苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：
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