【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及体外诊断试剂化学发光检测，尤其涉及一种诞液化糖链抗原化学发光检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
1、kl-6是1985年日本学者kohno在研究肺腺癌细胞肿瘤标志物时发现并命名，属于肺细胞抗原第9族，类属于上皮黏蛋白1(mucin 1，muc1)基因编码的一类高分子黏液糖蛋白，muc1是一种跨膜高分子量粘蛋白，具有高度糖基化的胞外结构域，含有分子量约为200kd的唾液酸化糖链，该糖链主要是由20个氨基酸残基组成的核心串联重复序列，具有被抗体是别的空间结构表位，kl-6是muc1 n端结构域上的唾液酸化碳水化合物抗原之一，位于细胞表面，因蛋白酶溶解其胞外区域而释放入血，以可溶性形式存在血液中。
2、kl-6对纤维母细胞产生很强的趋化作用，促进成纤维细胞增殖及迁徒，从而引起病变组织纤维化的发展，kl-6主要由ⅱ型肺泡上皮细胞，当上皮细胞受损，kl-6会进入血液循环，检测其水平有助于判断肺泡损伤、ⅱ型肺泡细胞再生和多种肺部疾病的活动情况。kl-6最初作为肿瘤的血清生物标志物，但随后的研究发现它也是间质性肺病的生物标志物，而且kl-6升高的程度与间质性肺病的病变范围密切相关。kl-6作为肺泡上皮细胞破坏和再生的指标，检测其浓度具有快速、简易经济、可重复性及无创等特点，优于高分辨肺ct、肺泡灌洗及肺活检等经典的方法，在患者中开展kl-6水平的测定，能够有效避免肺部纤维化不可逆的行成，具有一定的临床预防价值。
3、临床上常用的免疫检测方法有胶乳免疫比浊法和化学发光免疫分析法，其中，胶乳增强免疫比浊法是一
4、中国专利申请cn 111856016a、cn 114137204a和cn 114544527a均公开了一种kl-6测定试剂盒及其制备与检测方法，该三篇专利均是采用胶乳免疫比浊法进行制备和生产的，专利cn 112946255 a公开了一种涎液化糖链抗原磁微粒化学发光检测用试剂或试剂盒及其应用，该方法采用的是吖啶酯磁微粒化学发光免疫分析方法，吖啶酯发光属于闪光型，时间短，底物需要原位加底物，同时进行测光，仪器要求高，吖啶酯疏水性较强，容易非特异性吸附，带来干扰，检测结果会受影响，并且吖啶酯的稳定性较差，对于小分子项目，吖啶酯标记较为困难，标记效率较低；专利cn 117538538 a公开了一种涎液化糖链抗原化学发光检测试剂盒及其制备方法，该方法采用了生物素-链霉亲和素检测系统，该系统采用的纳米磁性材料制作成本较高，且链霉亲和素(sa)标记的纳米磁性材料在存储和使用过程中sa基团容易脱落可能存在稳定性的问题，影响检测结果的可靠性，并且生物素干扰是亲和素-生物素检测系统检测中普遍存在的问题，采用亲和素-生物素系统进行免疫检测时，如果待测样本中存如果存在高浓度的游离生物素，将与生物素化抗体竞争结合亲和素的结合位点，进而影响检测结果。
5、有鉴于此，本专利技术的目的是为解决上述问题而提供了一种kl-6磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，检测过程简单，易于操作，自动化程度高，灵敏度高，特异性好，试剂盒稳定性好，12.5min自动出结果的kl-6磁微粒化学发光检测试剂盒及其制备方法。能满足临床辅助诊断间质性肺疾病。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种诞液化糖链抗原化学发光检测试剂盒及其制备方法，解决了现有的化学发光检测试剂盒在采用吖啶酯磁微粒化学发光免疫分析方法时存在吖啶酯的稳定性较差，对于小分子项目，吖啶酯标记较为困难，标记效率较低，以及采用生物素-链霉亲和素检测系统时存在制作成本较高且检测结果可靠性较差的技术问题。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了一种诞液化糖链抗原化学发光检测试剂盒，所述试剂盒的成分包括：kl-6校准品、氨基磁珠偶联的kl-6单克隆抗体、碱性磷酸酶标记的kl-6单克隆抗体、amppd快速化学发光底物液和清洗液。
3、其中，所述kl-6校准品的具体制备方式为：先制备kl-6校准品的缓冲液，再将重组kl-6抗原溶于所述缓冲液中。
4、其中，所述氨基磁珠偶联的kl-6单克隆抗体采用包被工艺制备的具体制备方式为：
5、磁珠预处理，通过涡旋震荡重悬氨基磁珠，将100μl的微球转移至1.5ml离心管中，再将所述离心管置于磁力架上1-3min，在溶液变得澄清后，去掉上清液，并用300-500μl的缓冲液洗涤三次，再通过所述磁力架吸附去掉上清液，其中，磁珠粒径为1.5-3μm，且磁珠为氨基修饰的超顺磁性微球；
6、活化，加入新鲜配制的100ul戊二醛溶液到所述离心管中，涡旋震荡使所述磁珠充分悬浮，再用锡箔纸包裹后，在磁珠旋转仪上进行反应，处于25℃反应0.5-2h，其中，戊二醛溶液的浓度为20-50％，活化过程需避光反应，以避免戊二醛自身发生交联聚合；
7、活化后洗涤，在所述磁珠活化后，将所述离心管置于所述磁力架上1-3min，在溶液变得澄清后，去掉上清液，并用500μl的所述缓冲液洗涤三次；
8、磁珠偶联，向所述离心管中加入300-500ul偶联缓冲液，偶联kl-6单克隆抗体，再加入0.05-0.1％的表面活性剂，轻轻的混匀，用锡箔纸包裹25℃避光反应，并在磁珠旋转仪上进行偶联，其中，偶联条件为：偶联时间2-6h，或者偶联温度2-8℃时偶联时间24h，抗体与磁珠的比例为1:50-1:150；
9、封闭，将所述离心管置于所述磁力架上1-3min，在溶液变得澄清后，去掉上清液，再加入500-1000ul的封闭液，37℃封闭1-3h，并在磁珠旋转仪上进行偶联，其中，封闭液为动物血清白蛋白、酪蛋白、明胶、精氨酸、甘氨酸、表面活性剂及peg系列中的一种；
10、保存，在封闭完成后，将所述离心管置于磁性分离架上磁性分离，并在分离后去除上清液，用500μl pbs溶液或保存溶液洗涤3次后，重新悬浮于所述保存溶液中，保存温度为4℃，必要时应在保存溶液中加入0.02％的叠氮化钠，以抑制细菌的生长。
11、其中，所述碱性磷酸酶标记的kl-6单克隆抗体的具体制备方式为：
12、本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种诞液化糖链抗原化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的成分包括：KL-6校准品、氨基磁珠偶联的KL-6单克隆抗体、碱性磷酸酶标记的KL-6单克隆抗体、AMPPD快速化学发光底物液和清洗液。
2.如权利要求1所述的诞液化糖链抗原化学发光检测试剂盒，其特征在于，
3.如权利要求1所述的诞液化糖链抗原化学发光检测试剂盒，其特征在于，
4.如权利要求1所述的诞液化糖链抗原化学发光检测试剂盒，其特征在于，
5.如权利要求4所述的诞液化糖链抗原化学发光检测试剂盒，其特征在于，
6.如权利要求1所述的诞液化糖链抗原化学发光检测试剂盒，其特征在于，
7.一种诞液化糖链抗原化学发光检测试剂盒的制备方法，应用于权利要求1至权利要求6中任一项所述的诞液化糖链抗原化学发光检测试剂盒，其特征在于，包括以下步骤：
【技术特征摘要】
1.一种诞液化糖链抗原化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的成分包括：kl-6校准品、氨基磁珠偶联的kl-6单克隆抗体、碱性磷酸酶标记的kl-6单克隆抗体、amppd快速化学发光底物液和清洗液。
2.如权利要求1所述的诞液化糖链抗原化学发光检测试剂盒，其特征在于，
3.如权利要求1所述的诞液化糖链抗原化学发光检测试剂盒，其特征在于，
4.如权利要...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈婷，管志平，刘红平，
申请(专利权)人：桂林优利特医疗电子有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。