【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种重组ha基因及其在提高h7亚型流感病毒ha蛋白表达水平中的应用，属于基因工程。
技术介绍
1、甲型流感病毒(iav)属于正粘病毒科，并且迄今为止，已经鉴定了18种ha和11种na亚型的组合。iav广泛存在于野生水禽中，能够广泛传播并跨越种间障碍，在动物和人类中引起多种流行病。
2、目前，许多研究已经证明细菌载体，例如减毒沙门菌、乳酸菌等，能够通过口服免疫的方式递送保护性抗原。目前沙门菌载体递送外源抗原的方式主要通过携带原核表达质粒和真核表达质粒到宿主免疫细胞中表达外源抗原。然而，沙门菌为原核细胞，其作为载体递送病毒蛋白等需要利用宿主细胞系统表达抗原时存在显著不足，例如沙门菌递送病毒抗原在宿主真核细胞中的表达水平极为低下，导致递送病毒抗原的沙门菌候选疫苗诱导的针对病毒的免疫保护效率严重不足。
技术实现思路
1、专利技术目的：本专利技术所要解决的技术问题是提供了一种提高沙门菌递送病毒抗原在真核细胞中的表达水平，提高沙门菌载体递送病毒抗原疫苗的保护效率的方法。
2、技术方案：为解决上述技术问题，本专利技术提供一种重组ha基因，所述重组ha基因是将h9n2流感病毒ha基因的信号肽替换h7n9流感病毒ha基因1-48bp序列后得到的；所述h9n2流感病毒ha基因的genbank登录号为kj000710.1。
3、其中，所述h9n2流感病毒ha基因的信号肽的核苷酸序列如seq id no.1所示。
4、其中，所述重组ha基因的核
5、将h7 ha蛋白信号肽替换为h9 ha蛋白信号肽序列，以创建提高沙门菌递送病毒的外源抗原在真核细胞中的表达水平的方法。
6、本专利技术还提供了一种重组质粒、重组菌，其含有所述重组ha基因。
7、本专利技术还提供了h9n2流感病毒ha基因的信号肽、所述重组ha基因或所述重组质粒、重组菌在提高ha蛋白表达水平中的应用。
8、本专利技术还提供了一种提高ha蛋白表达水平的方法，包括以下步骤：将所述重组ha基因插入到表达载体，转染，即可得到高ha蛋白表达水平的细胞。
9、本专利技术还提供了一种由所述方法获得的具有高ha蛋白表达水平的细胞。
10、本专利技术还提供了一种制备具有ha蛋白高表达水平的菌株，包括以下步骤：将所述重组ha基因插入表达载体，加入感受态细胞，pcr鉴定正确克隆株即为所述具有高ha蛋白表达水平的菌株。
11、本专利技术还提供了一种利用所述方法制备的具有高ha蛋白表达水平的菌株。
12、本专利技术还提供了h9n2流感病毒ha基因的信号肽、所述重组ha基因或所述重组质粒、重组菌在制备治疗和/或预防甲型流感病毒的药物或疫苗中的应用。
13、本专利技术拟提高沙门菌递送病毒抗原在真核细胞中的表达水平，提高沙门菌载体递送病毒抗原疫苗的保护效率。
14、ha蛋白在流感病毒的整个生命周期中起着极其重要的功能，主要包括：识别并结合细胞表面受体，辅助病毒进入宿主细胞以及诱导宿主产生中和抗体。因此，ha蛋白是流感病毒疫苗的主要抗原。在前期的研究中发现，在同样条件下，含有h9 ha蛋白的真核表达质粒表达的蛋白水平显著高于h7 ha蛋白的表达，本专利技术设计将h7 ha蛋白信号肽替换为h9ha蛋白信号肽序列，以创建提高沙门菌递送病毒的外源抗原在真核细胞中的表达水平的方法。
15、有益效果：与现有技术相比，本专利技术具有如下显著优点：1、本专利技术涉及一种基于h9ha信号肽序列提高h7亚型流感病毒ha蛋白表达方法的创建及其应用，转染及沙门菌载体感染试验证明h9 ha信号肽序列替换能够显著提高h7亚型流感病毒ha蛋白表达水平；2、免疫保护实验证明h9 ha信号肽序列能显著提高rsc0130(ps-9s7m)疫苗针对h7n9病毒攻毒的保护效率；3、本专利技术为提高沙门菌递送的外源真核抗原表达水平提供了一种可行的方案，具有较大的市场应用潜力和潜在的经济效益。
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1.一种重组HA基因，其特征在于，所述重组HA基因是将H9N2流感病毒HA基因的信号肽替换H7N9流感病毒HA基因1-48bp序列后得到的；所述H9N2流感病毒HA基因的GenBank登录号为KJ000710.1。
2.根据权利要求1所述重组HA基因，其特征在于，所述H9N2流感病毒HA基因的信号肽的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
3.根据权利要求1所述重组HA基因，其特征在于，所述重组HA基因的核苷酸序列如SEQID NO.2所示。
4.一种重组质粒、重组菌，其特征在于，其含有权利要求1～3任一项所述重组HA基因。
5.核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的H9N2流感病毒HA基因的信号肽、权利要求1～3任一项所述重组HA基因或权利要求4所述重组质粒、重组菌在提高HA蛋白表达水平中的应用。
6.一种提高HA蛋白表达水平的方法，其特征在于，包括以下步骤：将权利要求1或2所述重组HA基因插入到表达载体，转染，即可得到高HA蛋白表达水平的细胞。
7.一种由权利要求6所述方法获得的具有高HA蛋白表达水平
8.一种制备具有HA蛋白高表达水平的菌株，其特征在于，包括以下步骤：将权利要求1～3任一项所述重组HA基因插入表达载体，加入感受态细胞，PCR鉴定正确克隆株即为所述具有高HA蛋白表达水平的菌株。
9.一种利用权利要求8所述方法制备的具有高HA蛋白表达水平的菌株。
10.核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的H9N2流感病毒HA基因的信号肽、权利要求1～3任一项所述重组HA基因或权利要求4所述重组质粒、重组菌在制备治疗和/或预防甲型流感病毒的药物或疫苗中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种重组ha基因，其特征在于，所述重组ha基因是将h9n2流感病毒ha基因的信号肽替换h7n9流感病毒ha基因1-48bp序列后得到的；所述h9n2流感病毒ha基因的genbank登录号为kj000710.1。
2.根据权利要求1所述重组ha基因，其特征在于，所述h9n2流感病毒ha基因的信号肽的核苷酸序列如seq id no.1所示。
3.根据权利要求1所述重组ha基因，其特征在于，所述重组ha基因的核苷酸序列如seqid no.2所示。
4.一种重组质粒、重组菌，其特征在于，其含有权利要求1～3任一项所述重组ha基因。
5.核苷酸序列如seq id no.1所示的h9n2流感病毒ha基因的信号肽、权利要求1～3任一项所述重组ha基因或权利要求4所述重组质粒、重组菌在提高ha蛋白表达水平中的...
【专利技术属性】
技术研发人员：石火英，孙王杨吉，朱睿，李玉安，李泽伟，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：
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