【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物传感检测领域，具体涉及一种基于m6a表观遗传碱基修饰的atp核酸适配体及其应用。
技术介绍
1、n6-甲基腺嘌呤(m6a)是指腺嘌呤a的第六位氮原子的甲基化修饰，是真核细胞中最普遍的表观遗传机制之一。m6a修饰在调节mrna的成熟、翻译和降解方面起着关键作用。m6a甲基化修饰在肿瘤的发生发展中发挥着不同的作用。m6a甲基化修饰动态变化且可逆转，主要调控因子包括甲基转移酶(writers)、去甲基化酶(erasers)和m6a甲基化阅读蛋白(readers)三部分。而作为m6a去甲基化酶之一的fto(脂肪和肥胖相关蛋白)，其异常表达是各种人类疾病(如急性髓系白血病aml、黑色素瘤、乳腺癌和宫颈癌等)发病机制的基础，这也表明fto可以作为新的诊断生物标志物，并成为包括肿瘤在内的疾病治疗靶点。
2、然而，由于n6-甲基的尺寸较小且具有一定化学惰性，使得fto的m6a去甲基酶活性在细胞中的检测仍具挑战性。因此，目前只有少数方法被报告用于分析。这包括使用hplc或maldi-tof质谱法检测去甲基化dna/rna产物，酶消化底物的凝胶电泳法，荧光标记单链dna底物的荧光分析，m6a特异性抗体的免疫检测以及最近的基于rna适配体和mazf内切酶的荧光测定。虽然这些方法能对fto进行分析，但其中许多方法受到灵敏度差，低通量的限制，并且离线系综分析脱离了活细胞环境，忽略细胞间异质性，丢失活细胞关键动态信息。同时，迄今为止，实现实时分析活细胞中的m6a脱甲基酶活性的方法较少，且存在稳定性差、反应效率低等问题，导致无法
技术实现思路
1、本专利技术的专利技术思路是：本专利技术开发了一种由m6a位点特异性修饰的atp核酸适配体传感器以实现活体内去甲基化酶fto检测的新方法。该核酸适配体传感器(asp sensor)由aptamer、poly-t linker和封闭链组成一个完整的发夹结构，cy3荧光基团以及其相应淬灭基团bhq2分别修饰于asp sensor的5’和3’端，使得初始荧光信号为淬灭状态。首先，aspsensor对于atp的识别结合能力被aptamer关键碱基位点的m6a甲基化修饰所抑制，使得aptamer与atp的结合能小于与封闭链结合的自由能。当m6a-asp sensor由脂质体递送到细胞内时，细胞质内内源性的去甲基化酶fto对m6a-asp sensor中的m6a进行氧化去甲基化，恢复asp sensor对内源性atp的识别结合活性，aptamer与atp的结合能大于与封闭链结合的自由能，使得探针变构恢复荧光，从而实现对内源性去甲基化酶fto的成像检测。
2、本专利技术第一方面的目的，在于提供一种核酸适配体。
3、本专利技术第二方面的目的，在于提供一种m6a修饰的核酸适配体传感器。
4、本专利技术第三方面的目的，在于提供本专利技术第一方面的核酸适配体、本专利技术第二方面的m6a修饰的核酸适配体传感器在制备产品中的应用。
5、本专利技术第四方面的目的，在于提供一种试剂。
6、本专利技术第五方面的目的，在于提供一种试剂盒。
7、本专利技术第六方面的目的，在于提供一种成像系统。
8、本专利技术第七方面的目的，在于提供一种方法。
9、为了实现本专利技术上述的目的，本专利技术采取的技术方案是：
10、本专利技术的第一个方面，提供一种核酸适配体，其特征在于：
11、所述核酸适配体的序列如seq id no.1所示。
12、所述核酸适配体的第10位、和/或第23位腺嘌呤具有m6a修饰。
13、优选地，所述核酸适配体的第10位腺嘌呤具有m6a修饰。
14、本专利技术的第二个方面，提供一种m6a修饰的核酸适配体传感器，所述m6a修饰的核酸适配体传感器包括核酸适配体序列、poly-t序列、封闭链序列；所述m6a修饰的核酸适配体传感器的两端具有荧光基团和淬灭基团。
15、优选地，所述m6a修饰的核酸适配体传感器从5’端到3’端依次为核酸适配体序列、poly-t序列、封闭链序列。
16、优选地，所述poly-t序列的长度为3～25个碱基，进一步优选地，为4～20个碱基。
17、在本专利技术的一些实施方式中，所述poly-t序列的长度为12个t碱基序列。
18、优选地，所述封闭链序列的长度为4～10个碱基。
19、优选地，所述封闭链序列与核酸适配体序列的5’端反向互补配对。
20、在本专利技术的一些实施方式中，所述封闭链序列具有6个碱基，与核酸适配体序列5’端的前6个碱基互补配对。
21、优选地，所述m6a修饰的核酸适配体传感器的5’端和3’端具有稳定碱基。
22、优选地，所述m6a修饰的核酸适配体传感器5’端的稳定碱基与3’端的稳定碱基互补配对。
23、优选地，所述稳定碱基个数为1～3个。
24、优选地，所述稳定碱基选自g或c。
25、在本专利技术的一些实施方式中，所述稳定碱基的个数为一个，其中5’端的稳定碱基为c，3’端的稳定碱基为g。同理，也可以是5’端的稳定碱基为g，3’端的稳定碱基为c。
26、优选地，所述荧光基团选自fam、hex、rox、tamra、joe、cy3、cy5、vic中的至少一种。
27、优选地，所述淬灭基团选自dabcyl、bhq1、bhq2、bhq3、mgb、tamra中的至少一种。
28、优选地，所述核酸适配体序列具有m6a修饰；
29、优选地，所述核酸适配体的序列如seq id no.1所示，所述核酸适配体的第10位、和/或第23位腺嘌呤具有m6a修饰。
30、在本专利技术的第二个方面中，所述核酸适配体传感器的设计思路是，通过引入poly-t序列、封闭链序列，使得传感器本身形成回环的发卡结构，当不具有atp时，封闭链序列与核酸适配体序列的5’端序列互补结合，使得传感器两端的荧光基团与淬灭基团相接近，使得初始荧光为淬灭状态。当具有atp时，核酸适配体序列与与atp的结合能大于与封闭链结合的自由能，使得传感器构型发生改变，荧光基团与淬灭基团分离，传感器恢复荧光信号，实现对atp的检测。
31、基于该思路，进一步地，所述m6a修饰的核酸适配体传感器的设计思路是，在核酸适配体传感器的基础上，对核酸适配体序列进行m6a修饰，使得初始的核酸适配体序列与atp的结合位点被封闭，核酸适配体序列无法结合atp。m6a甲基化修饰的引入，使得核酸适配体传感器的功能从检测atp转变为检测去甲基化酶，当不具有去甲基化酶时，核酸适配体序列无法结合a本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种核酸适配体，其特征在于：
2.一种m6A修饰的核酸适配体传感器，其特征在于：
3.根据权利要求2所述的m6A修饰的核酸适配体传感器，其特征在于：
4.权利要求1所述的核酸适配体、权利要求2～3任一项所述的m6A修饰的核酸适配体传感器在制备产品中的应用，所述产品用于a1)～a5)中的任一种：
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：
6.根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于：
7.一种试剂，包括权利要求1所述的核酸适配体、和/或权利要求2～3任一项所述的m6A修饰的核酸适配体传感器。
8.一种试剂盒，包括权利要求1所述的核酸适配体、和/或权利要求2～3任一项所述的m6A修饰的核酸适配体传感器；
9.一种成像系统，包括以下构件：
10.c1～c2)中任一项的方法，包括使用权利要求7所述的试剂、和/或权利要求8所述的试剂盒的步骤；
【技术特征摘要】
1.一种核酸适配体，其特征在于：
2.一种m6a修饰的核酸适配体传感器，其特征在于：
3.根据权利要求2所述的m6a修饰的核酸适配体传感器，其特征在于：
4.权利要求1所述的核酸适配体、权利要求2～3任一项所述的m6a修饰的核酸适配体传感器在制备产品中的应用，所述产品用于a1)～a5)中的任一种：
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：
6.根据权利要求4或5所...
【专利技术属性】
技术研发人员：许宇智，施亚坤，戴宗，潘逸航，柳思扬，
申请(专利权)人：中山大学附属第七医院深圳，
类型：发明
国别省市：
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