【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
专利
本专利技术涉及用于生产含有防腐剂的结合疫苗(conjugate vaccine)的方法。本专利技术特别涉及用于生产结合疫苗的方法，其中防腐剂是疏水性和粘稠性的(例如2-苯氧基乙醇(2-pe))。
技术介绍
0、专利技术背景
1、细菌细胞表面多糖，特别是荚膜多糖，作为治疗剂已经变得越来越重要。通常，细胞表面多糖与诱导体内免疫反应有关。
2、尽管多糖本身具有免疫原性，但多糖与蛋白质载体(糖缀合物)的缀合已被用于提高免疫原性，特别是在婴儿和老年人中的免疫原性。糖结合疫苗通常通过将免疫原性差的糖抗原与蛋白质载体共价连接而获得，并且在预防许多致命的传染病中发挥重要作用。在结合疫苗的制备过程中，培养选定的细菌菌株来提供产生疫苗所需的多糖。通常在发酵罐中培养细胞，并在发酵结束时诱导裂解。然后收集裂解液用于包围所述细菌细胞的荚膜多糖的下游纯化和回收。与所述载体蛋白缀合后，所述多糖被包含在最终的疫苗产品中，并赋予疫苗目标人群对细菌的免疫力。
3、肺炎链球菌(streptococcus pneumoniae)引起的肺炎球菌病是全球更重要的细菌病原体之一。肺炎球菌病是一组复杂的疾病，并且包括侵袭性感染，例如菌血症/脓毒症、脑膜炎、肺炎和中耳炎，其影响儿童和成人。prevnar 13(也称为“prevenar 13”并在本文称为“prev(e)nar 13”)是来自十三种肺炎球菌血清型(1、3、4、5、6a、6b、7f、9v、14、18c、19a、19f和23f)的多糖制剂，它们分别与crm197(来自白
4、通过仅制造和使用单剂量疫苗制剂，可以减少或避免在疫苗中添加防腐剂的需要。然而，使用不含防腐剂的单剂量制剂增加疫苗接种的总体成本，并危及免疫接种计划的有效性，尤其是在发展中国家。此外，一起去除多剂量瓶中的防腐剂并不被视为优选方案，特别是在冷藏有限和医疗保健标准不理想的国家(drain等人，bull world health organ81(10):726–731(2003)。因此，尽管多剂量瓶看起来最适合于产生较便宜的疫苗，但仍然希望用至少一种防腐剂配制多剂量疫苗，以保护受试者免受在多次使用期间或在一次或多次非无菌事件之后无意中引入疫苗的微生物的侵害。
5、wo 2011/151760公开了多价免疫原性组合物，其包含来自肺炎链球菌血清型的多种荚膜多糖和2-苯氧基乙醇(2-pe)。
6、本专利技术人已经发现，配制含有防腐剂(例如2-pe)的结合疫苗面临着重大挑战，尤其是大规模生产时。在现有技术中，2-pe已被添加到疫苗配制的最后阶段(添加到药物产品中，例如参见wo 00/62801、wo 00/56360或khandke l.等人vaccine 29(2011)7144–7153)。然而，最后阶段添加2-pe需要对相对高浓度的2-pe进行无菌过滤。已经发现，对如此高浓度的2-pe进行无菌过滤对过滤器润湿和使用前过滤器的完整性提出了挑战。
7、因此，需要用于配制包含防腐剂(例如2-pe)的多价结合疫苗的改进方法。特别地，期望的是耗时更少并且步骤更少的方法。
技术实现思路
0、专利技术概述
1、在一个方面，本专利技术提供了用于生产包含防腐剂的结合疫苗的方法，所述方法包括以下步骤：
2、(a)将防腐剂从本体溶液添加到包含一种或多种缀合物的溶液中，其中所述防腐剂无需无菌过滤即可添加；并且
3、(b)随后对包含所述防腐剂和所述缀合物的混合物进行无菌过滤。
4、在一个方面，所述方法还包括随后添加佐剂的步骤(c)。
5、在一个方面，所述防腐剂在本体溶液的浓度下是疏水性的和粘稠性的。
6、优选地，所述本体溶液是纯2-pe。
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1.用于生产包含防腐剂的结合疫苗的方法，所述方法包括以下步骤：
2.权利要求1的方法，其进一步包括随后添加佐剂的步骤(c)。
3.权利要求2的方法，其中所述佐剂是磷酸铝。
4.权利要求3的方法，其中所述疫苗中磷酸铝的最终浓度为约0.25mg/ml。
5.权利要求1-4中任一项的方法，其中在所述本体溶液浓度下所述防腐剂的粘度在25℃下为约15至约25厘沲。
6.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述防腐剂是2-苯氧基乙醇(2-PE)、苯酚、间甲酚、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯或硫柳汞。
7.权利要求1-6中任一项的方法，其中所述本体溶液是纯2-苯氧基乙醇(2-PE)。
8.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述防腐剂为2-PE，并且步骤(a)之后溶液中2-PE的浓度为约15mg/ml至约17mg/ml。
9.权利要求1-8中任一项的方法，其中所述疫苗中2-PE的最终浓度为约9mg/ml或约10mg/ml。
10.权利要求1-9中任一项的方法，其中所述缓冲液包含琥珀酸盐，
11.权利要求10的方法，其中：
12.权利要求1-11中任一项的方法，其中添加防腐剂的所述溶液具有约5.8至约6.0的pH。
13.权利要求1-12中任一项的方法，其中以约0.5ml/min/L至约5.0ml/min/L包含一种或多种缀合物、缓冲液、盐和表面活性剂的溶液的添加速率添加所述防腐剂。
14.权利要求1-13中任一项的方法，其中使用蠕动泵添加所述防腐剂。
15.权利要求1-14中任一项的方法，其中在连续混合下添加所述防腐剂，并且在添加所述防腐剂和开始混合之间没有延迟，并且其中：
16.权利要求1-15中任一项的方法，其中步骤(b)的所述过滤包括使用具有约0.1μm、约0.15μm或约0.2μm的标称保留范围的过滤器。
17.权利要求16的方法，其中所述过滤器包含具有约0.5μm的标称保留范围的预过滤器。
18.权利要求1-17中任一项的方法，其中步骤(b)的所述过滤包括使用具有200-1000L/m2、250-1000L/m2或300-1000L/m2的过滤容量的过滤器。
19.权利要求1-18中任一项的方法，其中步骤(b)的所述过滤包括使用包含聚醚砜(PES)的过滤器。
20.权利要求1-19中任一项的方法，其中添加防腐剂的所述溶液是包含来自不同的肺炎链球菌血清型的7至25种糖缀合物的肺炎球菌缀合物组合物。
21.权利要求1-19中任一项的方法，其中添加防腐剂的所述溶液是20价肺炎球菌糖缀合物组合物，其中所述20种糖缀合物来自肺炎链球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F和33F。
22.权利要求20或21的方法，其中所有糖缀合物均与CRM197缀合。
23.权利要求1-19中任一项的方法，其中添加防腐剂的所述溶液为20价肺炎球菌缀合物组合物，其中所述20种糖缀合物来自肺炎链球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F和33F，其中所述糖缀合物全部与CRM197缀合，所述溶液包含约7.5μg/ml的各荚膜多糖血清型1、3、4、5、6A、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F和33F以及约7.5μg/ml血清型6B的荚膜多糖、约0.033％(w/w)聚山梨醇酯80、约150mM氯化钠和约5.5mM琥珀酸盐缓冲液pH 5.8。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.用于生产包含防腐剂的结合疫苗的方法，所述方法包括以下步骤：
2.权利要求1的方法，其进一步包括随后添加佐剂的步骤(c)。
3.权利要求2的方法，其中所述佐剂是磷酸铝。
4.权利要求3的方法，其中所述疫苗中磷酸铝的最终浓度为约0.25mg/ml。
5.权利要求1-4中任一项的方法，其中在所述本体溶液浓度下所述防腐剂的粘度在25℃下为约15至约25厘沲。
6.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述防腐剂是2-苯氧基乙醇(2-pe)、苯酚、间甲酚、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯或硫柳汞。
7.权利要求1-6中任一项的方法，其中所述本体溶液是纯2-苯氧基乙醇(2-pe)。
8.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述防腐剂为2-pe，并且步骤(a)之后溶液中2-pe的浓度为约15mg/ml至约17mg/ml。
9.权利要求1-8中任一项的方法，其中所述疫苗中2-pe的最终浓度为约9mg/ml或约10mg/ml。
10.权利要求1-9中任一项的方法，其中所述缓冲液包含琥珀酸盐，所述盐包含氯化钠，并且所述表面活性剂包含聚山梨醇酯80。
11.权利要求10的方法，其中：
12.权利要求1-11中任一项的方法，其中添加防腐剂的所述溶液具有约5.8至约6.0的ph。
13.权利要求1-12中任一项的方法，其中以约0.5ml/min/l至约5.0ml/min/l包含一种或多种缀合物、缓冲液、盐和表面活性剂的溶液的添加速率添加所述防腐剂。
14.权利要求1-13中任一项的方法，其中使用蠕动泵添加所述防腐剂。
15.权利要求1-14中任一项的方法，其中在连续混合下添加所述防腐剂，并且在添加所述防腐剂和开始混合之间没有延迟，并且其中：
16.权利要求1-15中任一项的方...
【专利技术属性】
技术研发人员：M·D·布鲁赫扎勒，C·J·格罗弗，A·J·兰福德，
申请(专利权)人：辉瑞公司，
类型：发明
国别省市：
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